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龙图腾网获悉天津大学申请的专利用于DNA循环迭代组装的系统及方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN112501191B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2023-09-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202011116869.4，技术领域涉及：C12N15/70；该发明授权用于DNA循环迭代组装的系统及方法是由元英进;周见庭设计研发完成，并于2020-10-19向国家知识产权局提交的专利申请。

本用于DNA循环迭代组装的系统及方法在说明书摘要公布了：本发明涉及生物技术领域，特别涉及用于DNA循环迭代组装的系统及方法。本发明的循环迭代策略采用四个供体质粒循环利用，采用四个Cas9切割位点和两个筛选标记的设计；本发明中Cas9基因、λRed系统、telN基因是采用质粒形式实现，Cas9基因、λRed系统、telN基因整合到大肠杆菌基因组上可以的达到同样DNA组装的效果。该方法一方面不需要对DNA进行繁琐的体外抽提、酶切、回收等操作，另一方面避免传统大片段DNA组装需要制做原生质体等感受态细胞过程，具有操作简单自动化程度高、成本低等优点。该方法连续组装4轮后，5个DNA片段的组装阳性率可达98.4％，具有DNA组装阳性率高的优点。

本发明授权用于DNA循环迭代组装的系统及方法在权利要求书中公布了：1.DNA组装的方法，其特征在于，提供用于DNA循环迭代组装的系统，所述系统包括供体系统和受体系统；所述供体系统包括接合转移辅助元件和供体元件；所述接合转移辅助元件包括氨苄青霉素抗性质粒；所述供体元件为环形质粒，包括下一轮待组装DNA片段、本轮组装Cas9切割位点、下一轮组装Cas9切割位点、sgRNA元件和筛选标记，所述供体元件包括第一供体元件、第二供体元件、第三供体元件和第四供体元件；所述第一供体元件包括下一轮待组装DNA片段DNA2、本轮组装Cas9切割位点T1、下一轮组装Cas9切割位点T2、sgRNA元件sgRNAT1和筛选标记aadA；所述第二供体元件包括下一轮待组装DNA片段DNA3、本轮组装Cas9切割位点T2、下一轮组装Cas9切割位点T3、sgRNA元件sgRNAT2和筛选标记aac3IV；所述第三供体元件包括下一轮待组装DNA片段DNA4、本轮组装Cas9切割位点T3、下一轮组装Cas9切割位点T4、sgRNA元件sgRNAT3和筛选标记aadA；所述第四供体元件包括下一轮待组装DNA片段DNA5、本轮组装Cas9切割位点T4、下一轮组装Cas9切割位点T1、sgRNA元件sgRNAT4和筛选标记aac3IV；所述受体系统包括切割重组辅助质粒和受体元件；所述切割重组辅助质粒包括卡那霉素抗性质粒；所述受体元件为线形质粒，包括细菌人工染色体（BAC）骨架、telN基因、Cat筛选标记、本轮待组装DNA片段、本轮组装Cas9切割位点、端粒结构；所述本轮待组装DNA片段与所述下一轮待组装DNA片段含有100bp~500bp的同源序列；基于所述系统，通过接合转移作用将所述供体元件从所述供体系统转移到所述受体系统中，包括：第一轮DNA组装：通过接合转移作用，将第一供体元件转移到受体系统中，在telN的作用下，所述第一供体元件线形化，sgRNAT1表达，引导Cas9切割T1位点，本轮待组装DNA片段DNA1和下一轮待组装DNA片段DNA2借助其同源序列组装成1条DNA，获得第二受体元件；第二轮DNA组装：通过接合转移作用，将第二供体元件转移到受体系统中，在telN的作用下，所述第二供体元件线形化，sgRNAT2表达，引导Cas9切割T2位点，本轮待组装DNA片段DNA1+DNA2与下一轮待组装DNA片段DNA3借助其同源序列组装成1条DNA，获得第三受体元件；第三轮DNA组装：通过接合转移作用，将第三供体元件转移到受体系统中，在telN的作用下，所述第三供体元件线形化，sgRNAT3表达，引导Cas9切割T3位点，本轮待组装DNA片段DNA1+DNA2+DNA3与下一轮待组装DNA片段DNA4借助其同源序列组装成1条DNA，获得第三受体元件；第四轮DNA组装：通过接合转移作用，将第四供体元件转移到受体菌中，在telN的作用下，所述第四供体元件线形化，sgRNAT4表达，引导Cas9切割T4位点，本轮待组装DNA片段DNA1+DNA2+DNA3+DNA4与下一轮待组装DNA片段DNA5借助其同源序列组装成1条DNA，获得第四受体元件；基于上述步骤完成四轮DNA循环组装，通过供体元件、切割位点T1~T4、筛选标记的循环利用，组装过程可以继续循环进行。

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