申请/专利权人：内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司

申请日：2017-05-22

公开（公告）日：2020-05-22

公开（公告）号：CN106989984B

主分类号：G01N1/42(20060101)

分类号：G01N1/42(20060101);G01N1/38(20060101);G01N21/31(20060101);G01N21/78(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.05.22#授权;2017.08.22#实质审查的生效;2017.07.28#公开

摘要：本发明提出了检测样品中目标物的预处理方法、检测样品中目标物的方法以及检测奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐的方法。所述检测样品中目标物的预处理方法包括：将所述样品进行冷冻处理，以便得到冷冻产物，其中，所述样品为奶酪制品。本发明的检测样品中目标物的预处理方法能够有效地提高奶酪制品的水溶性，以便于后期检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。

主权项：1.一种检测奶酪制品中目标物的方法，其特征在于，包括：1准确称量10g奶酪样品置于超低温冷冻瓶内，连接好样品口，开启超低温冷冻仪器，使冷冻瓶内奶酪在10分钟内冷却至-180℃，并保持2小时，得到预处理产物；2将所述预处理产物进行除蛋白质及脂肪处理，得到第一处理液；3移取20mL所述第一处理液于100mL小烧杯中，加入5mL含有2molL盐酸的缓冲溶液，摇匀，倒入镉柱顶部的贮液杯中，以小于6mLmin的流速过柱，过柱后的洗提液接入100mL容量瓶中，当贮液杯快要排空时，用15mL水冲洗小烧杯，再倒入贮液杯中，冲洗水流完后，再用15mL水重复一次，当第二次冲洗水快流尽时，将贮液杯装满水，以最大流速过柱，当容量瓶中的洗提液接近100mL时，取出容量瓶，用水定容，混匀；4分别移取20mL步骤2所得第一处理液和20mL步骤3所得洗提液于100mL容量瓶中，分别进行如下操作：在每个所述容量瓶中加水至60mL，然后先加入6mL显色液1，所述显色液1选自体积比为450：550的水-盐酸溶液，边加边混；再加入5mL显色液2，所述显色液2选自5gL的磺胺溶液，混合，在室温下静置5min，避免直射阳光；加入2mL显色液3，所述显色液3选自1gL的N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐溶液，混合，在室温下静置5min，避免直射阳光；用水定容至刻度，混匀；在15min内用538nm波长，以空白试验液体为对照测定样品溶液的吸光度；5分别移取0mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL、12mL、16mL和20mL亚硝酸钠标准溶液于9个100mL容量瓶中，分别进行如下操作：在每个所述容量瓶中加水至60mL，然后先加入6mL所述显色液1，边加边混；再加入5mL所述显色液2，混合，在室温下静置5min，避免直射阳光；加入2mL所述显色液3，小心混合，在室温下静置5min，避免直射阳光；用水定容至刻度，混匀；在15min内，用538nm波长，以不含亚硝酸钠的第一个溶液为对照测定另外八个溶液的吸光度；将测得的吸光度对亚硝酸根质量浓度作图；亚硝酸根的质量浓度可根据加入的亚硝酸钠标准溶液的量计算出；亚硝酸根的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标；亚硝酸根的质量浓度以μg100mL表示；以硝酸根计，硝酸盐含量计算公式如下：X＝1.35×[100000×c2m×V2-WNO2-]式中：X——样品中硝酸根含量，单位为mgkg；c2——根据步骤3所得洗提液的吸光度，从标准曲线上读取的亚硝酸根离子浓度，单位为微克每百毫升；m——样品的质量，单位为克；V2——所取所述洗提液的体积，单位为毫升；WNO2-——根据下式计算出的亚硝酸根含量：X＝20000×c1m×V1式中：X——样品中亚硝酸根含量，单位为毫克每千克；c1——根据步骤2所得第一处理液的吸光度，从标准曲线上读取的NO2-的浓度，单位为微克每百毫升；m——样品的质量，单位为克；V1——所取所述第一处理液的体积，单位为毫升。

全文数据：检测样品中目标物的预处理方法及检测样品中目标物的方法技术领域[0001]本发明涉及食品领域。具体地，本发明涉及检测样品中目标物的预处理方法及检测样品中目标物的方法。更具体地，本发明涉及检测样品中目标物的预处理方法、检测样品中目标物的方法以及检测奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐的方法。背景技术[0002]奶酪制品主要是指奶酪或者含有奶酪的一类乳制品。奶酪制品富含大量蛋白质、钙、磷等人体所需的营养物，营养价值较高。[0003]然而，目前对于奶酪制品的检测方法仍有待改进。发明内容[0004]本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了检测样品中目标物的预处理方法、检测样品中目标物的方法以及检测奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐的方法。由此，根据本发明实施例的检测样品中目标物的预处理方法能够有效地提高奶酪制品的水溶性，以便于后期检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。[0005]需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：[0006]对奶酪制品进行检测时，通常需要预先将奶酪制品进行溶解。但是，由于奶酪制品通常含有高脂肪高蛋白质且粘度较大，所以在水中很难完全溶解，即使是在沸水中煮沸也达不到完全溶解，为后续检测带来困难，降低了检测结果的准确性。[0007]有鉴于此，发明人经过大量实验发现，预先将奶酪制品进行冷冻处理，破坏其结构，降低粘度。经冷冻处理后的产物具有较好的水溶性，便于后续检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。[0008]在本发明的一个方面，本发明提出了一种检测样品中目标物的预处理方法。根据本发明的实施例，所述方法包括:将所述样品进行冷冻处理，以便得到冷冻产物，其中，所述样品为奶酪制品。发明人经过大量实验发现，预先将奶酪制品进行冷冻处理，破坏其结构，降低粘度。经冷冻处理后的产物具有较好的水溶性，便于后续检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。[0009]根据本发明的实施例，上述检测样品中目标物的预处理方法还可以具有下列附加技术特征：[0010]根据本发明的实施例，所述冷冻处理是将所述样品在10分钟内冷却至-150〜-200°C，并保持1〜3小时。发明人发现，冷冻处理条件会影响奶酪制品的溶解性，若冷冻处理温度过高或者时间过短，无法完全破坏其结构，使其仍具有较高的粘度，导致水溶性较差;若冷冻处理温度过低或者时间过长，样品内目标物过度升华，导致检测的回收率偏低，准确性较低，也会增加检测成本。发明人发现，冷冻处理是在-150〜-200摄氏度下冷冻1〜3小时，能够使得奶酪制品急速升华失去水分，降低粘度，从而具有较佳的水溶性，且对待测目标物影响较小。由此，根据本发明的检测样品中目标物的预处理方法能够有效地提高奶酪制品的水溶性，以便于后期检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。[0011]根据本发明的实施例，所述冷冻处理是将所述样品在1〇分钟内冷却至-180°C，并保持2小时。发明人发现，在此条件下能够使得奶酪制品急速升华失去水分，降低粘度，从而具有较佳的水溶性，且对待测目标物影响较小。由此，根据本发明的检测样品中目标物的预处理方法能够有效地提高奶酪制品的水溶性，以便于后期检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。[0012]需要说明的是，本发明对于待测目标物不做严格限定，可以根据实际需要进行选择。根据本发明的实施例，所述目标物选自硝酸盐和亚硝酸盐的至少之一。由此，根据本发明的检测样品中目标物的预处理方法能够有效地提高奶酪制品的水溶性，以便于后期检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。[0013]在本发明的另一方面，本发明提出了一种检测目标物的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括:按照前面所述检测样品中目标物的预处理方法对样品进行预处理，以便得到预处理产物；以及对所述预处理产物中所述目标物进行检测，以便确定所述目标物含量。由此，根据本发明的检测目标物的方法能够有效地提高奶酪制品的水溶性，以便于对目标物进行检测，提高检测结果的准确性，且操作简便。[0014]本领域技术人员能够理解的是，前面针对检测样品中目标物的预处理方法所描述的特征和优点，同样适用于该检测目标物的方法，在此不再赘述。[0015]在本发明的又一方面，本发明提出了一种检测奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐的方法。根据本发明的实施例，所述包括:将所述奶酪制品在10分钟内冷却至-150〜-200°c，并保持1〜3小时，以便得到预处理产物;将所述预处理产物进行除蛋白质及脂肪处理，得到第一处理液;用镀铜镉粒对所述第一处理液进行还原处理，以便得到第二处理液;将所述第二处理液与磺胺和N-I-萘基-乙二胺二盐酸盐进行混合处理，以便得到第三处理液；以及对所述第三处理液进行吸光度检测，并基于检测结果确定所述奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐含量。由此，根据本发明实施例的检测奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐的方法能够准确地测定出硝酸盐及亚硝酸盐含量，且操作简便，准确性较高。[0016]根据本发明的实施例，将所述奶酪制品在10分钟内冷却至-180°C，并保持2小时。由此，根据本发明实施例的检测奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐的方法能够准确地测定出硝酸盐及亚硝酸盐含量，且操作简便，准确性较高。[0017]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。具体实施方式[0018]下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。[0019]下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。[0020]实施例I[0021]在该实施例中，按照下列方法检测奶酪中硝酸盐含量：[0022]1准确称量IOg奶酪样品置于超低温冷冻瓶内，连接好样品口，开启超低温冷冻仪器，使冷冻瓶内奶酪在10分钟内冷却至-180°C，并保持2小时，得到冷冻产物。[0023]2用IlOml水分次将冷冻产物转移至250ml三角瓶中，混匀。[0024]3向三角瓶中按顺序加入24mL硫酸锌溶液53.5g100mL、24mL亚铁氰化钾溶液17.2g100mL和40mL缓冲溶液，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充分摇勾。静置15min〜Ih。然后用滤纸过滤，滤液用250mL锥形瓶收集。[0025]⑷移取20mL滤液于IOOmL小烧杯中，加入5mL缓冲溶液2moVL盐酸），摇匀，倒入镉柱顶部的贮液杯中，以小于6mLmin的流速过柱。洗提液过柱后的液体接入IOOmL容量瓶中。当贮液杯快要排空时，用15mL水冲洗小烧杯，再倒入贮液杯中。冲洗水流完后，再用15mL水重复一次。当第二次冲洗水快流尽时，将贮液杯装满水，以最大流速过柱。当容量瓶中的洗提液接近IOOmL时，取出容量瓶，用水定容，混匀。[0026]5分别移取20mL洗提液和20mL滤液于IOOmL容量瓶中，加水至约60mL。在每个容量瓶中先加入6mL显色液1体积比为450:550的水-盐酸溶液），边加边混;再加入5mL显色液25gL的磺胺溶液）。小心混合溶液，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。加入2mL显色液3lgL的N-I-萘基-乙二胺二盐酸盐溶液），小心混合，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。用水定容至刻度，混勾。在15min内用538nm波长，以空白试验液体为对照测定上述样品溶液的吸光度。[0027]6分别移取（或用滴定管放出）0mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL、l2mL、l6mL和2OmL亚硝酸钠标准溶液于9个IOOmL容量瓶中。在每个容量瓶中加水，使其体积约为60mL。在每个容量瓶中先加入6mL显色液1，边加边混;再加入5mL显色液2。小心混合溶液，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。加入2mL显色液3，小心混合，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。在15min内，用538nm波长，以第一个溶液不含亚硝酸钠为对照测定另外八个溶液的吸光度。将测得的吸光度对亚硝酸根质量浓度作图。亚硝酸根的质量浓度可根据加入的亚硝酸钠标准溶液的量计算出。亚硝酸根的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。亚硝酸根的质量浓度以yg100mL表示。[0028]硝酸盐（以硝酸根计含量计算公式如下：[0029]X=1.35X[100000XC2mXV2-ffNO2I][0030]式中：[0031]X一一样品中硝酸根含量mgkg;[0032]C2一一根据洗提液的吸光度，从标准曲线上读取的亚硝酸根离子浓度，单位为微克每百晕升yglOOmL;[0033]m样品的质量，单位为克g;[0034]V2一一所取洗提液的体积，单位为毫升mL;[0035]KNO2-一一根据下式计算出的亚硝酸根含量：[0036]X=20000XcimXVi[0037]式中：[0038]X一一样品中亚硝酸根含量，单位为毫克每千克mgkg;[0039]ci一一根据滤液的吸光度，从标准曲线上读取的NO2-的浓度，单位为微克每百毫升yg100mL;[0040]m--样品的质量，单位为克g;[0041]Vi一一所取滤液的体积，单位为毫升mL。[0042]实施例2测定回收率[0043]在该实施例中，按照下列方法测定回收率：[0044]1将不含硝酸盐的奶酪样品与硝酸盐标准品进行混合，得到加标样品，其中加标样品中的硝酸盐记作理论含量；[0045]2按照实施例1的方法测定加标样品中硝酸盐含量，记作实际含量；[0046]3基于下列公式计算回收率：[0047]回收率（％=实际含量-理论含量）X100%+理论含量[0048]结果如表1所示。可以看出，本发明的方法的回收率为85〜110%，符合国家标准，说明本发明的检测结果准确性较高。[0049]表1回收率[0051]对比例1[0052]在该对比例中，按照实施例2的方法测定回收率，区别在于，实施例1中，使冷冻瓶内奶酪在10分钟内冷却至-120°C，并保持2小时。[0053]结果如表2所示。可以看出，该方法的回收率偏低，检测结果准确性较低。主要原因可能是在此温度下奶酪并未完全破坏其结构，使其仍具有较高的粘度，导致水溶性较差，从而影响检测结果准确性。[0054]表2回收率[0056]对比例2[0057]在该对比例中，按照实施例2的方法测定回收率，区别在于，实施例1中，使冷冻瓶内奶酪在10分钟内冷却至-220°C，并保持2小时。[0058]结果如表3所示。可以看出，该方法的回收率偏低，检测结果准确性较低。主要原因可能是在此温度下样品内成分过度升华，导致检测的回收率偏低，准确性较低。[0059]表3回收率[0061]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。[0062]尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

权利要求：1.一种检测样品中目标物的预处理方法，其特征在于，包括：将所述样品进行冷冻处理，以便得到冷冻产物，其中，所述样品为奶酪制品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷冻处理是将所述样品在10分钟内冷却至-150〜-200°C，并保持1〜3小时。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷冻处理是将所述样品在10分钟内冷却至-180°C，并保持2小时。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标物选自硝酸盐和亚硝酸盐的至少之一。5.—种检测目标物的方法，其特征在于，包括：按照权利要求1〜4任一项所述检测样品中目标物的预处理方法对样品进行预处理，以便得到预处理产物；以及对所述预处理产物中所述目标物进行检测，以便确定所述目标物含量。6.—种检测奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐的方法，其特征在于，包括：将所述奶酪制品在10分钟内冷却至-150〜-200°C，并保持1〜3小时，以便得到预处理产物；将所述预处理产物进行除蛋白质及脂肪处理，得到第一处理液；用镀铜镉粒对所述第一处理液进行还原处理，以便得到第二处理液；将所述第二处理液与磺胺和N-I-萘基-乙二胺二盐酸盐进行混合处理，以便得到第三处理液；以及对所述第三处理液进行吸光度检测，并基于检测结果确定所述奶酪制品中硝酸盐及亚硝酸盐含量。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将所述奶酪制品在10分钟内冷却至-180°C，并保持2小时。

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