申请/专利权人：桂林理工大学

申请日：2019-09-29

公开（公告）日：2020-01-10

公开（公告）号：CN110672863A

主分类号：G01N33/84(20060101)

分类号：G01N33/84(20060101);G01N33/53(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2023.09.08#发明专利申请公布后的视为撤回;2020.02.11#实质审查的生效;2020.01.10#公开

摘要：本发明公开了一种二价铅离子免仪器定量检测方法。利用Pb2+特异性结合修饰在微珠表面的DNA酶链后切割底物DNA链以释放催化探针用于原位产生气体产物，进而介导多通道纸芯片纸体润湿性变化以选择性调控彩色试剂在不同纸通道中流动长度的机制。Pb2+浓度与不同通道中彩色试剂的流动长度差值成正比关系。通过目视直接读取纸芯片中与彩色试剂流动长度相关的刻度数目和差值，就能实现nM水平Pb2+的免仪器定量检测。本发明方法操作简单、成本低廉、分析快速、不需使用专业分析仪器设备、适于Pb2+的现场分析和即时检测。本方法能直接推广应用于环境监测、食品安全、医学诊断等诸多领域里各类溶液样品中Pb2+的简单、经济、快速、灵敏、特异的便携式定量检测。

主权项：1.一种二价铅离子免仪器定量检测方法，其特征在于具体步骤为：（1）制备多通道纸芯片，并在其长方形加样通道中圆形微区滴加固定表面修饰了末端标记催化探针的底物DNA链及Pb2+依赖的DNA酶链的功能化微珠；（2）在纸芯片上部长方形分析通道的三个尺寸相同的圆形微区依次固定反应试剂1、反应试剂2以及彩色试剂，并在纸芯片下部长方形分析通道的三个尺寸相同的圆形微区依次固定反应试剂1、惰性试剂以及彩色试剂；（3）将纸芯片加样通道尖端置于Pb2+样品溶液和pH值为7的缓冲溶液的等体积混合溶液中数秒钟，随后观察两个分析通道中彩色试剂的流动情况，待其停止流动后读取与彩色试剂流动长度相关的刻度数目，所得流动长度差值与Pb2+的浓度呈正相关，从而实现Pb2+的免仪器定量检测；所述纸芯片为镂空型和疏水性物质图案化型中的一种，其具有Y型结构，主要包含连通的长方形加样通道和上下两个形状相同的长方形分析通道；所述纸芯片的长方形加样通道的长为1~2cm，宽为1.5~2.5mm，其中部设计直径为4~7mm的圆形微区用于滴加固定表面修饰了末端标记催化探针的底物DNA链及Pb2+依赖的DNA酶链的功能化微珠，该功能化微珠为无机物和有机物中的一种，其粒径为1~5µm，同时该功能化微珠不随液体在纸通道中流动；所述催化探针、反应试剂1和反应试剂2在上部分析通道的第二个圆形微区混合后能够生成不溶于反应溶液的气体产物，其中上部分析通道长为5~7cm，宽为1.5~2.5mm，第二个圆形微区的直径为4~7mm；所述惰性试剂与反应试剂2的润湿性类似，且与催化探针及反应试剂1三者在下部分析通道的第二个圆形微区混合后不发生化学与生物反应；所述彩色试剂被滴加固定在纸芯片两个分析通道中最后一个圆形纸微区的整个亲水性纸体中，该彩色试剂在纸体中所形成的的彩色印迹具有良好的水溶性，被反应溶液溶解后形成的彩色溶液能够在毛细管作用下从圆形亲水性纸体中自发流向后部的长方形亲水性纸通道；所述Pb2+样品溶液被纸芯片吸取后发生的反应是Pb2+可特异性结合修饰在微珠表面的DNA酶链以切割底物DNA链，从而释放出催化探针与上部分析通道中的反应试剂1和反应试剂2在第二个圆形纸微区中混合，三者混合后生成不溶于反应溶液的气体产物，增强该圆形纸微区中纸体的疏水性，降低或完全阻止后续流往第三个圆形纸微区以溶解彩色试剂并在后部长方形通道中流动的反应溶液的体积，进而调控总体积恒定的反应溶液更多地流向下部分析通道。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 桂林理工大学 一种二价铅离子免仪器定量检测方法

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