申请/专利权人：南京农业大学

申请日：2019-06-23

公开（公告）日：2020-05-19

公开（公告）号：CN110229757B

主分类号：C12N1/14(20060101)

分类号：C12N1/14(20060101);A01N63/38(20200101);A01P21/00(20060101);C05F11/08(20060101);C12R1/885(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.05.19#授权;2019.10.15#实质审查的生效;2019.09.13#公开

摘要：本发明公开了一株有效促进作物生长的桔绿木霉JS84及其研制的生物有机肥。一种桔绿木霉JS84，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.17466，该菌株能够拮抗香蕉、黄瓜等多种尖孢镰刀菌。所述的生物有机肥是于普通有机肥中添加功能菌株JS84所得，活菌数优选≥2.0×107CFUg有机肥干重。使用该产品，对黄瓜苗期的促生效果好，能够育出根际带有大量活性功能微生物的优质种苗，促进种苗移栽后的生长和产量。

主权项：1.一种有效促进作物生长的桔绿木霉TrichodermacitrinovirideJS84，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年4月12日，保藏号为CGMCCNO.17466。

全文数据：一株有效促进作物生长的桔绿木霉JS84及其研制的生物有机肥技术领域本发明属于农业微生物领域，具体涉及一株有效促进作物生长的桔绿木霉JS84及其应用。背景技术植物根际促生菌PlantGrowth-promotingRhizobacteria，PGPR是指存在于植物根际表面及根系周围土壤微环境中，能通过直接或间接的方式显著促进植物生长的微生物Ahmadetal.,MicrobiologicalResearch,2008,1632:173-181。木霉作为PGPR的一种，能有效地促进植物生长，同时有着成本低廉、使用安全、持续效果好、增产稳定、对环境和食品安全等特点。因此，探索木霉对作物产量和生长性状的影响，可为木霉制剂在绿色无公害蔬菜生产上的合理利用提供科学依据，对节约化肥资源、发展有机农业具有重要意义。在多篇文献CN101637187A、CN105219650A中公开了桔绿木霉Trichodermacitrinoviride能够防治植物真菌病害，但尚未见其促生作用的相关报道。发明内容本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，提供一株有效促进作物生长的桔绿木霉JS84。本发明的另一目的是提供该真菌的应用。本发明的又一目的是提供该真菌制备的生物肥料及其应用。本发明的目的可通过以下技术方案实现：一株用于促进作物生长的促生菌株JS84，分离自江苏农田土壤中，分类命名为桔绿木霉Trichodermacitrinoviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2019年4月12日，保藏编号为CGMCCNo.17466。菌株JS84在PDA平板上生长较快，呈辐射状生长菌丝，大量产孢，绿色孢子，产孢簇为白色至绿色。菌株ITSrDNA序列构建的系统发育树分析表明，菌株JS84位于Trichodermacitrinoviride分支上，结合生理生化试验将JS84鉴定为桔绿木霉。本发明所述桔绿木霉JS84在促进植物生长中的应用。本发明所述桔绿木霉JS84在制备促进植物生长的生物肥料中的应用。由本发明所述桔绿木霉JS84制备的生物肥料。所述的生物肥料优选主要通以下方法制备：将保藏号为CGMCCNo.17466的桔绿木霉JS84接种到PDA液体培养基中，进行液体发酵，发酵温度为28℃，搅拌速度为170转分钟，发酵时间为96h，光照条件下发酵更优，使发酵液中含菌量≥1×106个mL。每干重100g秸秆和200ml水混合，加入到6.6ml氨基酸拌匀。115℃灭菌1h。灭菌冷却后，接入20％木霉发酵液，拌匀，均匀铺开在周转箱中，在28℃培养4-5天后，制作成木霉菌种，放于4℃冰箱保存。按加入5％～15％的木霉菌种于有机肥中，制作成为木霉生物有机肥料。所用PDA培养液配制方法为，以配制1L培养基为例：用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮20min，经过滤后滤液中加20g普通葡萄糖，定容至1000ml，pH值自然，115℃灭菌30min。本发明所述的生物肥料在促进植物生长中的应用。有益效果：本发明主要利用分离筛选出根际有效定植的桔绿木霉的施用，显著提高作物苗期的生长速度，促进作物对土壤中养分的吸收利用，从而促进作物生长。本发明促生菌JS84在多季盆栽试验中表现出的稳定促生能力。本发明生物肥料应用后促生效果明显，适合蔬菜作物产区大面积使用。附图说明图1基于菌株JS84的ITSrDNA基因序列采用邻接法建立的系统发育树图2第一季黄瓜盆栽效果图图3第二季黄瓜盆栽效果图生物材料保藏信息菌株JS84，分类命名为桔绿木霉Trichodermacitrinoviride，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年4月12日，保藏编号为CGMCCNo.17466。具体实施方式实施例1、功能菌株的分离及鉴定将5g土样置于盛有45ml无菌水的三角瓶中，28℃振荡30min170rmin制成土壤悬液。吸取0.1mL土壤悬液置于木霉选择性平板并涂布，放置于28℃培养箱中培养48h，观察平板上菌落生长情况，挑选差异菌落纯化，将纯化后的菌株接种到PDA培养基上并置于4℃冰箱保存待用。将选出的木霉菌株接种于PDA培养基上，分别放置于28℃，37℃和40℃培养箱中，培养5d后观察，筛选出能在40℃正常生长的高温木霉。通过筛选最终获得一株木霉命名为JS84，菌株JS84在PDA平板上菌株JS84在PDA平板上生长较快，呈辐射状生长菌丝，大量产孢，绿色孢子，产孢簇为白色至绿色。菌株ITSrDNA序列构建的系统发育树分析表明，菌株JS84位于Trichodermacitrinoviride分支上，将JS84归类为Trichodermacitrinoviride，将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17466。实施例2、功能菌生物肥料的产生将菌株JS84CGMCCNo.17466接种至PDA培养液中液体发酵，发酵生产的条件为：发酵温度为28℃，搅拌速度为170转分钟，发酵时间为96h，使发酵液中含菌量≥1×106个mL。每干重100g秸秆和200ml水混合，加入到6.6ml酸解氨基酸液ZL201410042218.3中公开的液体氨基酸复合物拌匀。115℃灭菌1h。灭菌冷却后，接入20％木霉发酵液，拌匀，均匀铺开在周转箱中，在28℃培养4-5天后，制作成木霉菌种，放于4℃冰箱保存。按加入5％～15％的木霉菌种于有机肥中，制作成为木霉生物有机肥料。其中所用PDA培养液配制方法为，以配制1L培养基为例：用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮20min，经过滤后滤液中加20g普通葡萄糖，定容至1000ml，pH值自然，115℃灭菌30min。实施例3、盆栽促生效果试验3.1促生生物肥在黄瓜第一季、第二季上的应用效果促生盆栽试验在国家有机类肥料工程技术研究中心宜兴温网室内进行，供试土壤为不含病原菌的健康沙土，供试黄瓜品种为不含病原菌的露丰黄瓜。将黄瓜种子浸泡在常温水中1h，放置在湿润的纱布上于30℃培养箱中催芽12～24h，待75％以上种子萌发后，选取露白的种子移至育苗盘育苗，待长出2片真叶后挑选长势一致幼苗移栽盆中。试验设置两个处理：1CK，不施用任何肥料；2处理OF，施用普通有机肥；3处理JS84，施用木霉生物有机肥。每个处理6盆，每盆装1.5kg土，OF加入2％的普通有机肥，JS84加入2％的木霉生物有机肥，常规管理，30d左右后测量植株的生理指标。第一季黄瓜促生效果如图2、生物量情况如表1所示，盆栽培养30d后，施用JS84木霉生物有机肥处理JS84、施用有机肥OF处理和不施肥CK处理在黄瓜植株的株高、茎粗、地上部鲜重和地上部干重方面均有显著性差异。与不施肥CK处理相比，施用JS84木霉生物有机肥处理JS84，黄瓜植株的株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重分别增加了17％、8％、5％、18％和36％。与OF相比，施用JS84木霉生物有机肥的处理在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重分别增加了5％、6％、2％、9％和16％。第二季黄瓜促生效果如图3、生物量情况如表2所示，盆栽培养30d后，施用JS84木霉生物有机肥处理JS84、施用有机肥OF处理和不施肥CK处理在黄瓜植株的株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重方面均有显著性差异。与CK相比，施用JS84木霉生物有机肥的处理在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重方面，分别增加了60％、30％、11％、58％和41％。与OF相比，施用JS84木霉生物有机肥的处理在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重方面，分别增加了30％、11％、3％、23％和18％。综上两季盆栽结果表明，与不施肥CK处理和有机肥OF处理的黄瓜在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重和地上部干重之间差异明显，说明JS84菌株的促生效果明显。综上两季盆栽结果表明，施用JS84木霉生物有机肥JS84处理黄瓜植株长势优于不施肥CK处理和普通有机肥OF处理，且在株高、茎粗、叶绿素、地上部鲜重、地上部干重方面达到显著性差异，表明JS84菌株具有明显的促生效果。表1、第一季黄瓜促生盆栽试验生物量情况表2、第二季黄瓜盆栽促生试验生物量情况

权利要求：1.一种有效促进作物生长的桔绿木霉TrichodermacitrinovirideJS84，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为2019年4月12日，保藏号为CGMCCNO.17466。2.权利要求1所述的桔绿木霉JS84在制备促进作物生长的功能型生物有机肥中的应用。3.一种有效促进作物生长的功能型生物有机肥，其特征在于在普通有机肥中添加权利要求1所述的桔绿木霉JS84的木霉固体菌种所得。4.根据权利要求3所述的桔绿木霉JS84的功能型生物有机肥，其特征在于所述的功能型木霉生物有机肥中所述的桔绿木霉JS84活菌数≥2.0×107CFUg有机肥干重，有机质≥45％，总养分N+P2O5+K2O5％，水分≤30％。5.根据权利要求3所述的功能型生物有机肥，其特征在于所述的桔绿木霉JS84固体菌种通过以下发酵方法制备：将保藏号为CGMCCNO.17466的桔绿木霉JS84接种到PDA培养液中，进行液体发酵生产，发酵温度范围28℃，搅拌速度为170转分钟，发酵时间为96h，使发酵液中含菌量≥1.0×108个ml；每干重100g秸秆和200ml水混合，加入到6.6ml氨基酸液拌匀，115℃灭菌1h。灭菌冷却后，接入20％木霉发酵液，拌匀，均匀铺开在周转箱中，在28℃培养4-5天后，制作成木霉菌种，放于4℃冰箱保存。6.根据权利要求3所述的功能型生物有机肥，其特征在于所述的作物为黄瓜。7.权利要求3所述的功能型生物有机肥的制备方法，其特征在于包含以下步骤：1制备保藏号为CGMCCNO.17466的桔绿木霉JS84木霉固体菌种；2将步骤1制备的木霉菌种按有机肥干重的5％～15％加入普通有机肥混合均匀得功能型生物有机肥，使其中活菌数≥2.0×107CFUg有机肥干重。

百度查询： 南京农业大学 一株有效促进作物生长的桔绿木霉JS84及其研制的生物有机肥

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