申请/专利权人：扬州大学

申请日：2017-11-08

公开（公告）日：2018-01-19

公开（公告）号：CN107603954A

主分类号：C12N5/10(2006.01)I

分类号：C12N5/10(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/65(2006.01)I;C12R1/91(2006.01)N

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2021.03.26#发明专利申请公布后的驳回;2018.02.13#实质审查的生效;2018.01.19#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及稳定表达猪源cGAS受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。该细胞系是指转入了猪源cGAS受体基因的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。本发明提供能够用于研究pcGAS活化激活下游NF‑κB启动子报告基因检测的稳定细胞系。本发明也为进一步研究pcGAS的功能奠定了生物材料基础，有利于进一步丰富有关pcGAS的研究。

主权项：一种稳定表达猪源cGAS受体基因的NF‑κB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源cGAS受体基因pcGAS的HEK293‑NF‑κB细胞，所述HEK293‑NF‑κB细胞是引入了NF‑κB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。

全文数据：一种稳定表达猪源cGAS受体基因的NF-κΒ双荧光素酶报告细胞及其构建方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域。具体涉及稳定表达猪源cGASpcGAS受体基因的NF-KB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。更具体地说，本发明提供能够用于研究PcGAS活化激活下游NF-kB启动子报告基因检测稳定细胞系。本发明也为进一步研究pcGAS的功能奠定了生物材料基础，有利于进一步丰富有关PcGAS的研究。背景技术[0002]DNA受体环形鸟苷腺苷单磷酸合成酶cyclicGMP-AMPsynthase，cGAS[0003]胞浆内DNA受体是较晚发现的天然免疫受体PRRs，包括DAI，DDX41，IFI16，A頂2，DHX9，DHX36，DDX60，DNA-PK，MRE11等。除A頂2诱导炎症小体活化外，其它DNA受体活化后均可以诱导基因转录，产生抗病毒因子和炎症因子。如此多的DNA受体，在胞浆内识别DNA后通过接头蛋白STING激发相似的信号通路和下游细胞因子产生，说明这些受体功能很大程度上具有重叠性或者在不同类型细胞中分别发挥抗病毒作用[1]。[0004]cGAS是最近发现的胞浆DNA受体，研究非常深入，功能也很清楚[2A4^cGAS是一个60kda左右的蛋白，包含一个由150个氨基酸组成的N端结构域，一个有蛋白酶抗性、保守的核酸转移酶NTaseC端结构域。根据cGAS的晶体结构，其与双链DNAdsDNA的相互作用是非序列依赖性的。双链DNAdsDNA能结合cGAS，刺激cGAS活化。cGAS本身具有酶活性，结合DNA后能催化ATP和GTP形成环形鸟苷腺苷单磷酸cGAMP^GAMP是第二信使能直接结合并激活接头蛋白STING。接头蛋白STING是内质网膜蛋白，也少量分布于线粒体和线粒体相关膜MAM上，识别第二信使cGAMP后，STING形成二聚体并转位到细胞核周围。转位的STING招募蛋白激酶TBKl，后者磷酸化STING和转录因子IRF3,诱导I型干扰素（IFN基因转录。STING也同时招募蛋白激酶IKK，后者活化转录因子NF-κΒ，诱导炎症因子表达。[0005]cGAS-cGAMP-STING信号在宿主识别和抵抗DNA病毒中起主要作用，这些病毒包括疱疹病毒的HSV-I，KSHV，MHV68，RRV和EBV，乳头瘤病毒HPV，腺病毒，乙肝病毒等。有意思的是，cGAS在抵抗部分单正链RNA病毒中也发挥作用，这些RNA病毒包括黄病毒科的黄热病病毒YFV，登革病毒DENV，丙肝病毒HCV和冠状病毒科的人冠状病毒HCoV沙斯病毒SARS-CoV[1]〇[0006]已有研究报道从猪分离出有功能的cGAS，猪cGAS定位于细胞胞浆和内质网，介导DNA刺激、依赖于STING和IRF3的I型IFN信号[5]。[0007]家畜天然免疫受体cGAS的研究内容匮乏，猪cGAS信号通路仅具有初步研究报道，有必要建立研究猪cGAS信号通路的细胞体系。[0008]l.MaZ1DamaniaB.ThecGAS-STINGDefensePathwayandItsCounteractionbyViruses.CellHostMicrobe.2016Feb10；192:150-8.[0009]2.Ablasser,M.Goldeck,T.Caviar,T.Deimling,G.Witte,I.Rohl.K.P.Hopfner,J.Ludwig,V.Hornung.cGASproducesa2—5-linkedcyclicdinucleotidesecondmessengerthatactivatesSTING.Nature,4982013,pp.380-384.[0010]3.SunL,ffuJ,DuF1ChenX1ChenZJ.CyclicGMP-AMPsynthaseisacytosolicDNAsensorthatactivatesthetypeIinterferonpathway.Science.2013Feb15；3396121:786-91.[0011]4.GaoD,ffuJ,ffuYT1DuF1ArohC1YanN1SunL1ChenZJ.CyclicGMP-AMPsynthaseisaninnateimmunesensorofHIVandotherretroviruses.Science.2013Aug23；3416148:903-6.[0012]5.WangJ,ChuB,DuL,HanY1ZhangX,FanS,ffangY1YangG.MolecularcloningandfunctionalcharacterizationofporcinecyclicGMP-AMPsynthase.MolImmunol.2015Jun；652:436-45.发明内容[0013]本发明的目的是提供一种稳定表达猪源cGAS受体基因的NF-KB双荧光素酶报告细胞系及其构建方法。本发明建立在自主获得的猪的cGAS真核表达质粒和HEK293-NF-KB双荧光素酶稳定报告细胞系的基础上，构建能够稳定表达猪源cGASpcGAS受体基因的NF-kB双荧光素酶报告稳定细胞系。该细胞系为进一步研究PcGAS的功能奠定了生物材料基础，有利于进一步丰富有关pcGAS的研究。[0014]本发明所采用的技术方案是：[0015]一种稳定表达猪源cGAS受体基因的NF-KB双荧光素酶报告细胞系，是指转入了猪源cGAS受体基因（pcGAS的HEK293-NF-KB细胞，所述HEK293-NF-KB细胞是引入了NF-κΒ虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。[0016]本发明所述的稳定表达猪源cGAS受体基因的NF-κΒ双荧光素酶报告细胞系的构建方法如下：[0017]1含pcGAS编码区基因的pcDNA真核表达载体的构建[0018]pcGAS编码区基因的扩增和克隆。设计PCR引物，从猪原代肺泡巨噬细胞PAMRNA中RT-PCR扩增pcGAS编码基因，扩增PCR片段经双酶切后和带有C-端HA表达标签的GatewayPENTR4中间入门载体相连接，经菌落PCR和酶切鉴定后获得阳性重组克隆。[0019]LR位点特异重组反应。将鉴定的含pcGAS的pENTR4重组质粒含attL位点）和目的pcDNA表达载体pDEST47含attR位点）进行位点特异重组反应，经菌落PCR鉴定获得阳性重组pcDNApcGAS克隆。[0020]重组pcDNApcGAS的表达。重组pcDNApcGAS转染293T细胞，48小时后细胞裂解物进行SDS-PAGE，蛋白转印膜进行抗HA抗体免疫印迹，结果表明pcGAS在细胞中表达〜55kD的特异蛋白条带图1。[0021]pcGAS信号功能的鉴定。质粒pcGAS转染猪PAM细胞，24小时后，提取细胞总RNA，RT-PCR检测细胞下游细胞因子基因和相关基因表达。结果表明与载体pcDNA转染细胞对照，pcGAS能显著增强ISG60和IL-8基因的转录（图2A。人293T细胞中不表达STING，我们将pcGAS和STING共转染293T细胞，结果表明pcGAS自身就可以微弱诱导IF卵转录，与STING共转染可以进一步增强IFNI3和TNFa基因的表达（图2B。在此基础上，我们检验pcGAS和STING共转染对下游转录因子IRF3和NF-κΒ活化的影响：启动子试验结果表明，pcGAS能显著介导下游IRF3和NF-κΒ驱动的启动子活化，尤其是IRF3启动子的活化;上述细胞在受到dsDNA刺激后能进一步活化启动子报告基因表达图2C。[0022]2HEK293-NF-KB双荧光素酶稳定报告细胞的构建：[0023]培养人胚肾细胞HEK293至融合度70%-80%，利用表达NF-κΒ虫荧光素FLuc的慢病毒Blasticidin感染HEK293细胞，感染细胞用10ygml杀稻瘟菌素Blasticidin筛选获得稳定表达NF-kB报告基因的HEK293细胞系。两次有限稀释法亚克隆，细胞克隆用TNF-α刺激细胞6-8小时，筛选对TNF-α刺激诱导产生高水平NF-κΒ活化，高表达FLuc的单细胞克隆。上述细胞克隆用质粒TK海肾荧光素酶RLuc和pBabeHygro共转染，细胞经100ygml的潮霉素BhygromycinB筛选后获得稳定表达细胞。细胞再经过有限稀释法亚克隆，单个细胞克隆用不同浓度TNF-α刺激，选取对TNF-α刺激具有高水平FLuc应答同时稳定高表达RLuc的细胞克隆。[0024]3PcGAS-HEK293-NF-kB稳定表达细胞系的构建：[0025]培养HEK293-NF-kB双荧光素酶报告细胞至融合度70%-80%，利用脂质体转染试剂Lipofectin2000将含有pcGAS基因的质粒pcDNApcGAS转染入HEK293-NF-KB细胞，经800μgml的G418筛选后获得表达pcGAS编码基因的HEK293-NF-KB细胞，经三轮细胞刺激鉴定筛选及扩大培养、获得稳定表达pcGAS基因的HEK293-NF-KB双荧光素酶报告细胞系。[0026]本发明公开了稳定表达猪源cGASpcGAS受体基因的NF-κΒ荧光素酶稳定报告细胞系的制备方法。在获得HEK293-NF-KB稳定表达双荧光素酶报告细胞系基础上，转染pcGAS基因的真核表达质粒，经过G418筛选获得稳定表达猪源cGASpcGAS受体基因的NF-κΒ双荧光素酶报告稳定细胞系。如图3-4所示:pcGAS-NF-κΒ报告细胞对dsDNA的刺激表现出特异有效的应答。pcGAS-NF-κΒ稳定报告细胞系的构建为进一步研究pcGAS的功能奠定了生物材料基础，有利于进一步丰富有关pcGAS的研究。双荧光素酶报告稳定细胞系含有内参荧光素报告基因，可以校正和避免实验中由于细胞毒性等差异造成的误差，使结果更为可信。附图说明[0027]图l:pcGAS在转染细胞中的表达。[0028]图2:?^45信号功能的鉴定^，1^0?检测？^45在转染猪?41细胞中的活性;8，pcGAS和STING共转染293T细胞引起下游细胞因子的转录;C，pcGAS和STING共转染293T细胞引起下游转录因子IRF3和NF-κΒ活化和相应启动子报告基因的表达。[0029]图3:双荧光素酶报告实验检验pcGAS-293-NF-KB稳定细胞系对多种刺激剂的应答反应。[0030]图4:双荧光素酶报告实验验证多次传代pcGAS-293-NF-KB稳定细胞系对dsDNA的特异应答。具体实施方式[0031]1含pcGAS编码基因的pcDNA真核表达载体的构建[0032]pcGAS基因编码区的扩增和克隆。[0033]设计一对克隆PCR引物，上游引物为ccagCCATGGcggcccggcSEQIDN0.1;下游引物为ttcgcGATATCccaaaaaactggaaatccattgtttctttcatattcaatttgctttgacagaaattctttacttggSEQIDN0.2。从猪原代PAM细胞提取总RNA，反转录RT生成cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增pcGAS基因编码区，扩增得到大小约为1.5kb的DNA片段。扩增PCR片段经NcoI和EcoRV双酶切后和带有C-端2XHA表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体经T4连接酶NEB连接，连接产物转化感受态TOPlO，转化细菌TOPlO涂布卡那霉素抗性Kanamycin细菌琼脂平板，重组克隆经菌落PCR和酶切鉴定，阳性中间质粒pENTR4-pcGAS-2XHA进一步DNA测序进行验证。[0034]所述带有C-端2XHA表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体的构建方法如下：[0035]入门空载体pENTR4-N-FLAG优宝生物，www·youbio·cn产品编号：VT2038质粒扩增后，用Ncd酶切，琼脂糖胶回收酶切大片段，T4连接酶连接，转化TOPlO感受态细胞，涂布卡那霉素Kanamycin琼脂培养板。从转化菌落中提取质粒，DNA测序确定得到去除N-端FLAG标签的质粒pENTR4。[0036]合成序列atcaccagctacccatacgatgttcctgactatgcgggctatccctatgacgtcccggactatgcatagSEQIDNO.3及其互补序列，变性退火形成双链平端DNAdsDNA。质粒pENTR4用EcoRV酶切，碱性磷酸酶AP去磷酸化处理，和上述平端DNA用T4连接酶连接，连接产物转化TOPlO感受态细胞，涂布卡那霉素琼脂培养板。从转化菌落中提取质粒，EcoRV酶切并DNA测序鉴定。所合成的DNA序列为2XHA标签编码序列，5端加ATCACCAGC，3端加终止密码子TAG。正确连接的HA标签序列上游保留了EcoRV，下游是合成的终止密码子TAG。[0037]LR位点特异重组反应。[0038]将经鉴定并序列正确的重组中间质粒pENTR4-pcGAS-2XHA含attL位点）和目的pcDNA表达载体pDEST47含attR位，Addgene,货号#36139在LRClonsaeThermoFisher,货号12538120作用下进行位点特异LR重组反应，连接产物转化感受态细菌DH5a并涂布氨苄青霉素Ampici11in琼脂培养板，菌落PCR鉴定转化菌落，从阳性菌落培养物中提取质粒，获得重组目的表达质粒pcDNApcGAS。[0039]重组pcDNApcGAS的表达。[0040]分0.3X106细胞孔于24-孔培养板，第二天用脂质体转染试剂lipofectamine2000ThermoFisher转染Iyg重组pcDNApcGAS到24-孔培养板中293T细胞。48小时后细胞裂解物进行SDS-PAGE，蛋白转印膜进行抗HA抗体免疫印迹，结果表明pcGAS在细胞中表达〜55kD的特异蛋白条带图1。[0041]pcGAS信号功能的鉴定。[0042]实验l，pcGAS转染猪肺泡巨噬细胞（PAM激活下游细胞因子转录（图2A。分0.3X106细胞孔于24-孔培养板过夜培养，第二天用脂质体转染试剂IipofectamindOOOThermoFisher转染Iyg重组pcDNApcGAS到24-孔培养板中PAM细胞。转染24小时后，提取细胞总RNA，RT-PCR检测细胞下游细胞因子基因和相关基因表达，包括ISG60，IL8，f3-actin。PCR产物进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳检查上述细胞因子基因转录。[0043]实验2，pcGAS和STING共转染293T细胞激活下游细胞因子转录（图2B。分0.3X106细胞孔于24-孔培养板过夜培养，设对照组pcDNAI.Oyg和实验组pcDNA0.5yg+pcGAS0.5yg，pcDNA0.5yg+STING0.5yg，pcGAS0.5yg+STING0.5yg，第二天用脂质体转染试剂Iip〇fectamine2000ThermoFisher共转染上述Iyg质粒分别到24-孔培养板中293T细胞。转染24小时后，提取细胞总RNA，RT-PCR检测细胞下游细胞因子基因和相关基因表达，包括正^15660，了即-€和1^32。？〇?产物进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳检查上述细胞因子基因转录。[0044]实验3，pcGAS和STING共转染293T细胞激活下游转录因子活化（图2C。分0.3X105细胞孔于96-孔培养板过夜培养。转染实验分为ISGIRF启动子报告基因组和ELAMNF-kB启动子报告基因组，对照组分别为ISG-ctr,ELAM-ctr;实验组为cGAS，cGAS+STING用量每孔cGAS20ng，STING10ng，ISGELAM10ng，RL-luc0.2ng，每组用pcDNA补充至50ng。上述转染细胞不刺激或者用dsDNA1μgmI转染刺激。第二天用脂质体转染试剂lipofectamine2000ThermoFisher转染50ng质粒到96-孔培养板中每孔293T细胞。转染24小时后用双链DNAdsDNAlygml通过转染刺激细胞。刺激12小时后，收集细胞做双重荧光素酶报告基因分析实验（TransDetectDouble-LuciferaseReporterAssayKit,TRANSBIOTECH，货号，FR201-02:弃去细胞营养液，每孔加入50μ11X细胞裂解液轻摇裂解细胞约10分钟，待细胞充分裂解，取20μ1加入96-孔白色分析板中，加入15μ1LuciferaseReactionReagentI轻轻混勾放入化学发光仪中读出萤火虫焚光素酶报告基因（Flue的活性，再加入15μ1LuciferaseReactionReagentII混勾后读出海肾焚光素酶报告基因Rluc的活性。Fluc数值经Rluc数值校正后，所有转染样品分别与相应的ISGIRF报告基因和ELAMNF-κΒ报告基因对照相比对图2C。[0045]2HEK293-NF-KB双荧光素酶稳定报告细胞的构建：[0046]培养人胚肾细胞HEK293至融合度70%-80%，利用表达NF-κΒ虫荧光素FLuc的慢病毒Blasticidin感染HEK293细胞，感染细胞用10ygml杀稻瘟菌素Blasticidin筛选获得稳定表达NF-kB报告基因的HEK293细胞系。两次有限稀释法亚克隆，细胞克隆用TNF-α刺激细胞6-8小时，筛选对TNF-α刺激诱导产生高水平NF-κΒ活化，高表达FLuc的单细胞克隆。上述细胞克隆用质粒TK海肾荧光素酶RLuc和pBabeHygro共转染，细胞经100ygml的潮霉素BhygromycinB筛选后获得稳定表达细胞。细胞再经过有限稀释法亚克隆，单个细胞克隆用不同浓度TNF-α刺激（lO-lOOngml，选取对TNF-α刺激具有高水平FLuc应答同时稳定高表达RLuc的细胞克隆;得HEK293-NF-KB双荧光素酶报告细胞。[0047]3PcGAS-HEK293-NF-kB稳定表达细胞系的构建：[0048]培养HEK293-NF-kB双荧光素酶报告细胞至融合度70%-80%，利用脂质体转染试剂Lipofectin2000将含有pcGAS基因的质粒pcDNApcGAS转染入HEK293-NF-KB报告细胞，经800ygml的G418InvivoGen筛选1-2周后获得表达pcGAS编码基因的HEK293-NF-KB细胞，经三轮细胞刺激鉴定筛选及扩大培养、获得稳定表达pcGAS基因的HEK293-NF-KB双荧光素酶稳定报告细胞系。[0049]⑷PcGAS-HEK293-NF-kB稳定表达细胞的刺激试验：[0050]分0.3X105PcGAS-HEK293-NF-kB细胞孔于96-孔培养板过夜培养，第二天用15种刺激剂包括PMAInvivoGen，货号：tlrl-pma，Pam2CSK4InvivoGen，货号：tlrl-pm2s_l，LPS-B5StandardInvivoGen,货号：tlrl_b51ps，FlagellinfromB.subtilis,FLA-BSInvivoGen，货号：tlrl-bsfla，ImiquimodR837InvivoGen，货号：tlrl-imqs，R848ResiquimodInvivoGen,货号：tlrl_r848，CpG1826人工合成寡核苷酸，序列为SEQIDN0.4:TCCATGACGTTCCTGACGTT，CpG2006人工合成寡核苷酸，序列SEQIDN0.5:TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT，CpG2007人工合成寡核苷酸，序列为SEQIDN0.6:TCCATGACGTTCCTGACGTT，iE-DAPInvivoGen，货号：tlrl-dap，MDPInvivoGen，货号：tlrl-mdp，PolyI:CHMWInvivoGen,货号：tlrl-pic，双链dsDNAInvivoGen,货号：tlrl-isdn，刺激pcGAS-HEK293-NF-KB稳定表达细胞（图3，刺激12小时后，双重荧光素酶报告试验检测下游报告基因的活性（TransDetectDouble-LuciferaseReporterAssayKit，货号，FR201-02:弃营养液，每孔加50μ1细胞裂解液裂解10分钟左右，取20μ1于96孔分析板中，先加入15μ1LuciferaseReactionReagentI轻轻混勾放入化学发光仪中读出萤火虫焚光素酶报告基因（Fluc的活性，再加入15μ1LuciferaseReactionReagentII混勾后读出海肾荧光素酶报告基因（Rluc的活性，Fluc经Rluc校正后，各刺激样品的FlucRluc数值和不刺激NS对照数值比对，计算各刺激样品的刺激倍数图3。[0051]将PCGAS-HEK293-NF-KB稳定表达细胞多次传代后，分0.3X105细胞孔于96-孔培养板过夜培养，第二天用特异性刺激剂dsDNAlygml;InvivoGen，货号:tlrl-isdn转染刺激稳定细胞。刺激12小时后双重荧光素酶报告试验检测下游报告基因的活性TransDetectDouble-LuciferaseReporterAssayKit，货号，FR201-02:弃营养液，每孔加50μ1细胞裂解液裂解10分钟左右，取20μ1于96孔分析板中，先加入15μ1LuciferaseReactionReagentI轻轻混勾放入化学发光仪中读出Fluc的活性，再加入15μ1LuciferaseReactionReagentΠ混勾后读出Rluc的活性，Fluc经Rluc校正后，刺激样品的FlucRluc数值和不刺激NS对照数值比对，计算刺激样品刺激倍数图4。

权利要求：1.一种稳定表达猪源cGAS受体基因的NF-KB双荧光素酶报告细胞系，其特征在于，是指转入了猪源cGAS受体基因（pcGAS的HEK293-NF-KB细胞，所述HEK293-NF-KB细胞是引入了NF-kB虫荧光素酶和内参海肾荧光素酶的HEK293细胞。2.—种稳定表达猪源cGAS受体基因的NF-kB双荧光素酶报告细胞系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1含pcGAS编码区基因的pcDNA真核表达载体的构建设计PCR引物，从猪原代肺泡巨噬细胞PAM的RNA中RT-PCR扩增pcGAS编码基因，扩增PCR片段经双酶切后和带有C-端HA表达标签的GatewaypENTR4中间入门载体相连接;得到的含pcGAS的pENTR4重组质粒和目的pcDNA表达载体pDEST47进行位点特异重组反应，获得阳性重组pcDNApcGAS表达克隆；⑵HEK293-NF-KB双荧光素酶稳定报告细胞的构建：培养人胚肾细胞HEK293至融合度70%-80%，利用表达NF-κΒ虫荧光素FLuc的慢病毒感染HEK293细胞，感染细胞用10ygml杀稻瘟菌素筛选获得稳定表达NF-kB报告基因的HEK293细胞系；两次有限稀释法亚克隆，细胞克隆用TNF-α刺激细胞6-8小时，筛选对TNF-α刺激诱导产生高水平NF-kB活化，高表达FLuc的单细胞克隆;上述细胞克隆用质粒TK海肾荧光素酶RLuc和pBabeHygro共转染，细胞经lOOygml的潮霉素B筛选后获得稳定表达细胞;细胞再经过有限稀释法亚克隆，单个细胞克隆用不同浓度TNF-α刺激，选取对TNF-α刺激具有高水平FLuc应答同时稳定高表达RLuc的细胞克隆；⑶PcGAS-HEK293-NF-kB稳定表达细胞系的构建：培养册1293-册-奶双荧光素酶报告细胞至融合度70%-80%，利用脂质体转染试剂Lipofectin2000将含有pcGAS基因的质粒pcDNApcGAS转染入HEK293-NF-KB细胞，经800ygml的G418筛选后获得表达pcGAS编码基因的HEK293-NF-KB细胞，经三轮细胞刺激鉴定筛选及扩大培养、获得稳定表达pcGAS基因的HEK293-NF-KB双荧光素酶报告细胞系。

百度查询： 扬州大学 一种稳定表达猪源cGAS 受体基因的NF‑κB 双荧光素酶报告细胞及其构建方法

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