浙江工业大学汪晶获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江工业大学申请的专利一种用于检测皮克级恩诺沙星的检测体系及其检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN113238037B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2023-09-26发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202110473092.5,技术领域涉及:G01N33/53;该发明授权一种用于检测皮克级恩诺沙星的检测体系及其检测方法是由汪晶;黄梅;蒋晨星;黄亮设计研发完成,并于2021-04-29向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种用于检测皮克级恩诺沙星的检测体系及其检测方法在说明书摘要公布了:本发明一种用于检测皮克级恩诺沙星的检测体系及其检测方法,本发明的检测体系将油相金纳米颗粒与巯基化介孔二氧化硅球组装合成富金构建体,再进行羧基化修饰,偶联链霉亲和素和生物素化抗体制得免疫微球,生物素化抗体即为生物素标记的恩诺沙星单克隆抗体,通过链霉亲和素与生物素的作用力结合恩诺沙星单克隆抗体。待检测的恩诺沙星与试纸条T线上的包被抗原共同竞争免疫微球的单克隆抗体,T线上的测量信号强度与检测的恩诺沙星的浓度呈反比,由此可对恩诺沙星定量检测。本发明对恩诺沙星可实现超灵敏检测,可视化检测限可达到0.0625ngmL,定量检测限可达0.0013ngmL。
本发明授权一种用于检测皮克级恩诺沙星的检测体系及其检测方法在权利要求书中公布了:1.一种用于检测皮克级恩诺沙星的检测体系,其特征在于所述检测体系包括用于检测恩诺沙星的免疫微球,该免疫微球的制备方法为:将油相金纳米颗粒与巯基化介孔二氧化硅球组装合成富金构建体,再进行羧基化修饰,然后偶联链霉亲和素和生物素化抗体,即制得免疫微球;其中,所述生物素化抗体即为生物素标记的恩诺沙星单克隆抗体;所述免疫微球的具体制备步骤如下:1)油胺修饰的金纳米颗粒AuNPs的合成:在氩气下将HAuCl4·4H2O加入甲苯中,并加入油胺,于90~105℃下回流搅拌反应5~7h;反应结束后,加入乙醇,摇晃至有沉淀产生,离心弃去上清,所得沉淀均匀分散于氯仿中,即得到油胺修饰的金纳米颗粒AuNPs分散液;2)富金构建体的制备:富金构建体的制备方法包括以下两步:步骤A:向步骤1)所得油胺修饰的金纳米颗粒AuNPs分散液中加入巯基化介孔二氧化硅球,超声均匀后,离心、风干,所得固体中加入辛基三甲氧基硅烷OTMS,超声均匀后转移至甲醇氨水混合液中,继续超声反应20-40分钟后离心得到复合物沉淀,复合物沉淀用甲醇洗涤除去多余的辛基三甲氧基硅烷OTMS后,加入至水中搅拌15~20h后,离心、分散于乙醇中,形成中间产物分散液;步骤B:向步骤A所得中间产物分散液中加入水、氨水、TEOS,室温搅拌反应,随后离心收集产物,洗涤,分散于乙醇中,即得到富金构建体分散液;3)羧基化富金构建体的制备:取步骤2)所得富金构建体分散液,搅拌下加入氨水,然后加入APTMS搅拌反应10-15h,反应结束后将产物离心,用乙醇洗涤后,得到氨基修饰的富金构建体材料;然后将所述氨基修饰的富金构建体材料分散至N,N二甲基甲酰胺中,加入琥珀酸酐反应3~5h,反应结束后将产物离心,依次用乙醇、水洗涤后,分散于水中,即得到羧基化富金构建体分散液;4)免疫微球的制备取步骤3)所得羧基化富金构建体分散液离心,水洗,然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐和pH=6.0磷酸缓冲液,37℃活化20~40min;随后离心收集产物,加入pH=7.4磷酸缓冲液和链霉亲和素,37℃摇床反应2~4h;反应结束后,离心、洗涤,然后加入pH=7.4磷酸盐缓冲液和生物素化抗体,37℃摇床反应0.5~1.5h;反应结束后,离心,用pH=7.4磷酸缓冲液洗涤数次,即得所述免疫微球,将其分散于保存液中冷藏保存。
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