龙图腾网恭喜刘淑艳;蒋丹;万超;孙晓飞申请的专利豆粉中黄曲霉定性标准样品及其制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN105734125B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2021-01-12发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：201610099671.7，技术领域涉及：C12Q1/6895(20180101)；该发明授权豆粉中黄曲霉定性标准样品及其制备方法是由刘淑艳;蒋丹;万超;孙晓飞;白璐;郑江设计研发完成，并于2016-02-23向国家知识产权局提交的专利申请。

本豆粉中黄曲霉定性标准样品及其制备方法在说明书摘要公布了：本发明属于生物技术领域，特别涉及一种豆粉中黄曲霉定性标准样品及其制备方法。本发明根据黄曲霉具有分类学意义的技术指标，解决了黄曲霉实物标准样品溯源参照系与参照指标问题，并应用于本标准样品的定值分析中，在标准样品定性测试理论的研究成果基础上，在国家生物安全标准样品体系框架下，以来源明确的产毒真菌黄曲霉模拟自然污染豆粉样品，采集对数生长期的黄曲霉ATCC28539孢子污染无菌豆粉，混合仪拍打混合，分装，冻干制备出一种生物及产毒信息完整的黄曲霉实物标准样品，获得具有真正溯源意义的黄曲霉实物标准样品，是国内首次分类定级标准样品的研制，具有重要的意义。

本发明授权豆粉中黄曲霉定性标准样品及其制备方法在权利要求书中公布了：1.一种豆粉中黄曲霉定性标准样品，其特征在于：所述豆粉中黄曲霉定性标准样品的溯源指标如下表所示：表1豆粉中黄曲霉定性标准样品溯源指标 ；所述产毒基因簇为aflR基因、Aflt1基因、Aflt2基因、Nor-1基因、Omt-1基因、Ver-1基因；所述豆粉中黄曲霉定性标准样品包含的序列为：内转录间隔区基因（ITS）序列：TCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCGAGTGTAGGGTTCCTAGCGAGCCCAACCTCCCACCCGTGTTTACTGTACCTTAGTTGCTTCGGCGGGCCCGCCATTCATGGCCGCCGGGGGCTCTCAGCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGGAGACACCACGAACTCTGTCTGATCTAGTGAAGTCTGAGTTGATTGTATCGCAATCAGTTAAAACTTTCAACAATGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAGTGTGAATTGCAGAATTCCGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCATCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGTCGTCGTCCCCTCTCCGGGGGGGACGGGCCCCAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGATCCTCGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCTTGCCGAACGCAAATCAATCTTTTCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGA；核糖体rRNA18S基因（18S）序列：GTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCACTTTATACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACATGGATACCTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAACCTCGACTTCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAATGCCCTTCGGGGCTCCTTGGTGATTCATAATAACTTAACGAATCGCATGGCCTTGCGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGTGGCCTACCATGGTGGCAACGGGTAACGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACGGGGCTCTTTTGGGTCTCGTAATTGGAATGAGTACAATCTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGTCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGAGTACTGGTCCGGCTGGACCTTTCCTTCTGGGGAACCTCATGGCCTTCACTGGCTGTGGGGGGAACCAGGACTTTTACTGTGAAAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTTTGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTCGGGGGCGTCAGTATTCAGCTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGCTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTCGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGGCGGTGTTTCTATGATGACCCGCTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTTTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAG；核糖体rRNA28S基因（28S）序列：GTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGCTTGCGACCAGACTCGCCTCCAGGGTTCAGCCGGCATTCGTGCCGGTGTACTTCCCTGGGGGCGGGCCAGCGTCGGTTTGGGCGGCCGGTCAAAGGCTCCCGGAATGTAGTGCCCTCCGGGGCACCTTATAGCCGGGAGTGCAATGCGGCCAGCCTGGACCGAGGAACGCGCTTCGGCACGGACGCTGGCATAATGGTCGTAAACGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTC；转录调节子编码基因（aflR）序列：CGCGCGAGATACTTCTTATACTAAACCTCGAATTGCCATTCCACTGACGACCGGCGGGGGAGGACAGCCTTCCAATTACTATATGGCAAGTTATATGCCCTCTTCAGCACCAAATGGGTCTTTCTCGTCGCCCTGGGTATTTTCGAAGTGGGCTC；易化子超家族转运蛋白基因（Aflt1）序列：GCACCAAATGGGTCTTTCTCGTCGCCCTGGGTATTTTCGAAGTGGGCTCTCTGATCTGCGGCGTCGCACCGTCGTCCGTAGTTCTCATCGTCGGCCGTGCCATCGCGGGAGTGGGGAGCTCGGGGATCTTTACAGGTGCTCTGGTCACCATGCGGCATATTGTGCCCTTGGCCAAGCGACCAGTTTACATGGGGCTCTTGGGGGGGATGTACGGGATTGCGTCAGTGGCAGGCCCTCTGGTAAGTCACCGTTGATGCACCCGGCGGCTGTGACGGGCACCATTAACCGTTCCTTGTGAATCGCAGTTGGGGGGCGCCTTCACGAACGAAGTGACCTGGCGATGGTGCTTCTACATCAATCTTCCGGTCGGAGGGGTCACCGCTGTGGTTATCCTGTTTCTTCTTCGGATCCCCAAATCGGCGGACCTGCGCACGCATGGCGCCTGGGAGATGTTGAAAGGCTTAGATCCGTTAGGCACGATTGTCTTCACCCCGTCCATCATCTGCGTTCTCCTGGCGCTCCAGTGGGGTGGGGTGGACTACGCTTGGTCGAATGGACGCATTATCGCGCTGTTTGTTCTCTTCGGCGTGCTCCTCATCACATTTATCGTCATTCAGGTCCTCATGAAGGATAACGCCACCGGTATGGTATTCCTCCGTTGGTTTCCATCCGTTCTGTAAGCCTCGCTCACCACTCCCGCCAGTACCGATCAAAGTAGCCTCTCAGCGATCCGTAGCATGCGCCTCCGTCTTCGTCTTCTTCATCGGCGCCTCCATGTTCGTGATGATCTACTATGTGCCGATCTGGGTAACCTGCCTCTCCCTAGTCCCCTCCCTGTGTGATGTGTCGCACCACGCCACGATATTGCTAATGCATATCCAATAGTTCCAAGCCATTCGCAACCAATCACCCGTGCAGGCAGGCATTGATTCTATTGCCTTGATTTTGGCCAATACCGCCGGTGCCATCATCTCTGGCGCCGTGACCAATAAGACAGGGCACTACGCCCACTGGTTTATTGTCAGTAGCGTGATCATGTCGATTGGCGCCGGCTGCCTTACCCTCTTCACCGTGGAT；易化子超家族转运蛋白基因（Aflt2）序列：CGCGCGAGATACTTCTTATACTAAACCTCGAATTGCCATTCCACTGACGACCGGCGGGGGAGGACAGCCTTCCAATTACTATATGGCAAGTTATATGCCCTCTTCAGCACCAAATGGGTCTTTCTCGTCGCCCTGGGTATTTTCGAAGTGGGCTC；降散盘衣酸还原酶基因（Nor-1）序列：ACCGCTACGCCGGCGCTCTCGGCACTAACCGTCGCTGAAGGCAGTCGGATGATCATAGTGCAGCTTAACTGCGACTCGGAAACTGATGCCCAGGCAGCCGTCCAGACATTGCGGGAGGAGCACGGGGTGACGCACTTGGACGTGGTGGTTGCCAATGCGGCCATGGCGACGAACTTTGGGCCCGCGTCCACCATGCCCCTCGAGCATCTCCAGGCACACATGATGGTCAACATGTATGCTCCCGTCCTACTGTTTCAGGCAACCCGCCTGATGCTGCAGCAGTCCAAGCAACAGGCCAAGTTTGTCTTGATCGGCGCCCCGATCAGCACCATCACCAACATGCACGACTATGCGCGGGCCCCACTGACGGCGTACGGAGTGTCGAAGCTGGCGGCCAAC；柄曲霉素转甲氧基酶基因（Omt-1）序列：GTGGACGGACCTAGTCCGACATCACTCGACACAATCGTCGCCGCGACCGGAGTCTCCGAGGATTTACTACGTATGAGCTTCCATGTCTATAGGTCATCCACTGAAAGGCAGTGCATTAATCAATATTCAGGACGGATTCTTCGAGGATGTGCCCAGCGCTTCATCTTTGAGGAGGTTGCCCCTGACCAATACGCCCACACAGATGCCTCAAAGATGCTGCGAGTGACGGGTATTCATGCCTTGGTTGGATTCTCGTGAGTCTCCTTCTTTAACAATAAACTACCAGATGTCCTCACCAGGGAGACCGAGTTAGATGTGACGAAGTGATGCGGTCGGGTGCCTACTTTTCCGACTTCTTGCAGCAGACGAAAGGCAAACCTCCGAGTTGGAATGTGCCTTCACCTTTCTCATTGGCATTTGATCGTAGGTATTCCACTCTATCTAGATAGGAACGCAGCTGAAATGCGAGAAACAGCTACCAAAGGGCTATTTGACTATTACAGCACTGTGGACGAGGTTCGCGGCCGCCGCTTTGATCTAGGTATGGGTGGCACCGAAGCCACGAAGCCACTGGTAGAGGAGATGTTTGATTTCGACAGTCTACCTGAGGGGAGCACCGTTGTCGATGTGGGCGGCGGTCGTGGTCATCTCAGCCGACGGGTTTCGCAAAAGCATCCCCACCTCAGGTTCATCGTACAGGACCTGCCTGCCGTCATTCACGGAGTTGAGGACACTGATAAAGTCACCATGATGGAGCATGACATTCGGCGCCCCAACCCAGTGCGTGGCGCCGAC；杂色曲霉素A脱氢酶基因Ver-1序列：TGAACTACGCCCACTCCCGGGAGGCCGCGGAGAAGGTAGTTCAACAGATCAAGGCCAACGGCACCGACGCTATCGCAATCCAGGCCGATGTCGGGGATCCTGAGGCGACGGCGAAGTTAATGGCGGAGACGGTGCGCCATTTTGGCTACCTGGACATTGTGTCATCGAACGCTGGAATTGTATCGTTCGGTCACCTGAAAGACGTGACCCCAGAAGTATGAACCACAGATAACGCATTCAAGGCATATGCTAATGAAAACATTAGGAGTTTGACCGGGTCTTCCGGGTCAACACTCGTGGCCAGTTCTTCGTGGCGCGGGAGGCCTATCGCCATATGCGGGAAGGAGGCCGGATTATCCTGACCAGCTCTAACACCGCTTGCGTCAAAGGGGTACCCAAGCATGCTGTATACTCCGGGTCCAAAGGAGCTATTGACACCTTTGTTCGCTGCATGGCCATTGACTGCGGAGACAAGAAAATCACCGTGAATGCGGTGGCTCCTGGAGCCATCAAGACTGATATGTTTTTGCCTGTGTCGCGGGAGTATATCCCC；所述的豆粉中黄曲霉定性标准样品通过以下方法制备：第一步：培养黄曲霉ATCC28539至对数生长期，采集孢子加入到10-30mL的0.5%的豆粉水溶液中，目标菌添加量约为2×105CFUmL；第二步：样品置于干净无菌袋中，混合仪拍打混合，再将混匀好的上述溶液加入到总体的豆粉水溶液中，重复混合步骤；第三步：将步骤二中制备好的菌液分装0.5mL瓶，放置橡胶盖，但不要塞紧，置于中试冻干机中低温真空冷冻干燥，制备成混合冻干粉；冷冻工艺参数如下：1）预冷阶段：隔板温度5℃；2）冷冻阶段：设置隔板温度为10℃，每个阶段降低10℃，至-50℃，每个温度阶段运行时间分别为1h；3）主干燥阶段：隔板温度-50℃，运行时间0.5h，真空度0.2mbar；隔板温度-40℃，运行时间7h，真空度0.4mbar；隔板温度-35℃，运行时间7h，真空度0.6mbar；隔板温度-25℃，运行时间5h，真空度0.8mbar；隔板温度-15℃，运行时间4h，真空度1.0mbar；隔板温度-5℃，运行时间2h，真空度1.2mbar；4）二次干燥阶段：隔板温度0℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度15℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度25℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar。

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