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龙图腾网获悉浙江大学长三角智慧绿洲创新中心申请的专利一种基于激光显微切割系统和DNA条形码标记的空间转录组高通量测序方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119709951B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510221432.3，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种基于激光显微切割系统和DNA条形码标记的空间转录组高通量测序方法及其应用是由范骁辉;廖杰;郭文博;郑艳榕设计研发完成，并于2025-02-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于激光显微切割系统和DNA条形码标记的空间转录组高通量测序方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明提供了一种基于激光显微切割系统和DNA条形码标记的空间转录组高通量测序方法及其应用，具体属于基因测序技术领域。本发明所述空间转录组高通量测序方法，包括以下步骤：两步法合成DNA空间条形码；将DNA空间条形码和细胞裂解液与单细胞混合，裂解，捕获mRNA，逆转录，PCR扩增，得到cDNA；进行cDNA文库构建，测序，对测序结果进行处理，并进行空间转录组数据分析。本发明所述空间转录组高通量测序方法具有较高的细胞通量，能获得单细胞空间分辨率。

本发明授权一种基于激光显微切割系统和DNA条形码标记的空间转录组高通量测序方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种基于激光显微切割系统和DNA条形码标记的空间转录组高通量测序方法，其特征在于，包括以下步骤： 将羧基磁珠与EDC混合，进行活化反应，得到活化的羧基磁珠； 将活化的羧基磁珠分别与第一空间条形码引物混合，进行脱水缩合反应，得到第一磁珠； 将第一磁珠与第二空间条形码引物和第三空间条形码引物以及PhantaSuper-FidelityDNAPolymerase混合，在孔板中进行PCR反应连接，得到DNA空间条形码；所述第一空间条形码引物包括A1~A4，核苷酸序列分别如SEQIDNO.1~4所示；所述第二空间条形码引物包括B1~B12，核苷酸序列分别如SEQIDNO.5~16；所述第三空间条形码引物包括C1~C8，核苷酸序列分别如SEQIDNO.17~24所示； 将动物组织进行冰冻切片，使用除去静电设备对切片表面进行除静电处理，得到除静电切片；使用激光捕获显微切割仪器对除静电切片进行显微切割，使用孔板收集单细胞； 将DNA空间条形码和细胞裂解液添加到含单细胞的孔板中，对孔板中的细胞进行裂解，捕获mRNA；所述细胞裂解液的制备用原料中包括RNase抑制剂； 对捕获的mRNA进行逆转录，清洗，得到清洗后磁珠；用Pre-AmpPCR体系重悬清洗后磁珠，进行第一PCR扩增，置于磁力架上，取上清，获得第一PCR产物；使用VAHTSDNACleanBeads对第一PCR产物进行纯化，将纯化产物与2×KapaHiFiHotStartReadymix和TSO-PCR引物混合，进行第二PCR扩增，得到第二PCR扩增产物；再次使用0.7×VAHTSDNACleanBeads对第二PCR扩增产物进行纯化，得到cDNA；所述TSO-PCR的核苷酸序列如SEQIDNO.28所示； 使用TruePrepFlexibleDNALibraryPrepKitforIllumina自由建库试剂盒进行cDNA文库构建；使用SalusPro基因测序仪进行PE150双端测序； 对测序结果进行处理，并进行空间转录组数据分析。

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