申请/专利权人：上海韦翰斯生物医药科技有限公司

申请日：2019-11-07

公开（公告）日：2020-02-14

公开（公告）号：CN110791554A

主分类号：C12Q1/6851(20180101)

分类号：C12Q1/6851(20180101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2020.03.10#实质审查的生效;2020.02.14#公开

摘要：本发明提供一种微量DNA的定量方法，至少包括以下步骤：设计内标模板；设计能够同时扩增目标模板和内标模板的引物对；利用所述引物对，将待测DNA序列和内标模板混合后进行PCR扩增；将扩增产物用二代测序平台对应的接头引物对进行再次扩增，获得二代测序文库；对所述二代测序文库进行二代测序平台测序；根据公式待测DNA的拷贝数=C*A1A2，计算得目标模板的拷贝数，即为待测DNA的拷贝数；其中，C为内标模板的拷贝数；A1为目标模板序列的测序覆盖深度；A2为内标模板序列的测序覆盖深度。本发明不仅可以准确定量微量DNA，还可以直接读取目标DNA模板的序列，定量结果准确性不受非特异性扩增的影响。

主权项：1.一种微量DNA的定量方法，其特征在于，所述定量方法至少包括以下步骤：1设计内标模板，所述内标模板与目标模板的序列仅有一个或几个碱基不一致；所述目标模板为待测DNA序列的一段或全部；2设计扩增引物对，所述扩增引物对满足以下条件：能够同时特异性扩增目标模板和内标模板；所述引物与内标模板的结合部位位于内标模板与目标模板不一致碱基的两侧；上游引物及下游引物的5’端设有二代测序平台接头互补段；3利用步骤2获得的引物对，将待测DNA序列和已知拷贝数的内标模板混合后进行PCR扩增；4将步骤3获得的扩增产物用二代测序平台对应的接头引物对进行再次扩增，获得二代测序文库；5对所述二代测序文库进行二代测序平台测序；6根据步骤5中的测序结果，根据公式I，计算得目标模板的拷贝数，即为待测DNA的拷贝数；待测DNA的拷贝数＝C*A1A2I其中，C为内标模板的拷贝数；A1为目标模板序列的测序覆盖深度；A2为内标模板序列的测序覆盖深度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海韦翰斯生物医药科技有限公司 一种微量DNA的定量方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD