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龙图腾网获悉清华大学申请的专利DNA定点突变方法及基于其的蛋白突变体表型筛选方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119876126B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-11发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510387613.3，技术领域涉及：C12N15/10；该发明授权DNA定点突变方法及基于其的蛋白突变体表型筛选方法是由欧光朔;许凯铭;陈子涵;郭正阳;李明;李薇;王慧;张进祥设计研发完成，并于2025-03-31向国家知识产权局提交的专利申请。

本DNA定点突变方法及基于其的蛋白突变体表型筛选方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种DNA定点突变方法及基于其的蛋白突变体表型筛选方法。其中，DNA定点突变方法包括：第一反应、第二反应和第三反应。本发明提供的DNA定点突变方法，对PCR部分的实验流程进行了优化与改进，通过简单的三轮PCR循环，无需DNA纯化或单克隆挑取，即可实现DNA定点突变的构建，具有高成功率和准确率。

本发明授权DNA定点突变方法及基于其的蛋白突变体表型筛选方法在权利要求书中公布了：1.一种DNA定点突变方法，所述方法包括： 第一反应，使用第一上游通用引物作为上游引物，下游突变引物作为下游引物，以包含待突变的DNA的多核苷酸作为模板，进行聚合酶链式反应，获得第一扩增子； 第二反应，使用上游突变引物作为上游引物，使用第一下游通用引物作为下游引物，以包含待突变的DNA的多核苷酸作为模板，进行聚合酶链式反应，获得第二扩增子； 第三反应，将稀释后的第一扩增子和稀释后的第二扩增子共同作为模板，以第二上游通用引物作为上游引物，第二下游通用引物作为下游引物，进行聚合酶链式反应，获得定点突变的DNA； 其中，所述第一扩增子的下游和所述第二扩增子的上游包含待突变位点，且存在重叠部分； 所述第一上游通用引物包括上游互补结合部分和位于所述上游互补结合部分上游的第一非互补结合部分；所述第一下游通用引物包括下游互补结合部分和位于所述下游互补结合部分上游的第二非互补结合部分；所述第一非互补结合部分和所述第二非互补结合部分均不含与所述模板互补结合的序列； 所述第二上游通用引物包括与第一非互补结合部分的至少一部分连续的核苷酸相同的多核苷酸；所述第二下游通用引物包括与第二非互补结合部分的至少一部分连续的核苷酸相同的多核苷酸； 其中，所述下游突变引物和所述上游突变引物中包含突变位点核苷酸；且除所述突变位点核苷酸以外，所述下游突变引物和所述上游突变引物分别与包含待突变位点的待突变的DNA的反义链和正义链的区域互补结合； 与所述下游突变引物互补结合的待突变的DNA的区域和与所述上游突变引物互补结合的待突变的DNA的区域存在相互重叠的区域。

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