北京市农林科学院满燕获国家专利权
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龙图腾网获悉北京市农林科学院申请的专利基于crRNA“加尾自沉默”策略的通用型光控CRISPR-Cas12a的检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119736370B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510252412.2,技术领域涉及:C12Q1/6844;该发明授权基于crRNA“加尾自沉默”策略的通用型光控CRISPR-Cas12a的检测方法是由满燕;谭慧敏;王营军;余舟;石聪;马帅设计研发完成,并于2025-03-05向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于crRNA“加尾自沉默”策略的通用型光控CRISPR-Cas12a的检测方法在说明书摘要公布了:本发明提供了基于crRNA“加尾自沉默”策略的通用型光控CRISPR‑Cas12a的检测方法,可实现非核酸和核酸靶标的一锅快检,采用包括加尾自封闭crRNA、Cas12a、核酸扩增反应体系或aptamer的靶标分子孵育体系、G4二聚体体系进行检测。本发明利用自封闭的光控crRNA,阻断CRISPR‑Cas12a系统的切割活性,避免对核酸扩增反应体系或靶标分子孵育体系的切割影响;当反应结束之后,在UV光照的条件下,加尾crRNA脱尾,进而重启系统的切割活性;被激活的系统切割G4二聚体,因此没有强荧光信号产生。该方法不需要优化crRNA封闭的条件,就可以阻断CRISPR‑Cas12a系统。
本发明授权基于crRNA“加尾自沉默”策略的通用型光控CRISPR-Cas12a的检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基于crRNA“加尾自沉默”策略的通用型光控CRISPR-Cas12a的检测方法,其特征在于,该方法为非诊断目的的检测方法,该方法采用通用型光控CRISPR-Cas12a的检测体系中的crRNA为自封闭光控crRNA,其为在crRNA末端加有一个“自封闭尾巴”,该“自封闭尾巴”既含光可切割的PC-linker光敏分子,又含与crRNA的靶标结合序列自发形成发夹结构的互补碱基序列;crRNA的序列为SEQIDNO.1:5′–UAAUUUCUACUCUUGUAGAUNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN–3′,其中,下划线部分表示与待测基因的特异靶标序列互补配对的引导序列,“自封闭尾巴”的序列为与引导序列互补的自发形成发夹结构的5′–N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′N′–3′碱基序列,且互补的序列每隔4~6个碱基标记有PC-linker光敏分子;N与N′之间有2~6个碱基U;N及N′表示选自C、G、U、A的碱基;PC-linker为2-硝基苯基磷酸二酯;通用型光控CRISPR-Cas12a的检测体系还包括aptamer或RPA体系,Cas12a及G4dimer和待测样品;检测时,利用紫外灯照射后,孵育,之后每个反应管中加入硫磺素T,室温避光孵育后检测体系的荧光信号强度并分析结果。
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