申请/专利权人：河南牧业经济学院

申请日：2019-12-04

公开（公告）日：2020-03-24

公开（公告）号：CN110907579A

主分类号：G01N30/88(20060101)

分类号：G01N30/88(20060101);G01N30/02(20060101);G01N30/06(20060101);G01N30/14(20060101);G01N30/54(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.02.28#发明专利申请公布后的驳回;2020.04.17#实质审查的生效;2020.03.24#公开

摘要：本发明公开了一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，具体包括以下步骤：步骤一：色谱条件的确立；步骤二：提取工艺：精密称取白头翁散，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；步骤三：溶液的配制：包括对照品贮备溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液以及对照药材溶液的制备；步骤四：方法学考察：包括专属性试验、线性关系的考察、精密度试验和准确度试验；步骤五：样品测定：包括自制白头翁散样品含量测定和市售白头翁散含量测定。该发明的技术效果为能够实现对白头翁散中的有效成分秦皮甲素、秦皮乙素进行精确定量。

主权项：1.一种白头翁散中秦皮甲素、秦皮乙素HPLC定量分析方法，其特征在于：具体包括以下步骤：步骤一：色谱条件的确立：将流动相乙腈-0.1％磷酸水溶液的比例由8:92改为12:88，确定色谱条件为：色谱柱：WatersSymmetryC18柱；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液12:88；流速：1.0mLmin；波长：334nm；柱温：30℃；进样量：10μL；该色谱条件下理论塔板数按秦皮乙素峰计算不低于5000；步骤二：提取工艺：精密称取白头翁散1.875g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤三：溶液的配制：包括对照品贮备溶液、对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液以及对照药材溶液的制备：所述对照品贮备溶液的制备方法为：精密称取秦皮甲素、秦皮乙素对照品适量，加甲醇使成每1mL含秦皮甲素408μg、秦皮乙素260μg的混合溶液，作为对照品贮备溶液；所述对照品溶液的制备方法为：精密量取对照品贮备溶液5mL，加甲醇逐级稀释，得一系列浓度分别为25.5μgmL秦皮甲素和16.25μgmL秦皮乙素、51μgmL秦皮甲素和32.5μgmL秦皮乙素、102μgmL秦皮甲素和65μgmL秦皮乙素、204μgmL秦皮甲素和130μgmL秦皮乙素、408μgmL秦皮甲素和260μgmL秦皮乙素的混合对照品溶液；所述供试品溶液的制备方法为：按上述步骤二中的提取工艺制备。所述阴性对照溶液的制备方法为：取阴性样品粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；所述对照药材溶液的制备方法为：取秦皮对照药材粉末1.875g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤四：方法学考察：包括专属性试验、线性关系的考察、精密度试验和准确度试验；所述专属性试验具体为分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液适量，按步骤一中的色谱条件测定；所述线性关系的考察具体为取上述系列浓度的对照品溶液，按步骤一中的色谱条件测定，记录峰面积；所述精密度试验具体为选取秦皮甲素和秦皮乙素浓度分别为102μgmL、65μgmL混合对照品溶液，重复进样6次，记录峰面积并计算相对标准偏差RSD，进行日内精密度测定；所述准确度试验具体为取同批次的白头翁散供试品共9份，每份约0.5g，分为3组，分别加入一定量的秦皮甲素和秦皮乙素对照品，按步骤一中的色谱条件测定和步骤二中的提取方法处理，记录色谱图，按以下公式计算秦皮甲素和秦皮乙素的平均回收率和RSD：回收率％＝C－BA×100％；C为实际测得量；B为已知样品含量；A为对照品加入量；步骤五：样品测定：包括自制白头翁散样品含量测定和市售白头翁散含量测定；所述自制白头翁散样品含量测定具体为精密称取3批自制白头翁散各1.875g，按步骤三中的阴性对照溶液的制备方法和步骤一中的色谱条件处理，记录峰面积，并用外标法计算样品含量；所述市售白头翁散含量测定具体为取8批市售白头翁散样品各精密称取1.875g，按步骤三中的对照药材溶液的制备方法处理，按步骤一中的色谱条件处理，并用外标法计算样品含量。

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