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【发明公布】一种高效的提取毛干中DNA的方法_东北林业大学_202010044705.9 

申请/专利权人:东北林业大学

申请日:2020-01-14

公开(公告)日:2020-05-15

公开(公告)号:CN111154751A

主分类号:C12N15/10(20060101)

分类号:C12N15/10(20060101);C12Q1/6806(20180101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2023.02.17#授权;2020.06.09#实质审查的生效;2020.05.15#公开

摘要:一种高效的提取毛干中DNA的方法,属于分子生物学技术领域。为了提高毛干DNA回收效率,减少色素等污染物对下游实验的干扰,扩大毛干适用范围,本发明用1%SDS和4MNaOH溶液处理样本,然后按一定比例加入SDS、DTT、PK和Ca2+进行消化,随后用EDTA溶液螯合掉Ca2+和其他离子,提高毛发消化效率,最后利用磁珠对DNA的强吸附能力吸附DNA,再使用漂洗液A处理不同类型的发干,最终获得毛干中DNA。本发明方法获得的DNA经过一轮PCR,就可以检测到核基因组的目的片段,SNP和STR分型的成功率和正确率均较高。本发明适用于动物生态、法医鉴定等各种条件下人类和动物毛干DNA的提取。

主权项:1.一种高效的提取毛干中DNA的方法,其特征在于,步骤如下:一、毛干的前处理:将毛干置于酒精中浸泡5min~10min后蒸干,然后与质量分数1%-2%的SDS溶液混合,60℃~65℃条件下加热30min~40min;取出毛干清洗后,再将毛干置于4molL的NaOH溶液中,65℃~70℃浸泡15s~35s,取出清洗后,用酒精浸泡5min~10min;二、毛干的消化:将经过前处理后的毛干置于处理液中,56℃消化3h~4h,然后再加入PK溶液消化1h,再加入EDTA溶液56℃温育30min~40min,得到毛干消化液;所述处理液由消化液A、PK溶液、SDS溶液和DTT溶液配制而成,所述消化液A为含有50mmolLTris-HCl、10mmolLCa2+和100mmolLNaCl的水溶液;三、消化液提纯:1将步骤二得到的毛干消化液与氯仿溶液按照1:1的体积比混合后静置3min~4min,然后离心,取上清;2向上清液中加入等体积异丙醇,混匀后加入磁珠,静置3min~4min,然后进行磁分离,弃废液;3然后,利用漂洗液A对磁珠进行漂洗,弃废液;所述漂洗液A为异丙醇和TE的混合液,pH=8;如步骤2中上清液无色,则不需要步骤3;4然后,利用体积分数为70%~75%乙醇对磁珠进行漂洗,弃废液;5然后,将磁珠离心后进行磁分离,弃废液,晾干磁珠,去除乙醇;6再将磁珠与洗脱液混合,56℃加热10min~15min,离心后进行磁分离,得到的上清液即为毛干DNA。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 东北林业大学 一种高效的提取毛干中DNA的方法

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