申请/专利权人：中南民族大学

申请日：2019-06-28

公开（公告）日：2019-10-08

公开（公告）号：CN110302227A

主分类号：A61K36/27(20060101)

分类号：A61K36/27(20060101);A61P11/06(20060101);A61P11/08(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.09.30#发明专利申请公布后的驳回;2019.11.01#实质审查的生效;2019.10.08#公开

摘要：本发明公开了柳叶白前提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用；本发明通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测，柳叶白前提取物舒张乙酰胆碱以及高钾诱导的气道平滑肌的预收缩，发现柳叶白前提取物是具有高效的舒张气道平滑肌作用的药物；且发现柳叶白前乙酸乙酯提取物EAEC能阻断除了VDCCs通道外的其他通道参与气管平滑肌的舒张；排除VDCCs通道，柳叶白前乙酸乙酯提取物能阻断除了VDCCs和NSCCs外的其他通道参与气道平滑肌的舒张。

主权项：1.柳叶白前提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用。

全文数据：柳叶白前提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用技术领域本发明属于医药技术领域，特别涉及柳叶白前提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用。背景技术哮喘，又称支气管哮喘，是一种常见的多发性慢性呼吸道疾病，威胁着全球几亿人的生命健康。症状发作时常伴有反复发作的气喘、气促、胸闷和咳嗽等症状。哮喘疾病不易完全根治，而且还会引发多种疾病。哮喘的周期性发作会严重影响患者的日常生活，导致失眠，疲劳，活动量减小等症状。哮喘患者的临床症状因人而异，主要临床症状包括气道炎症、气道重塑及气道高反应。气道高反应性是哮喘的重要病理特征，当气道受到外界刺激，如花粉、尘螨冷空气刺激，摄入过敏食物时，导致的气管过度收缩，气道狭窄，限制了气体交换，使患者呼吸不畅，严重威胁到患者生命。目前被广泛应用于临床的支气管扩张剂仍是β2-受体激动剂，但药物副作用大，且依赖性强等问题使得其治疗效果有很大局限。因此寻找新的高效安全的哮喘药物迫在眉睫。而哮喘和气道平滑肌舒张却是两个不同的概念。早前，哮喘的气道慢性炎症学说已经得到公认并取得了大量实验室和临床资料的支持，哮喘的治疗发生了根本的变化。但仍有部分哮喘病人即使足量。正规接受治疗，哮喘控制并不理想。说明气道炎症并不能解释哮喘的所有病理生理现象。柳叶白前CynanchumstauntoniiDecne.Schltr.exH.Lév.为萝藦科鹅绒藤属直立半灌木。产于甘肃、安徽、江苏、浙江、湖南、江西、福建、广东、广西和贵州等省区。生长于低海拔的山谷湿地、水旁以至半浸在水中。柳叶白前，性辛、苦、微温，具有降气，消痰，止咳的功效。然而柳叶白前及其提取物在气道平滑肌的舒张方面的研究，尚未见国内外有相关报道。发明内容本发明的目的在于提供柳叶白前提取物的新用途，具体为柳叶白前在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用。本发明研究发现，通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测，发现柳叶白前提取物是具有高效的舒张气道平滑肌作用的药物。优选地，所述柳叶白前提取物包括柳叶白前乙醇提取物、柳叶白前石油醚提取物、柳叶白前乙酸乙酯提取物及水相浓缩物中的至少一种。优选地，所述柳叶白前提取物的提取步骤为：S1、取柳叶白前药材，粉碎，加入乙醇浸泡获得提取液，提取液用旋转蒸发仪减压蒸干获得浸膏，即为柳叶白前乙醇提取物；S2、将所述柳叶白前乙醇提取物加入一定体积水溶解后，加石油醚萃取分层得石油醚层和第一水层，所述石油醚层经减压浓缩得柳叶白前石油醚提取物；S3、所述第一水层加乙酸乙酯萃取分层得乙酸乙酯层和第二水层，所述乙酸乙酯层经减压浓缩得柳叶白前乙酸乙酯提取物。本发明的有益效果如下：本发明通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测，发现柳叶白前提取物是具有高效的舒张气道平滑肌作用的药物，特别是柳叶白前乙酸乙酯提取物对气道平滑肌的舒张作用更大。附图说明图1为柳叶白前乙酸乙酯提取物对高钾引起气道平滑肌收缩的作用图；其中A为实验组加柳叶白前提取物时气管环张力变化图，B为对照组加PSS时气管环张力变化图；图2为不同浓度柳叶白前乙酸乙酯提取物下对高钾引起气道平滑肌收缩的舒张率结果；图3为柳叶白前乙酸乙酯提取物对乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩的作用图；其中A为实验组加柳叶白前提取物时气管环张力变化图，B为对照组加PSS时气管环张力变化图；图4为不同浓度柳叶白前乙酸乙酯提取物下对高钾引起气道平滑肌收缩的舒张率结果；图5是阻断剂VDCCs通道的选择性阻断剂Nifedipine后的气道平滑肌舒张结果；图6是依次加入VDCCs通道的抑制剂Nifedipine、乙酰胆碱、NSCCs通道中的TRPC3通道的选择性阻断剂Pyr3后气道平滑肌舒张结果。具体实施方式实施例1柳叶白前提取物的制备柳叶白前从安徽亳州购得。将干燥的柳叶白前粉碎，用80％的乙醇冷浸泡，获得提取液，提取液用旋转蒸发仪减压蒸干获得浸膏，加入一定体积水溶解，先用石油醚进行萃取，而后将分离出的水相继续加入乙酸乙酯进行萃取，萃取的乙酸乙酯相减压蒸干浓缩成浸膏，即为柳叶白前乙酸乙酯部提取物。柳叶白前乙酸乙酯部提取物溶解于DMSO中用于生物活性实验检测。实施例2柳叶白前提取物舒张高钾诱导的气道平滑肌的预收缩1、小鼠气管的体外分离：用雄性成年的BALBc小鼠，将其颈椎脱臼处死，让小鼠腹部朝上，将头部和四肢固定在解剖板上，喷洒75％的酒精，打湿毛发防止飞毛及消毒，接着用消过毒的剪刀剪开胸腔，暴露出气管和肺组织，取下从喉结至肺部的一整段组织并移除心脏，将取下的组织马上浸泡于预冷的PSS溶液中，然后在解剖盘上进行进一步修剪。在体视镜下用维纳斯剪先减去食管，再小心除气管外周的结缔组织、脂肪组织。2、小鼠气道平滑肌的张力检测方法：将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器后置于内有6mLPSS并持续通氧的37℃的恒温水浴槽中，前负荷调至300mg，开始平衡，平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mM高钾溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后换液洗脱，至恢复至基线，30min后即可开始试验。实验组按照浓度梯度加入PSS溶解的柳叶白前提取物，对照组加入等量的PSS，看是否引起预收缩的气管环舒张。3、实验结果对高钾引起气道平滑肌收缩的作用图如图1，离体小鼠气管环在高钾80mMK+溶液中发生持续稳定的收缩，当加入柳叶白前乙酸乙酯提取物后气管环张力逐渐下降，随着柳叶白前乙酸乙酯提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明柳叶白前乙酸乙酯提取物可完全舒张高钾引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现剂量依赖性。不同浓度柳叶白前乙酸乙酯提取物下的舒张率结果如表1和图2所示。图中Lg0.75为5.623mgmL；Lg0.5为3.162mgmL；Lg0为1mgmL。由表1和图2可知，柳叶白前提取物的浓度为0.1-1mgmL的舒张率较大。优选地，柳叶白前提取物的浓度为3.162-5.623mgmL的舒张率较优，且柳叶白前提取物的浓度为3.162mgmL时的舒张率达到最大接近100％。表1实施例3柳叶白前提取物舒张乙酰胆碱诱导的气道平滑肌的预收缩除平衡完毕后将80mM高钾溶液H-K替换为100μM乙酰胆碱ACh溶液进行预刺激外，其余步骤同实施例2。对乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩的作用图如图3，离体小鼠气管环在100μMACh溶液中发生持续稳定的收缩，当加入EAEC后气管环张力逐渐下降，随着EAEC浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明EAEC可完全舒张乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现剂量依赖性。不同浓度柳叶白前乙酸乙酯提取物下的舒张率结果如表2和图4所示。图中Lg-1为0.1mgmL；Lg-0.5为0.3162mgmL；Lg0为1mgmL。。由表2和图4可知，柳叶白前提取物的浓度为0.0316-1mgmL的舒张率较大。且柳叶白前提取物的浓度为0.3162mgmL时的舒张率达到最大100％。表2综上所述，可知柳叶白前提取物具有高效的舒张气道平滑肌的药物，有望应用于缓解哮喘患者发作时气道阻塞的症状，具有极大的推广价值。所述柳叶白前提取物在作为中药制剂时的活性成分时，加些辅料或载体，可制成胶囊剂、片剂、口服剂、微囊制剂、注射剂、栓剂、喷雾剂或软膏剂。需要说明的是，实施例2-实施例3的实验中，所示柳叶白前提取物采用的是柳叶白前乙酸乙酯提取物；而柳叶白前石油醚提取物、柳叶白前乙醇提取物、水相浓缩物也能实现相同或相似的技术效果。实施例41、EAEC能阻断除了VDCCs通道外的其他通道参与气管平滑肌的舒张将采用实施例2中的方法得到的离体小鼠气管环在100μMACh溶液中发生稳定持续的预收缩，加入阻断剂VDCCs通道的选择性阻断剂Nifedipine，结果如图5所示。由图5可知，离体小鼠气管环在100μMACh溶液中发生持续稳定的收缩，当加入电压依赖性钙通道VDCCs通道的选择性阻断剂Nifedipine后，气管环张力逐渐下降，当下降到一定值时不再下降，接着加入0.316mgmlEAEC柳叶白前乙酸乙酯提取物气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。10μMNifedipine能部分舒张乙酰胆碱引起的气管环收缩，剩下的被EAEC完全舒张。表明EAEC柳叶白前乙酸乙酯提取物能阻断除了VDCCs通道外的其他通道参与气管平滑肌的舒张。2、排除VDCCs通道，EAEC能阻断除了VDCCs和NSCCs的其他通道参与气道平滑肌的舒张如图6所示，先加入VDCCs通道的选择性阻断剂Nifedipine，排除VDCCs通道的影响，接着加入100μMAch，离体小鼠气管发生持续稳定的收缩，再加入NSCCs通道非选择性阳离子通道中的TRPC3通道的选择性阻断剂Pyr3，气管环张力逐渐下降，当下降到一定值时不再下降，最后加入0.316mgmlEAEC柳叶白前乙酸乙酯提取物，气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明排除VDCCs通道，EAEC能阻断除了VDCCs和NSCCs外的其他通道参与气道平滑肌的舒张。以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

权利要求：1.柳叶白前提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述柳叶白前提取物的浓度为0.1-5.623mgmL。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述柳叶白前提取物的浓度为0.3162mgmL。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述柳叶白前提取物包括柳叶白前乙醇提取物、柳叶白前石油醚提取物、柳叶白前乙酸乙酯提取物及水相浓缩物中的至少一种。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述柳叶白前提取物的提取步骤为：S1、取柳叶白前药材，粉碎，加入乙醇浸泡获得提取液，提取液用旋转蒸发仪减压蒸干获得浸膏，即为柳叶白前乙醇提取物；S2、将所述柳叶白前乙醇提取物加入一定体积水溶解后，加石油醚萃取分层得石油醚层和第一水层，所述石油醚层经减压浓缩得柳叶白前石油醚提取物；S3、所述第一水层加乙酸乙酯萃取分层得乙酸乙酯层和第二水层，所述乙酸乙酯层经减压浓缩得柳叶白前乙酸乙酯提取物。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤S1中乙醇的体积百分比浓度为80％。7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤S2中将柳叶白前乙醇提取物离心处理，收集上清液，上清液蒸干，收集残余物；将残余物溶解于质量浓度为2％的盐酸溶液中，再用石油醚萃取2-4次。8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤S3中将第一水层的pH值调节至9-11，然后用乙酸乙酯萃取，收集萃取液并蒸干后得浸膏即为柳叶白前乙酸乙酯提取物。

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