申请/专利权人：郑州大学

申请日：2019-12-20

公开（公告）日：2020-05-15

公开（公告）号：CN111157634A

主分类号：G01N30/02(20060101)

分类号：G01N30/02(20060101);G01N30/06(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.10.27#发明专利申请公布后的驳回;2020.06.09#实质审查的生效;2020.05.15#公开

摘要：本发明公开了一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，包括以下步骤：选取样品：选取肌红蛋白Myoglobin，Mb和脱辅基肌红蛋白Apomyoglobin，ApoMb为蛋白质样品，肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白的质量均为150μg；制备溶液：将肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白溶于1.5mL的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES溶液中，得到蛋白质溶液；本发明通过设置选取样品、制备溶液、反应、加入碳酸氢铵、煮沸、制备肽段溶液和进行检测的工艺流程，解决了目前多数试剂会中和赖氨酸侧链的正电荷，导致标记后蛋白质结构的改变以及活性丧失的问题，该质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，具备能够用于考察蛋白质结构的细微构象变化，在标记过程中蛋白质活性保持不变的优点。

主权项：1.一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：选取样品：选取肌红蛋白Myoglobin，Mb和脱辅基肌红蛋白Apomyoglobin，ApoMb为蛋白质样品，肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白的质量均为150μg；步骤2：制备溶液：将肌红蛋白和脱辅基肌红蛋白溶于1.5mL的4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES溶液中，得到蛋白质溶液；步骤3：反应：蛋白质溶液中加入甲醛CH2O和氰基硼氢化钠NaBH3CN，甲醛CH2O的要求为4.8μL，4％，氰基硼氢化钠NaBH3CN的值为4.8μL，0.6molL，氰基硼氢化钠NaBH3CN的终浓度为2mmolL；步骤4：加入碳酸氢铵：溶液中加入75μL，1molL的碳酸氢铵NH4HCO3进行反应，碳酸氢铵NH4HCO3的终浓度为50mmolL；步骤5：煮沸：溶液以100℃的温度煮沸4min，使蛋白变性；步骤6：制备肽段溶液：加热完成后加入糜蛋白酶Chymotrypsin，得到肽段溶液；步骤7：进行检测：对得到的酶解肽段溶液进行酸化处理，使用液相色谱仪和质谱仪对溶液进行液相色谱分离和质谱检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 郑州大学 一种质谱技术检测蛋白质构象变化的方法

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