申请/专利权人：甘肃省治沙研究所

申请日：2017-12-26

公开（公告）日：2019-12-06

公开（公告）号：CN108077077B

主分类号：A01H4/00(20060101)

分类号：A01H4/00(20060101);A01C1/00(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2019.12.06#授权;2018.06.22#实质审查的生效;2018.05.29#公开

摘要：本发明提供了一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法，包括以下步骤：1将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛至基部切除，得到切除丛生状种毛的种子；2将所述步骤1得到的切除丛生状种毛的种子浸没于氯化钠溶液中，得到去种毛、干净饱满的种子；所述氯化钠溶液的质量浓度为10～16gL。本发明将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛去掉后，使在离体培养中，对种子的消毒更为彻底，大大降低了种子在离体培养时的污染率。

主权项：1.一种顶端长丛生状种毛种子的离体培养方法，包括以下步骤：1将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛至基部切除，得到切除丛生状种毛的种子；2将所述步骤1得到的切除丛生状种毛的种子浸没于氯化钠溶液中，得到去种毛、干净饱满的种子；所述氯化钠溶液的质量浓度为10～16gL；所述顶端长丛生状种毛种子在切除丛生状种毛前进行浸泡，所述浸泡包括：将顶端长丛生状种毛种子原料与水混合，依次进行第一浸泡和第二浸泡；所述第一浸泡的温度为35～45℃，所述第二浸泡的温度为1～8℃；所述第一浸泡的时间为3～5h，所述第二浸泡的时间为1～3h；3将所述去种毛种子进行消毒处理，得到消毒种子；所述消毒处理包括以下步骤：I.将去种毛种子依次经乙醇溶液处理和无菌水冲洗，得到乙醇溶液处理后的种子；所述步骤I中乙醇溶液的体积百分含量为70～80％，所述乙醇溶液处理的时间为25～35s；II.将得到的乙醇溶液处理后的种子依次经氯化汞溶液处理和无菌水冲洗，得到消毒种子；所述步骤II中氯化汞溶液的质量百分含量为0.05～0.15％，所述氯化汞溶液处理的时间为4～8min；4将所述消毒种子置于离体培养基上进行培养。

全文数据：一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法和离体培养方法技术领域[0001]本发明涉及组织培养技术领域，尤其涉及一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法和离体培养方法。背景技术[0002]荒漠植物在干旱荒漠区生态恢复中有不可替代的作用。像其它旱生、沙生植物一样，沙生柽柳在长期适应干旱、沙埋、强光等外界环境条件形成了典型的沙旱生特征，因此有很强的适应性，其主要生境类型为流动和半流动沙地，是沙地植物群落的优势种和主要建群种。然而沙生柽柳结实量极少，种子卵状、较细、长约3〜4ram，又小又轻、顶端丛生状种毛长5mm左右，种子成熟后易随风吹落挂在其它植物上或飘落到地面，难以萌发，导致沙生柽柳在野外自然条件下靠种子自身的力量难以繁殖更新，实生苗越来越少。另外，随着近年全球气候变暖，荒漠区降水区域变化很大，加上土地严重沙化、过度放牧，野生沙生柽柳资源遭到极大的破坏。因此，急需借助人工繁殖方法加快其种质资源的保护。而植物离体快繁利用无性繁殖的方法在保持植物优良特性的基础上，也可解决大多数植物自然条件下难以繁殖的问题。[0003]种子是植物离体快繁初期进行无菌苗培养过程中被广泛采用的外植体材料。种子的的灭菌消毒是植物离体快繁的第一步，也是决定植物无性繁殖成功与否的关键。由于沙生柽柳种子既小又轻，且带有种毛，采摘后较大的空气流动容易使种子漂浮于空气中或粘附于操作台面、器皿及操作人员衣服上，造成操作室环境污染也造成种子大大浪费。[0004]目前，国内尚无有关沙生柽柳或其它顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法和离体培养方法的专利或研究报道。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛的方法，能够降低离体培养过程中的污染率。[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：[0007]本发明提供了一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法，包括以下步骤：[0008]1将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛至基部切除，得到切除丛生状种毛的种子；[0009]2将所述步骤1得到的切除丛生状种毛的种子浸没于氯化钠溶液中，得到去种毛、干净饱满的种子;所述氯化钠溶液的质量浓度为10〜16gL。h[0010]优选的，所述顶端长丛生状种毛种子在切除丛生状种毛前进行浸泡，所述浸泡包括:将顶端长丛生状种毛的种子原料与水混合，依次进行第一浸泡和第二浸泡;所述泡的温度为35〜45°C，所述第二浸泡的温度为1〜8°C。又[0011]优选的，所述第一浸泡的时间为3〜5h，所述第二浸泡的时间为丨〜此。[0012]本发明还提供了一种顶端长丛生状种毛种子的离体培养方法，包括以下步骤.[0013]a.将上述技术方案所述去种毛方法得到的去种毛种子进行消毒处理，得到消毒种子；[0014]b•将所述步骤a得到的消毒种子置于离体培养基上进行培养。[0015]优选的，所述消毒处理包括以下步骤：。[0016]I•将去种毛种子依次经乙醇溶液处理和无菌水冲洗，得到乙醇溶液处理后的种子；[0017]II.将得到的乙醇溶液处理后的种子依次经氯化汞溶液处理和无菌水冲洗，得到消毒种子。[0018]优选的，所述步骤I中乙醇溶液的体积百分含量为7〇〜8〇%，所述乙醇溶液处理的时间为25〜35s。[0019]优选的，所述步骤II中氯化未溶液的质量百分含量为〇.〇5〜〇•15%，所述氯化萊溶液处理的时间为4〜8min。[0020]优选的，所述离体培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分丄〜0.5mgL赤霉素、20〜40gL薦糖和4〜6gL琼脂。[0021]优选的，所述培养的条件包括:所述培养的温度为23〜2rc，所述培养的光照强度为1400〜18001x，所述培养的光照时间为10〜14hd。[0022]本发明提供了一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法，包括以下步骤：丨）将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛至基部切除，得到切除丛生状种毛的种子;2将所述步骤1得到的切除丛生状种毛的种子浸没于氯化钠溶液中，得到去种毛、千净饱满的利j子.所述氯化钠溶液的质量浓度为10〜16gL。’[0023]本发明将顶端长有丛生状种毛种子的种毛去掉后，使在离体培养中，对种子的消毒更为彻底，大大降低了种子在离体培养时的污染率。[0024]本发明实施例的结果显不:本发明提供的顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法，对沙生柽柳种子的去毛率为85〜92%，在操作过程中不会对沙生柽柳种子造成机械损伤，在种子离体培养中，培养基的污染率为5〜15%，与未去毛种子相比，培养基的污染率降低了30〜40%左右。具体实施方式[0025]本发明提供了一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法，包括以下步骤：[0026]1将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛至基部切除，得到切除丛生状种毛的种子；[0027]2将所述步骤1得到的切除丛生状种毛的种子浸没于氯化钠溶液中，得到去种毛、干净饱满的种子;所述氯化钠溶液的质量浓度为10〜16gL。[0028]在本发明中，所述顶端长丛生状种毛种子优选为沙生柽柳或鹅绒藤。[0029]本发明将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛至基部切除，得到切除丛生状种毛至基部的种子。本发明优选使用手术刀片或刮胡刀片切除丛生状种毛至基部。[0030]本发明优选将顶端长丛生状种毛种子在切除丛生状种毛前进行浸泡，所述浸泡包括:将顶端长丛生状种毛种子原料与水混合，依次进行第一浸泡和第二浸泡;所述第一浸泡的温度为35〜45°C，所述第二浸泡的温度为1〜8°c。[0031]在本发明中，所述顶端长丛生状种毛种子原料与水混合的方式优选为将种子原料浸泡于水中。[0032]在本发明中，优选重复第一浸泡和第二浸泡的过程，所述重复的次数优选为i次。[0033]在本发明中，所述第一浸泡的温度优选为35〜45°C，更优选为38〜42°C，最优选为40°C;所述第一浸泡的时间优选为3〜5h，更优选为3•5〜4•a，最优选为4h。在本发明中，所述第一浸泡的温度优选为1〜8°C，更优选为2〜6°C，最优选为4°C;所述第二浸泡的时间优选为1〜3h，更优选为1_5〜2_5h，最优选为此。在本发明中，所述第一浸泡和第二浸泡能使顶端长丛生状种毛种子充分吸水膨胀、增加柔韧性，减少切除种毛时的机械损伤，同时利用第一浸泡和第二浸泡的变温处理能够打破种子的休眠，使去掉种毛的种子离体培养时更快萌发。[0034]本发明将得到的切除丛生状种毛的种子浸没于氯化钠溶液中，得到去种毛、干净饱满的种子;所述氯化钠溶液的质量浓度为10〜16gL。[0035]在本发明中，所述氯化钠溶液的质量浓度优选为10〜I6gL，更优选为12〜14gL，最优选为13gL。在本发明中，所述氯化钠溶液浸泡过程中利用氯化钠溶液浮力大于水浮力的原理，进一步使残留的种毛、不饱满种子、杂质等漂浮于水表面，舍去，沉入水底的种子即为干净、饱满、彻底去掉种毛的种子。将所述沉入水底的种子优选经滤纸漏斗过滤后，再用滤纸将水分吸干。[0036]本发明还提供了一种顶端长丛生状种毛种子的离体培养方法，包括以下步骤：[0037]a.将上述技术方案所述去种毛方法得到的去种毛种子进行消毒处理，得到消毒种子；[0038]b•将所述步骤a得到的消毒种子置于离体培养基上进行培养。[0039]在本发明中，所述消毒处理优选包括以下步骤：[0040]I.将去种毛种子依次经乙醇溶液处理和无菌水冲洗，得到乙醇溶液处理后的种子；[0041]II•将得到的乙醇溶液处理后的种子依次经氯化汞溶液处理和无菌水冲洗，得到消毒种子。[0042]在本发明中，所述步骤I和II无菌水冲洗的时间独立的优选为50〜70s，更优选为55〜65s，最优选为60s。[0043]在本发明中，所述乙醇溶液处理的时间优选为烈〜35s，更优选为28〜32s，最优选为30s;所述乙醇溶液的体积百分含量优选为70〜80%，更优选为72〜78%，最优选为75%。本发明优选在乙醇溶液处理后，对去种毛种子进行无菌水冲洗。在本发明中，优选重复步骤I的过程，所述无菌水重复冲洗的次数优选为5〜7次。[0044]在本发明中，所述氯化汞溶液处理的时间优选为4〜8min，更优选为5〜7min，最优选为6min;所述氯化萊溶液的质量百分含量优选为〇.〇5〜0•15%，更优选为0.08〜0.12%，最优选为0.1%。本发明优选在乙醇溶液处理后的种子经氯化汞溶液处理后，进行无菌水冲洗。在本发明中，优选重复步骤II的过程，所述无菌水重复冲洗的次数优选为5〜7次。[0045]本发明将消毒后的种子置于离体培养基上进行培养。[0046]在本发明中，所述离体培养基优选以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分:0•1〜0•5mgL赤霉素、20〜40gL蔗糖和4〜6gL琼脂;更优选包括:0•2〜0•4mgL赤霉素、25〜35gL蔗糖和4.5〜5•5gL琼脂;最优选包括:〇•3mgL赤霉素、30gL蔗糖和5gL琼脂。在本发明中，所述离体培养基的pH值优选为5.8〜6•0。本发明对所述pH调节的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的PH调节剂进行调节即可，如采用质量浓度为4%的氢氧化钠溶液或质量浓度为8•3%的盐酸溶液进行调节。[0047]在本发明中，所述培养的条件包括:所述培养的温度优选为23〜27°C，更优选为24〜26°C，最优选为25°C;所述培养的光照强度优选为1400〜18001x，更优选为1500〜17001x，最优选为16001x;所述培养的光照时间优选为1〇〜14hd，更优选为11〜13hd，最优选为12hd。[0048]下面结合实施例对本发明提供的一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法和离体培养方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。[0049]实施例1[0050]沙生柽柳去种毛处理[0051]1.种子采收[0052]于当年10月份采收成熟、饱满的沙生柽柳种子，放置在室内纯棉布袋中阴干，然后装于自封袋中封口，以免由于种子太轻并长丛生状种毛，飞入空气中造成污染和浪费。[0053]2.浸泡与去毛[0054]1浸泡：用镊子夹取沙生柽柳种子若干放入烧杯中，烧杯中加入40°C温水，之后将烧杯连同种子放入恒温培养箱，设置温度40°C，浸泡4h，之后转入冰箱中4°C条件下放置2h，之后重复以上恒温培养箱及冰箱中的操作1次。浸泡过程中不能使用玻璃棒搅拌，以免造成种子机械损伤，处理完成后倒掉漂浮于容器表面不饱满的种子，保留容器底部饱满的种子，将饱满种子连同残留的水分一起倒入滤纸漏斗中，过滤掉大部分水分后，再用干滤纸吸取种子表面残留的水分，之后即可得到饱满的带丛生状种毛的沙生柽柳种子。[0055]2去毛:将浸泡之后饱满的带丛生状种毛的种子轻轻夹放到干净的滤纸上，用镊子轻轻夹放整齐，之后用手术刀片将丛生状种毛至基部切下，得到去掉丛生状种毛的沙生柽柳种子，之后将种子放入l〇〇ml的小烧杯并倒入23蒸馏水。[0056]3.净种[0057]将去掉丛生状种毛沙生柽柳种子用氯化钠溶液浸泡，氯化钠溶液的质量浓度为12gL。经过氯化钠溶液浸泡，不饱满及切毛过程中残留的种毛、杂质等漂浮于氯化钠溶液上部，舍去，能更进一步筛选出优质、饱满、纯净度极高的沙生柽柳种子。[0058]4、消毒[0059]整个消毒操作在超净工作台进行，将步骤3得到的沙生柽柳种子放入l〇ml的带盖塑料试管中，试管倒入2375%的乙醇，拧紧盖子后轻轻摇动3〇s，之后用移液器迅速吸掉试管中的乙醇，以免由于乙醇灭菌时间过长导致种子失去活性而死亡，然后倒入23无菌水，拧紧盖子后轻轻摇动2〇s，重复以上操作5遍;之后在试管中倒入230•丨％氯化汞，拧紧盖子后轻轻摇动5min，之后用移液器吸掉试管中的氯化汞，然后倒入23无菌水，拧紧盖子后轻轻摇动2〇s，重复以上操作5遍。以上操作完成后，试管中倒入少许无菌水，连同种子一起倒入已灭菌的滤纸漏斗中，之后用无菌水冲洗试管多次，直至将试管壁上粘附的种子冲洗干净为止;最后制作相同大小的滤纸漏斗若干，叠加、直至吸干种子表面的水分吸千为止，得到消毒后的种子，最后铺开滤纸连同种子放置培养皿中待用。LU〇6〇」5、离体培养[0061]用已灭菌的镊子夹取经过消毒处理的沙生柽柳种子，置于离体培养基上，培养基SS方为MS+0_3mgLGA3+蔗糖30gL+琼脂粉5gL，拧紧瓶盖后放置在组培室进行无菌苗的培养。培养条件为，光照12hd，温度25。：，光照强度1500lx。[0062]结果为：采用本发明的去种毛方法，无菌培养15d后，沙生柽柳种子的去毛率为89.16%，培养基污染率为1〇.26%。[0063]实施例2[00M]沙生柽柳种子未去种毛处理对比例[0065]1.种子采收[0066]于当年1〇月份采收成熟、饱满的沙生柽柳种子，放置在室内纯棉布袋中阴干，夕犬后装于自封袋中封口待用。^[0067]2.浸泡[0068]用镊子夹取沙生柽柳种子若千放入烧杯中，烧杯中加入4TC温水，之后将烧杯连同种子放入恒温培养箱，设置温度40°C，浸泡4h，之后转入冰箱中4r条件下放置3h，之后重复以上恒温培养箱及冰箱中的操作一次。浸泡过程中不能使用玻璃棒搅拌，以免造成种子机械损伤，处理完成后倒掉漂浮于容器表面不饱满的种子，保留容器底部饱满的种子，将饱满种子连同残留的水分一起倒入滤纸漏斗中，过滤掉大部分水分后，再用干滤纸吸取种子表面残留的水分，之后得到千净、一端带有丛生状种毛的沙生柽柳种子。[0069]3.消毒[0070]整个消毒操作在超净工作台进行，将浸泡得到的沙生柽柳种子放入1〇1111的带盖塑料试管中，之后倒入占试管体积2375%的乙醇，拧紧盖子后轻轻摇动3〇s，之后用移液器迅速吸掉试管中的乙醇，以免由于乙醇灭菌时间过长导致种子失去活性而死亡，然后倒入23无菌水，拧紧盖子后轻轻摇动20s，重复以上无菌水冲洗操作5遍;之后试管中倒入230.1%氯化汞，拧紧盖子后轻轻摇动6min，之后用移液器吸掉试管中的氯化汞，然后倒入23无菌水，抒紧盖子后轻轻摇动20s，重复以上无菌水冲洗操作5遍。冲洗完后试管中倒入少许无菌水，连同种子一起倒入已灭菌的滤纸漏斗中，之后用无菌水冲洗试管多次，直至将种子冲洗干净为止;最后制作相同大小的滤纸漏斗若干，叠加、直至吸干种子表面的水分吸干为止，得到消毒后的带毛种子，最后铺开滤纸连同种子放置于培养皿中待用。[0071]4、离体培养[0072]用己灭菌的镊子夹取经过消毒处理的带毛沙生柽柳种子，置于离体培养基上，培养基配方为MS+0.25mgLGA3+蔗糖28gL+琼脂粉4•6gL，拧紧瓶盖后放置在组培室进行无菌苗的培养。培养条件为，光照14hd，温度26°C，光照强度1700lx。[0073]结果为:本发明直接将未经过去毛处理的沙生柽柳种子接种于培养基上，无菌培养15d后，培养基污染率为41.26%。[0074]实施例3[0075]鹅绒藤种子去种毛处理对比例[0076]1.种子采收[0077]于当年9月份采收成熟、饱满的鹅绒藤种子，放置在室内纯棉布袋中阴干，然后装于自封袋中封口，以免由于种子太轻并种毛带丛生状种毛，飞入空气中造成污染和浪费。L0078J2•浸泡与去毛[0079]1浸泡：用镊子夹取鹅绒藤种子若千放入烧杯中，烧杯中加入38»C温水，之后将烧杯连同种子放入恒温培养箱，设置温度38°C，浸泡4h，之后放入冰箱中4。：条件下放置2_5h，之后重复以上恒温培养箱及冰箱中的操作一次。浸泡过程中不能使用玻璃棒搅拌，以免造成种子机械损伤，处理完成后倒掉漂浮于容器表面不饱满的种子，保留容器底部饱满的种子，将饱满种子连同残留的水分一起倒入滤纸漏斗中，过滤掉大部分水分后，再用干滤纸吸取种子表面残留的水分，之后即可得到干净而饱满的鹅绒藤种子。[0080]2去毛：将浸泡之后干净而饱满的种子轻轻夹放到滤纸上，用镊子轻轻夹放整齐，之后用手术刀片至丛生状种毛至基部切下，得到去掉丛生状种毛的鹅绒藤种子，之后将种子放入100ml的小烧杯并倒入23蒸馈水。[0081]3.净种[0082]将去掉丛生状种毛的鹅绒藤种子用氯化钠溶液浸泡，氯化钠溶液的质量浓度为l〇gL。经过氯化钠溶液浸泡，不饱满及切毛过程中残留的种毛、杂质等漂浮于氯化钠溶液上部，舍去，能更进一步筛选出优质、饱满、纯净度极高的鹅绒藤种子。[0083]4、消毒[0084]整个消毒操作在超净工作台进行，将步骤3得到的鹅绒藤种子放入l〇ml的带盖塑料试管中，试管倒入2370%的乙醇，拧紧盖子后轻轻摇动33s，之后用移液器迅速吸掉试管中的乙醇，以免由于乙醇灭菌时间过长导致种子失去活性而死亡，然后倒入23无菌水，拧紧盖子后轻轻摇动20s，重复以上操作5遍;之后在试管中倒入230.12%氯化汞，拧紧盖子后轻轻摇动5min，之后用移液器吸掉试管中的氯化汞，然后倒入23无菌水，拧紧盖子后轻轻摇动2〇s，重复以上操作5遍。以上操作完成后，试管中倒入少许无菌水，连同种子一起倒入已灭菌的滤纸漏斗中，之后用无菌水冲洗试管多次，直至将试管壁上粘附的种子冲洗干净为止;最后制作相同大小的滤纸漏斗若干，叠加、直至吸干种子表面的水分吸干为止，得到消毒后的种子，最后铺开滤纸连同种子放置培养皿中待用。[0085]5、离体培养[0086]用已灭菌的镊子夹取经过消毒处理的鹅绒藤种子，置于离体培养基上，培养基配方为MS+0•4mgLGA3+蔗糖33gL+琼脂粉4•5gL，拧紧瓶盖后放置在组培室进行无菌苗的培养。培养条件为，光照13hd，温度26°C，光照强度1600lx。[0087]结果为:采用本发明的去种毛方法，鹅绒藤种子的去毛率为90.68%，经过去毛的鹅绒藤种子无菌培养后，培养基15d时的污染率不到10%。[0088]实施例4[0089]鹅绒藤种子未去种毛处理对比例[0_]1.种子采收[0091]于当年9月份采收成熟、饱满的鹅绒藤种子，放置在室内纯棉布袋中阴干，然后装于自封袋中拧紧瓶盖，以免由于种子太轻并种毛带丛生状种毛，飞入空气中造成污染和浪费。[0092]2•浸泡[0093]用镊子夹取鹅绒藤种子若干放入烧杯中，烧杯中加入36。：温水，之后将烧杯连同种子放入恒温培养箱，设置温度40°C，浸泡4h，之后转入冰箱中6。：条件下放置lh,之后重复以上恒温培养箱及冰箱中的操作一次。浸泡过程中不能使用玻璃棒搅拌，以免造成种子机械损伤，处理完成后倒掉漂浮于容器表面不饱满的种子，保留容器底部饱满的种子，将饱满种子连同残留的水分一起倒入滤纸漏斗中，过滤掉大部分水分后，再用干滤纸吸取种子表面残留的水分，之后即可得到干净而饱满的鹅绒藤种子。[0094]3•消毒[0095]整个消毒操作在超净工作台进行，将浸泡得到的鹅绒藤种子放入i〇ml的带盖塑料试管中，试管中倒入2375%的乙醇，拧紧盖子后轻轻摇动35s，之后用移液器迅速吸掉试管中的乙醇，以免由于乙醇灭菌时间过长导致种子失去活性而死亡，然后倒入23无菌水，拧紧盖子后轻轻摇动20s，重复以上操作5遍;之后试管中倒入230.1%氯化汞，拧紧盖子后轻轻摇动6min，之后用移液器吸掉试管中的氯化汞，然后倒入23无菌水，拧紧盖子后轻轻摇动20s，重复以上操作5遍。以上操作完成后，试管中倒入少许无菌水，连同种子一起倒入己灭菌的滤纸漏斗中，之后用无菌水冲洗试管多次，直至将试管壁上残留的种子冲洗干净为止；最后制作相同大小的滤纸漏斗若千，叠加、直至吸干种子表面的水分吸干为止，得到消毒后的种子，最后铺开滤纸连同种子放置培养皿中待用。[0096]4、离体培养[0097]用已灭菌的镊子夹取经过消毒处理的鹅绒藤种子，置于离体培养基上，培养基配方为MS+0•2•5mgLGA3+蔗糖25gL+琼脂粉5•5gL，抒紧瓶盖后放置在组培室进行无菌苗的培养。培养条件为，光照14hd，温度25°C，光照强度16001x。[0098]发明直接将未经过去毛处理的鹅绒藤种子接种于培养基上，无菌培养15d后，培养基污染率为38.25%。[0099]由以上实施例可知，本发明提供的顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法，对沙生柽柳种子的去毛率为85〜92%，在操作过程中不会对沙生柽柳种子造成机械损伤，在种子离体培养中，培养基的污染率为1〇%左右，与未去毛相比，培养基的污染率降低了30〜40%左右。对鹅绒藤种子的去毛率为9〇_68%，在操作过程中不会对鹅绒藤种子造成机械损伤，在种子离体培养过程中，培养基的污染率不到10%。、[0100]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。一

权利要求：1.一种顶端长丛生状种毛种子的去种毛方法，包括以下步骤：1将顶端长丛生状种毛种子的丛生状种毛至基部切除，得到切除丛生状种毛的种子；2将所述步骤1得到的切除丛生状种毛的种子浸没于氯化钠溶液中，得到去种毛i干净饱满的种子;所述氯化钠溶液的质量浓度为1〇〜16gL。2.根据权利要求1所述的去种毛方法，其特征在于，所述顶端长丛生状种毛种子在切除丛生状种毛前进行浸泡，所述浸泡包括:将顶端长丛生状种毛种子原料与水混合，依次进行第一浸泡和第二浸泡;所述第一浸泡的温度为35〜45°C，所述第二浸泡的温度为1〜8。：。3.根据权利要求2所述的去种毛方法，其特征在于，所述第一浸泡的时间为3〜5h，所述第二浸泡的时间为1〜3h。4.一种顶端长丛生状种毛种子的离体培养方法，包括以下步骤：a•将权利要求1〜3任意一项所述去种毛方法得到的去种毛种子进行消毒处理，得到消毒种子；b•将所述步骤a得到的消毒种子置于离体培养基上进行培养。5.根据权利要求4所述的离体培养方法，其特征在于，所述消毒处理包括以下步骤：I•将去种毛种子依次经乙醇溶液处理和无菌水冲洗，得到乙醇溶液处理后的种子；II.将得到的乙醇溶液处理后的种子依次经氯化汞溶液处理和无菌水冲洗，得到消毒种子。6.根据权利要求5所述的离体培养方法，其特征在于，所述步骤I中乙醇溶液的体积百分含量为70〜80%，所述乙醇溶液处理的时间为25〜35s。7.根据权利要求5所述的离体培养方法，其特征在于，所述步骤11中氯化汞溶液的质量百分含量为0.05〜0•I5%，所述氯化汞溶液处理的时间为4〜8min。8.根据权利要求4所述的离体培养方法，其特征在于，所述离体培养基以MS培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分:0•1〜0•5mgL赤霉素、2〇〜4〇gL蔗糖和4〜6gL琼脂。9.根据权利要求4或8所述的离体培养方法，其特征在于，所述培养的条件包括:所述培养的温度为23〜27。3，所述培养的光照强度为14〇〇〜l8〇〇lx，所述培养的光照时间为1〇〜14hd〇

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