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龙图腾网获悉三生国健药业(上海)股份有限公司申请的专利一种重组人神经生长因子的制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114929732B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202080086412.5，技术领域涉及：C07K14/48；该发明授权一种重组人神经生长因子的制备方法是由朱祯平;黄浩旻;肖建国设计研发完成，并于2020-11-03向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种重组人神经生长因子的制备方法在说明书摘要公布了：提供了一种重组人神经生长因子的制备方法，可以作为治疗药物。

本发明授权一种重组人神经生长因子的制备方法在权利要求书中公布了：1.一种重组人神经生长因子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a在大肠杆菌中表达并分离重组人神经生长因子的包涵体；b使用包涵体洗涤液洗涤所述包涵体；c加入变性液溶解所述包涵体；d加入复性液进行包涵体复性；e纯化获得重组人神经生长因子；其中，所述步骤b包括以下步骤：使用包涵体洗涤液A重悬沉淀，超声，离心，收集沉淀，其中，所述包涵体洗涤液A包括20-100mMTris，50-150mMNaCl，1-10mMEDTA，0.5-3％TritonX-100，pH8.0-8.5；使用包涵体洗涤液B重悬沉淀，超声，离心，收集沉淀，其中，所述包涵体洗涤液B包括20-100mMTris，50-150mMNaCl，1-10mMEDTA，1-4M尿素，pH8.0-8.5；再使用包涵体洗涤液C重悬沉淀，超声，离心，收集沉淀，其中，所述包涵体洗涤液C包括20-100mMTris，50-150mMNaCl，1-10mMEDTA，pH8.0-8.5；所述步骤c包括以下步骤：在包涵体中加入变性液，所述变性液包括8M尿素和15-25mM柠檬酸，pH2.8-3.2，所述包涵体与所述变性液按照湿重g：体积ml为1：20-30比例加入变性液，溶解后离心去除沉淀；所述步骤d包括以下步骤：在变性液中加入14体积0.8-1.0M碳酸氢铵pH8.0-9.0和8M尿素溶液，加入DTT至终浓度为5-10mM，25-37℃30-60min；再加入氧化型谷胱甘肽至终浓度为20-40mM，25-37℃10-15min；再加入19倍体积稀释缓冲液，所述稀释缓冲液包括50-150mMNa2HPO4，5-15mM乙醇胺，4.2-4.6M尿素，14-18％PEG300，pH8.3-8.5；再加入半胱氨酸至终浓度为1-5mM；用氩气赶出空气，4℃复性1-7天；用3K膜超滤浓缩复性液至rhNGF终浓度为1-2mgml。

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