恭喜利兰斯坦福初级大学董事会;布兰迪斯大学K·R·罗伊获国家专利权
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龙图腾网恭喜利兰斯坦福初级大学董事会;布兰迪斯大学申请的专利遗传工程细胞的多元性产生和条形码编制获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN111344403B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-05-06发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:201880073960.7,技术领域涉及:C12N9/22;该发明授权遗传工程细胞的多元性产生和条形码编制是由K·R·罗伊;J·D·史密斯;R·P·圣昂格;L·M·施泰因梅茨;J·E·哈伯设计研发完成,并于2018-09-14向国家知识产权局提交的专利申请。
本遗传工程细胞的多元性产生和条形码编制在说明书摘要公布了:本公开涉及使用RNA引导的核酸酶和基因组条形码多元性产生遗传工程细胞和并进行表型分型。具体地,采用通过同源介导修复促进所需靶染色体基因座处精确基因组编辑的系统实现高通量多元性基因组编辑。向导RNA和供体DNA序列作为基因组条形码在不同的染色体基因座整合,可允许从转化子池中鉴定、分离和大规模平行验证单独变体。菌株能根据其精确遗传修饰进行排列,如供体DNA掺入异源或天然基因所指定。本公开还涉及一种典型向导RNA识别区外的密码子编辑方法,其使蛋白编码基因的完全饱和突变可行,一种基于标记的内部克隆方法,其移除由寡核苷酸合成错误和不完全载体骨架切割导致的背景,以及一种通过活跃的供体募集来提高同源介导修复的方法。
本发明授权遗传工程细胞的多元性产生和条形码编制在权利要求书中公布了:1.一种将供体多核苷酸定位到靶细胞中基因组靶基因座的方法,所述方法包括:a用第一重组多核苷酸转染靶细胞,所述第一重组多核苷酸包含基因组编辑盒,所述基因组编辑盒包含:i与编码能在待修饰基因组靶基因座杂交的向导RNAgRNA的核酸序列可操作连接的启动子,和ii供体多核苷酸,其包含待整合入所述基因组靶基因座的序列;b用第二重组多核苷酸转染所述靶细胞,所述第二重组多核苷酸编码第一多肽且编码第二多肽,其中i所述第一多肽是RNA-引导的核酸酶,其中当与所述gRNA复合时,所述RNA-引导的核酸酶识别所述基因组靶基因座并在所述基因组靶基因座产生DNA断裂位点;和ii所述第二多肽是供体募集蛋白,其中所述供体募集蛋白包含:1DNA结合域,其结合所述供体多核苷酸,和2DNA断裂位点定位结构域,其与所述基因组靶基因座处的DNA断裂附近的区域结合;其中当与所述DNA断裂附近的区域和所述供体多核苷酸都结合时,所述供体募集蛋白使所述供体多核苷酸选择性募集到所述DNA断裂位点,从而将供体多核苷酸定位到基因组靶基因座,其中所述DNA结合域包含LexADNA结合域,并且所述DNA断裂位点定位结构域包含forkhead相关的FHA磷酸苏氨酸结合域或包含TP53BP1结构域,其中所述方法是非治疗方法。
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