申请/专利权人：江苏大学

申请日：2018-06-25

公开（公告）日：2020-06-26

公开（公告）号：CN108680572B

主分类号：G01N21/78(20060101)

分类号：G01N21/78(20060101);G01N21/64(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.06.26#授权;2018.11.13#实质审查的生效;2018.10.19#公开

摘要：本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法及应用。本发明的检测亚硝酸盐的方法具体为：首先制备碳点‑中性红复合体系，分为合成碳点和构建碳点‑中性红复合体系两步；将普通滤纸浸泡到碳点‑中性红复合体系中，得到碳点‑中性红复合体系检测试纸；配置亚硝酸钠标准溶液；制备检测亚硝酸盐的颜色标准比色卡和荧光标准比色卡；利用软件提取每张试纸的RGB值，建立矩阵，建立多元线性回归模型；检测待测食品中亚硝酸盐的含量。本发明的碳点‑中性红复合体系对亚硝酸盐具有颜色和荧光双重响应，检测时操作步骤简单，可视化结果清晰、直观和精准，检出限更低，有望大规模用于食品中检测亚硝酸盐含量。

主权项：1.一种颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：制备碳点-中性红复合体系（1）合成碳点：将蔗糖水溶液、浓硫酸和聚乙二醇200混合搅拌后，置于微波炉中加热，得到碳点原液；将碳点原液离心、透析、调节pH值，得到碳点；（2）构建碳点-中性红复合体系：将碳点和中性红混合，振荡，得到碳点-中性红复合体系；S2：制备碳点-中性红复合体系检测试纸将普通滤纸浸泡到步骤S1的碳点-中性红复合体系中，待普通滤纸颜色均匀后取出；并将浸湿的滤纸烘干，得到碳点-中性红复合体系检测试纸；S3：配置亚硝酸钠标准溶液配置浓度梯度分别为Q1,Q2,Q3,Q4,Q5，……，Qn的0-0.5μgmL亚硝酸钠标准溶液；S4：制备检测亚硝酸盐的颜色标准比色卡和荧光标准比色卡S5：建立检测亚硝酸盐的方法利用数据处理软件依次提取颜色标准比色卡和荧光标准比色卡中每张试纸的RGB值，其中R代表图片中红色通道的数值，G代表图片中绿色通道的数值，B代表图片中蓝色通道的数值，建立矩阵；以矩阵为自变量，浓度Q＝[Q1Q2Q3Q4Q5，……Qn]’为因变量建立多元线性回归模型；S6：检测待测物质中亚硝酸盐的含量。

全文数据：一种颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法及应用技术领域[0001]本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法及应用。背景技术[0002]亚硝酸盐广泛存在于环境中，是自然界中常见的含氮化合物。食品中亚硝酸盐的来源多种多样，如通过产乳动物及用水等途径使食物被自然界存在的亚硝酸盐污染，蔬菜腌制或存放的过程中可能会自发产生亚硝酸盐，此外肉制品加工过程中会使用亚硝酸盐作为添加剂。亚硝酸盐能和人体中的仲胺、叔胺、酞胺和氨基酸反应形成致癌物质-N-亚硝胺类化合物，亚硝胺能够通过胎盘进入胎儿体内，对胎儿有致畸作用。亚硝酸盐是一种剧毒物质，成人摄入0.2-0.5g即可引起中毒，3g即可致死。鉴于亚硝酸盐的危害，对食品中的亚硝酸盐含量进行检测具有重要意义。[0003]目前，国内外报道检测亚硝酸盐的方法主要有色谱法、电化学法和光学检测技术等。色谱法和电化学法都能准确地检测出亚硝酸盐的含量，但是它们都适合在条件良好的实验室操作，不适合用于现场的快速检测和日常生活使用，不能满足日常检测的需要，如超市、生产车间或者家庭日常生活的质量安全检测。光学检测技术可分为颜色检测技术、荧光检测技术和颜色荧光双信号检测技术三大类。颜色荧光双信号检测技术是基于颜色信号和荧光信号的共同变化实现亚硝酸盐的快速、准确检测。食品是一个复杂的体系，包含的色素或者荧光物质会对检测的结果产生影响，利用荧光和颜色双信号检测亚硝酸盐，能够减少食品中其他的物质对检测结果的不良影响，提高检测的灵敏度以及降低检测限。虽然基于颜色荧光试纸的检测技术操作简便，但是仅通过目视法无法准确定量检测亚硝酸盐的含量，只能定性地判断亚硝酸盐的含量范围。因此，迫切需要建立基于颜色荧光试纸检测技术的亚硝酸盐定量检测方法，实现亚硝酸盐的自动和快速检测。发明内容[0004]为了克服现有技术中存在的缺陷，如:操作繁琐、不能满足日常检测的需要以及易受其他物质的影响等，本发明提供了一种颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法。[0005]本发明的技术方案具体介绍如下：[0006]SI:制备碳点-中性红复合体系[0007]1合成碳点：[0008]将蔗糖水溶液、浓硫酸和聚乙二醇200混合搅拌后，置于微波炉中加热，得到碳点原液；将碳点原液离心、透析、调节PH值，得到碳点；[0009]⑵构建碳点-中性红复合体系：[0010]将碳点和中性红混合，振荡15分钟，得到碳点-中性红复合体系。[0011]步骤SI的⑴中，蔗糖水溶液、浓硫酸与聚乙二醇200的体积用量比为1:0.2:6,混合搅拌的时间为IOmin;微波炉加热功率为900W，加热时间为15s;将碳点原液的pH值调至7.0；[0012]步骤Sl的⑵中，碳点与中性红的用量体积比为10:1;[0013]S2:制备碳点-中性红复合体系检测试纸[0014]将普通滤纸浸泡到步骤1的碳点-中性红复合体系中，待普通滤纸颜色均匀后取出；并将浸湿的滤纸烘干，得到碳点-中性红复合体系检测试纸；[0015]步骤S2中，浸泡的时间为5min;烘干温度不大于50°C，烘干时间为lh;[0016]S3:配置亚硝酸钠标准溶液[0017]配置浓度梯度分别为Q1，Q2，Q3，Q4，Q5，……，Qn的0-0.5ygmL亚硝酸钠标准溶液；[0018]S4:制备检测亚硝酸盐的颜色标准比色卡和荧光标准比色卡[0019]1将步骤S2中制备的检测试纸分别浸泡在步骤S3中得到的η个梯度的亚硝酸钠标准溶液中；待显色稳定后，得到η张亚硝酸盐检测试纸；[0020]2将η张亚硝酸盐检测试纸置于荧光成像分析仪的检测试纸放置处，获取亚硝酸盐检测试纸的日光光学照片和荧光光学照片，记为颜色试纸和荧光试纸，将颜色试纸按照亚硝酸盐浓度由低到高排列，最终得到颜色标准比色卡，分别包含了Km，ΚΑ2，ΚΑ3，……，ΚΑη，共η张颜色试纸；同理，将荧光试纸按照亚硝酸盐浓度由低到高排列，最终得到荧光标准比色卡，包含了Kn，Kl2，Kl3，......，Kin，共η张焚光试纸。[0021]S5:建立检测亚硝酸盐的方法[0022]1利用软件MATLAB2010依次提取颜色标准比色卡中每张试纸的RGB值，其中R代表图片中红色通道的数值，G代表图片中绿色通道的数值，B代表图片中蓝色通道的数值，建立矩阵A，矩阵A中第一行分别对应的是颜色试纸1^的1?值、G值和B值，矩阵A中第二行对应的是试纸Ka2的RGB值，矩阵A中第三行对应的是试纸Ka3的RGB值，……，由此类推，得到矩阵A，矩阵A大小为nX3;同理，依次提取荧光标准比色卡中的每张试纸的RGB值，得到了荧光比色卡中每张试纸的RGB信息，建立矩阵I，矩阵I大小为nX3。将矩阵A和矩阵I的合并矩阵成D，矩阵D大小为ηX6，矩阵D中第一行分别对应的是Rai、Gai，Bai，Iai、Iai和Iai，即试纸Kai和试纸Iai的RGB值，同理，矩阵A中第二行对应的是试纸Ka2和Ia2的RGB值，……，由此类推组成矩阵D。[[0026]2以矩阵A为自变量，浓度Q=[Q1Q2Q3Q4Q5，……Qn]’为因变量建立多元线性回归模型Ma;以矩阵I为自变量，浓度Q=[Q1Q2Q3Q4Q5，……Qn]’为因变量建立多元线性回归模型M1;以矩阵D为自变量，浓度Q=[Q1Q2Q3Q4Q5，……Qn]’为因变量建立多元线性回归模型Md;3种模型的回归方程如下：[0027]模型Ma的回归方程为Yi=a+bXRa+cXGa+c!XBa[0028]模型Mi的回归方程为Y2=h+iXRi+jXGi+kXBi[0029]模型Md的回归方程为Y3=p+qXRa+γXGa+sXBA+tXRi+uXΒι+νXGi[0030]其中，式中Yi、Y2、Y3代表亚硝酸钠的浓度，Ra、Ri分别为颜色试纸与荧光试纸中提取的红色通道的数值，GaXi分别为颜色试纸与荧光试纸中提取的绿色通道的数值，BhB1*别为颜色试纸与荧光试纸中提取的蓝色通道的数值，b、c、d值分别颜色试纸变量Ra、Ga和Ba的回归系数，i、j、k分别为颜色试纸变量R1、GdPB1的回归系数，q、r、s、t、u、V分别为模型Md中变量1^^、办、61和81的回归系数，、11和?分别是模型111和_回归方程的校正系数；[0031]S6:检测待测物质中亚硝酸盐的含量[0032]1将步骤S2中制备的碳点-中性红复合体系检测试纸浸泡在待测物质样品水溶液中，静置至显色稳定，通过荧光成像分析仪分别获取待测物质的日光光学照片和荧光光学照片，记为颜色试纸和荧光试纸；[0033]2目视法将待测物质样品的颜色试纸与颜色标准比色卡进行对比，确定待测物质中亚硝酸盐的含量是在Q1-Qw之间；将待测物质样品的荧光试纸与荧光标准比色卡进行对比，确定待测物质中亚硝酸盐的含量是在Qj-Qj+i之间；从而实现了待测物质中亚硝酸盐半定量分析；[0034]3提取每种待测物质样品颜色试纸和荧光试纸的RGB值，构成了矩阵S，矩阵S大小为3X6。矩阵S的第一行是待测物质样品颜色试纸的RGB值，第二行是待测物质样品荧光试纸的RGB值，矩阵S的第三行是待测物质样品颜色试纸和荧光试纸的RGB值合并而成；[0036]4将矩阵S的第一、二和三行分别代入模型-、11和_，得到含量矩阵1?;矩阵如勺第一行Qa代表的是根据颜色试纸的RGB颜色检测出的亚硝酸盐含量；同理第二行如和第三行Qd分别代表的是根据荧光试纸和复合信息得到的亚硝酸盐含量。[0038]本发明还提供了一种颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法的应用，所述方法用于检测食品中的亚硝酸盐的含量。[0039]与现有的检测技术相比，本发明的有益效果在于：[0040]1与现有的荧光材料相比，本发明通过微波合成法制备了荧光发射峰在517nm的碳点，该荧光材料制备简单，荧光性能好、生物相容性好，水溶性好，且碳点的光谱曲线与中性红的吸收光谱曲线有较大的重叠，使中性红能够有效地猝灭碳点的荧光，得到了荧光猝灭型的复合体系。[0041]2与现有的比色技术或者荧光技术检测亚硝酸盐相比，本发明的碳点-中性红复合体系对亚硝酸盐具有颜色和荧光双重响应，能同时实现比色和荧光检测亚硝酸盐。既能减小色素对检测结果的影响，又能降低荧光物质对检测的影响，使检测的结果准确，检出限更低。[0042]3与现有技术色谱法、拉曼光谱法、电化学法相比，本发明制备的亚硝酸盐颜色荧光标准比色卡，检测时操作步骤简单，可视化结果清晰、直观和精准。利用便携式成像设备可实现图像获取、RGB信息提取以及数据处理为一体可视化、自动、快速检测亚硝酸盐的含量。[0043]4本发明制备的碳点-中性红复合体系检测试纸具有制备简单、灵敏度高、抗干扰能力强和应用范围广等特点，建立的颜色荧光双信号检测法能够为现场、快速、高选择性和高灵敏度分析检测亚硝酸盐提供参考依据。附图说明[0044]图1是本发明实例中制备的碳点和碳点-中性红复合体系荧光光谱图（插图是两种材料在紫外灯照射下的荧光图片）；[0045]图2是本发明制作的颜色标准比色卡和荧光标准比色卡；[0046]图3是本发明得到的3种食品（自然水、火腿肠和腌菜）的颜色荧光试纸图片以及3种食品的亚硝酸盐含量检测结果。具体实施方式[0047]下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不限于此。[0048]为了弥补现有技术检测亚硝酸盐的不足，本发明拟用碳点-中性红复合体系结合便携式成像设备实现颜色荧光可视化定量检测食品中的亚硝酸盐含量。采用的荧光材料是毒性较低无机纳米荧光材料-碳点，其易溶于水、生态环境友好以及荧光特性好。碳点_中性红复合体系能对亚硝酸盐产生特异性响应，导致体系的颜色和荧光特性发生变化，能够实现颜色荧光双信号检测亚硝酸盐。因此，本发明首先利用碳点和中性红构建复合体系并制备检测亚硝酸盐的试纸;利用制备的试纸和便携式成像设备构建检测亚硝酸盐的颜色和荧光标准比色卡，并建立亚硝酸盐的颜色荧光融合定量检测方法;最后利用便携式成像设备获取食品的颜色和荧光试纸，利用建立的定量检测方法实现食品中亚硝酸盐的可视化、快速、定量检测。[0049]本发明以检测自然水、火腿肠和腌菜三种食品中亚硝酸盐含量为例，详细地介绍了如何实现颜色荧光双信号检测食品中亚硝酸盐的方法，包括以下步骤：[0050]SI:建立碳点-中性红复合体系[0051]1合成碳点：[0052]取ImL蔗糖水溶液（30%，wv和200yL浓硫酸置于坩埚中，并加入6mL聚乙二醇200,混合搅拌lOmin，微波炉加热功率为900W，微波加热15s，溶液由无色变为金黄色，即表示碳点制备成功；[0053]将所得到的碳点溶液离心15min以去除不溶物，并在透析袋截留分子量1000中透析24h;透析结束后，用适量NaOH溶液调整碳点溶液pH至7.0，并将所制备的碳点按1:9用水稀释，置于4°C下保存备用;所制备的碳点发绿色的荧光，发射峰为517nm。[0054]2构建碳点-中性红复合体系：[0055]将IOmL碳点和ImL中性红混合，振荡15分钟，获得了碳点-中性红复合体系。该复合体系中碳点的荧光被中性红猝灭，荧光强度减弱，因此该体系为猝灭性荧光体系。[0056]由图1可以看出碳点发出的荧光亮度高，其相对荧光强度达到2638,而构建的碳点-中性红复合体系荧光微弱，相对荧光强度为276,荧光猝灭程度高达90%，说明中性红能有效的猝灭碳点的荧光，这主要是因为两者产生了荧光共振能量转移现象。由此，本发明成功地构建了猝灭性荧光体系，即碳点-中性红复合体系。[0057]S2:制备碳点-中性红复合体系检测试纸[0058]1将普通滤纸切成IcmX2.5cm的小纸条，置于步骤（1的碳点-中性红复合体系中15s后，待普通滤纸颜色均匀后取出，得到浸湿的试纸；[0059]2将浸湿的试纸于50°C温度下烘干，烘干时间为lh，由此得到碳点-中性红复合体系检测试纸。[0060]S3:配置亚硝酸钠标准溶液[0061]配置浓度梯度分别为0,0.04,0.08,0.10,0.15,0.20,0.25,0.3,0.35,0.4和O·5μgmL的亚硝酸钠标准溶液，共11种浓度梯度的标准溶液。[0062]S4:制备检测亚硝酸盐的颜色比色卡和荧光比色卡[0063]1将步骤S2中制备的检测试纸分别浸泡在步骤S3中得到的11个梯度的亚硝酸钠标准溶液中；20min后，检测试纸显色稳定，得到11张亚硝酸盐检测试纸；[0064]2将11张亚硝酸盐检测试纸分别置于荧光成像分析仪上海安亭科学仪器厂）中，分别单独打开日光灯和紫外灯，取亚硝酸盐试纸的日光光学照片和荧光光学照片，记为颜色试纸和荧光试纸，分别为11张；[0065]3将颜色试纸按照亚硝酸盐浓度由低到高排列，最终得到颜色比色卡，包括Km，Ka2，Ka3，Ka4，Ka5，Ka6，Ka7，Ka8，Ka9，Kaiq，Kaii，共11张颜色试纸。同理，将焚光试纸按照亚硝酸盐浓度由低到高排列，最终得到焚光比色卡，包括Kll，Kl2，Kl3，Kl4，Kl5，Kl6，Kl7，Kl8，Kl9，KllO，Km，共11张荧光试纸。上述11张颜色试纸和荧光试纸对应的亚硝酸盐浓度分别是O，0.04，0.08,0.10,0.15,0.20,0.25,0.3,0.35,0.4^P0.5ygmL〇[0066]S5:建立检测亚硝酸盐的方法[0067]1利用软件MATLAB2010依次提取颜色比色卡中每张试纸的RGB值，建立矩阵A矩阵大小为11X3，矩阵A中第一行对应的是Km的RGB值，矩阵A中第二行对应的是Ka2的RGB值，矩阵A中第三行对应的是Ka3的RGB值，……，由此类推，得到矩阵A;同理，依次提取荧光比色卡中每张试纸的RGB值，得到了荧光比色卡中每张试纸的RGB信息，建立矩阵I，矩阵大小为11X3;将矩阵A和I进行列并列得到矩阵D，矩阵D的第一行对应的是Km的RGB值和K11的RGB值，矩阵D的第二行对应的是Ka2的RGB值和K12的RGB值，……，由此类推，得到矩阵D，矩阵大小为11X6;[0071]2以矩阵A为自变量，浓度Q=[00.040.080.100.150.200.250.30.35，0.40.5]’为因变量建立多元线性回归模型Μα;以矩阵I为自变量，浓度Q为因变量建立多元线性回归模型M1;以矩阵D为自变量，浓度Q为因变量建立多元线性回归模型Md;3个定量预测模型如下：[0072]模型Ma的回归方程为Yi=-0·0006*R+0·0029*G+0·0019*B[0073]模型Mi的回归方程为Y2=-0·0203*R+0·002*G+0·0387*B[0074]模型Md的回归方程为Y3=-O·171*Ra+_0·015*Ga+0·422*Ba_1·184*Ri+0·029*Βι-0.785*Gi[0075]S6:检测食品中亚硝酸盐的含量[0076]1对自然水、火腿肠和腌菜进行预处理，获取自然水、火腿肠和腌菜的亚硝酸盐提取液，并将3种提取液分别与碳点-中性红复合体系检测试纸试纸接触，得到3种食品的检测试纸。[0077]2利用荧光成像分析仪获取3种食品的日光光学照片和荧光光学照片，记为颜色试纸和荧光试纸（如图3所示）；将3种食品的颜色试纸和荧光试纸分别与颜色比色卡和荧光比色卡对比确定:水中亚硝酸盐含量为0.04-0.08ygmL;火腿肠中亚硝酸盐含量为0.1-ο.ΙδygmL;腌菜中亚硝酸盐含量为0.2-0.25ygmL;实现了食品中亚硝酸盐定性和半定量分析。[0078]3利用软件MATLAB2010提取3种食品颜色和荧光检测试纸的RGB值，得到3种食品的RGB信息，分别组成了矩阵S7j〇，S火腿肠和S腌菜）（如下所示）。每种食品的矩阵S的第一行为颜色检测试纸的RGB值，第二行为荧光检测试纸的RGB值，第三行为颜色检测试纸和荧光检测试纸RGB值的合并，矩阵S大小为3X6。[0082]⑷将每种食品的颜色试纸的RGB值矩阵S第1行）、荧光试纸的RGB值矩阵S第2行和两者的融合信息矩阵S第3行分别代入模型MA，M#PMd中，得到矩阵R水），R火腿肠和R腌菜）。由矩阵R水可知，根据颜色RGB值、荧光RGB值、融合信息检测水中亚硝酸盐，其检测结果分别为0.06、0.06和0.06ygmL。同理，火腿肠中亚硝酸盐含量检测结果为0.19、0.15和0.14ygmL，腌菜中亚硝酸盐含量检测结果为0.23、0.28和0.24ygmL;由此本发明实现了颜色、荧光以及双信号定量检测食品中亚硝酸盐含量。[0086]通过与国标的紫外分光光度法GB5009.33-2016对比，本发明的检测结果和标准方法的检测结果很相近如表1所示）。对于水的检测，本发明中的颜色、荧光和融合信息检测法精度一致，建立的3种方法都可以用于水中亚硝酸盐的检测。对于火腿肠的检测，荧光检测法和融合信息检测法的精度一致，且都高于颜色检测法，这可能是由于火腿肠中色素影响了颜色检测法的结果，使检测结果偏低，因此建立的荧光和信息融合检测方法适合于火腿肠中亚硝酸盐的检测。而比较腌菜的检测结果发现，颜色检测法和融合信息检测法的精度一致，两者的检测结果都比荧光检测法的精度高，可能是因为蔬菜中含有荧光物质使荧光结果偏低，因此建立的颜色和信息融合检测方法适合于蔬菜中亚硝酸盐的检测。通过分析食品的特性，可以选择本发明中颜色检测、荧光检测法或信息融合检测法得到的结果作为最终的检测结果。总之，本发明的建立的方法准确度高，通过肉眼以及建立的模型即可实现各种食品中的亚硝酸盐检测。[0087]表1本发明检测结果与国标法检测结果的对比[0089]另外，国标中紫外分光光度法的检测限为1.2mgkg，色谱法的检测线为lmgkg。而本发明中基于颜色信号的比色检测技术和基于荧光信号的荧光检测技术检测限分别为0.9mgkg及0.7mgkg，两者的检测限都低于国标法中的紫外分光光度法检测限。[0090]本发明灵敏度高且检测限低主要有以下几个原因：（1碳点荧光特性优良、水溶性好且化学性质稳定；（2制备的碳点-中性红复合体系能特性地与亚硝酸盐结合，实现亚硝盐的高灵敏度检测，不受食品中其他物质的影响；（3将荧光和颜色双信号用于亚硝酸盐检测，既能减小食品中色素对检测结果的影响，又能降低食品中荧光物质对检测的影响。因此，本发明建立的颜色荧光双信号检测法能够实现亚硝酸盐的快速、准确且可视化检测。

权利要求：1.一种颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：Si:制备碳点-中性红复合体系⑴合成碳点：将蔗糖水溶液、浓硫酸和聚乙二醇200混合搅拌后，置于微波炉中加热，得到碳点原液；将碳点原液离心、透析、调节pH值，得到碳点；⑵构建碳点-中性红复合体系：将碳点和中性红混合，振荡，得到碳点-中性红复合体系；S2:制备碳点-中性红复合体系检测试纸将普通滤纸浸泡到步骤（1的碳点-中性红复合体系中，待普通滤纸颜色均匀后取出；并将浸湿的滤纸烘干，得到碳点-中性红复合体系检测试纸；S3:配置亚硝酸钠标准溶液配置浓度梯度分别为Qi，Q2，Qs，Q4，Qs，......，Qn的0-0.5ygmL亚硝酸钠标准溶液；S4:制备检测亚硝酸盐的颜色标准比色卡和荧光标准比色卡S5:建立检测亚硝酸盐的方法利用数据处理软件依次提取颜色标准比色卡中每张试纸的RGB值，其中R代表图片中红色通道的数值，G代表图片中绿色通道的数值，B代表图片中蓝色通道的数值，建立矩阵；以矩阵为自变量，浓度Q=[QiQ^3Q4Q5，……QJ’为因变量建立多元线性回归模型；S6:检测待测物质中亚硝酸盐的含量。2.根据权利要求1所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，步骤Sl的⑴中，蔗糖水溶液、浓硫酸与聚乙二醇200的体积用量比为1:0.2:6。3.根据权利要求1所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，步骤Sl的（1中，混合搅拌的时间为IOmin;微波炉加热功率为900W，加热时间为15s;将碳点原液的pH值调至7.0。4.根据权利要求1所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，步骤Sl的⑵中，碳点与中性红的用量体积比为10:1;振荡时间为15分钟。5.根据权利要求1所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，步骤S2中，浸泡的时间为5min;烘干温度不大于50°C，烘干时间为Ih。6.根据权利要求1所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，步骤S4的具体方法为：1将步骤S2中制备的检测试纸分别浸泡在步骤S3中得到的η个梯度的亚硝酸钠标准溶液中；待显色稳定后，得到η张亚硝酸盐检测试纸；2将η张亚硝酸盐检测试纸置于荧光成像分析仪的检测试纸放置处，获取亚硝酸盐检测试纸的日光光学照片和荧光光学照片，记为颜色试纸和荧光试纸，将颜色试纸按照亚硝酸盐浓度由低到高排列，最终得到颜色标准比色卡，分别包含了ΚΑ1，ΚΑ2，ΚΑ3,……，ΚΑη，共η张颜色试纸；同理，将荧光试纸按照亚硝酸盐浓度由低到高排列，最终得到荧光标准比色卡，包含了Kn，Kl2，Kl3，......，Kin，共η张焚光试纸。7.根据权利要求1所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，步骤S5中，建立检测亚硝酸盐的方法具体为：⑴利用软件MATLAB2010依次提取颜色标准比色卡中每张试纸的RGB值，其中R代表图片中红色通道的数值，G代表图片中绿色通道的数值，B代表图片中蓝色通道的数值，建立矩阵A，矩阵A中第一行分别对应的是颜色试纸1^的1?值、G值和B值，矩阵A中第二行对应的是试纸Ka2的RGB值，矩阵A中第三行对应的是试纸Ka3的RGB值，……，由此类推，得到矩阵A，矩阵A大小为nX3;同理，依次提取荧光标准比色卡中的每张试纸的RGB值，得到了荧光比色卡中每张试纸的RGB信息，建立矩阵I，矩阵I大小为nX3;将矩阵A和矩阵I的合并矩阵成D，矩阵D大小为ηX6，矩阵D中第一行分别对应的是Rai、Gai，Bai，Iai、Iai和Iai，即试纸Kai和试纸Iai的RGB值，同理，矩阵A中第二行对应的是试纸Ka2和Ia2的RGB值，……，由此类推组成矩阵D;矩阵A、I、D分别为：2以矩阵A为自变量，浓度Q=[Q1Q2Q3Q4Q5,……Qn]’为因变量建立多元线性回归模型Ma;以矩阵I为自变量，浓度Q=[Q1Q2Q3Q4Q5，……Qn]’为因变量建立多元线性回归模型M1;以矩阵D为自变量，浓度Q=[Q1Q2Q3Q4Q5,……Qn]’为因变量建立多元线性回归模型Md;3种模型的回归方程如下：模型Ma的回归方程为Yi=a+bXRa+cXGa+cIXBa模型Mi的回归方程为Y2=h+iXRi+jXGi+kXBi模型Md的回归方程为Y3=p+qXRa+γXGa+sXΒα+ϊXRi+uXBi+vXGi其中，式中Y1、Y2、Y3代表亚硝酸钠的浓度，Ra、Ri分别为颜色试纸与荧光试纸中提取的红色通道的数值，GzuG1分别为颜色试纸与荧光试纸中提取的绿色通道的数值，B^B1*别为颜色试纸与荧光试纸中提取的蓝色通道的数值，b、c、d值分别颜色试纸变量Ra、Ga和Ba的回归系数，i、j、k分别为颜色试纸变量R1、GdPB1的回归系数，q、r、s、t、u、为模型Md中变量11\^、1?1、61和81的回归系数，、11和?分别是模型11^1和_回归方程的校正系数。8.根据权利要求1所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，步骤S6中，检测待测物质中亚硝酸盐的含量的具体方法为：1将步骤S2中制备的碳点-中性红复合体系检测试纸浸泡在待测物质样品水溶液中，静置至显色稳定，通过荧光成像分析仪分别获取待测物质的日光光学照片和荧光光学照片，记为颜色试纸和荧光试纸；2目视法将待测物质样品的颜色试纸与颜色标准比色卡进行对比，确定待测物质中亚硝酸盐的含量是在Q1-Qw之间；将待测物质样品的荧光试纸与荧光标准比色卡进行对比，确定待测物质中亚硝酸盐的含量是在Qj-Qj+i之间；从而实现了待测物质中亚硝酸盐半定量分析；3提取每种待测物质样品颜色试纸和荧光试纸的RGB值，构成了矩阵S，矩阵S大小为3X6;矩阵S的第一行是待测物质样品颜色试纸的RGB值，第二行是待测物质样品荧光试纸的RGB值，矩阵S的第三行是待测物质样品颜色试纸和荧光试纸的RGB值合并而成;矩阵S具体为：⑷将矩阵S的第一、二和三行分别代入模型Ma、Mi和Md，得到含量矩阵R;矩阵R的第一行Qa代表的是根据颜色试纸的RGB颜色检测出的亚硝酸盐含量；同理第二行如和第三行Qd分别代表的是根据荧光试纸和复合信息得到的亚硝酸盐含量;矩阵R具体为：9.如权利要求1-8任意一项所述的颜色荧光双信号可视化快速检测亚硝酸盐的方法用于检测食品中的亚硝酸盐的含量。

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