申请/专利权人：浙江工业大学

申请日：2020-02-28

公开（公告）日：2020-06-30

公开（公告）号：CN111349648A

主分类号：C12N15/80(20060101)

分类号：C12N15/80(20060101);C12N15/65(20060101);C12N3/00(20060101);C12R1/645(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.04.25#发明专利申请公布后的驳回;2020.07.24#实质审查的生效;2020.06.30#公开

摘要：本发明公开了一种农杆菌介导外源基因导入蛹虫草细胞的方法，所述方法至少包括以下步骤：将无菌纤维素薄膜贴合在共培养固体培养基表面，然后将蛹虫草孢子悬液与含外源基因的农杆菌菌液等体积混合，涂布于无菌纤维素薄膜上，24℃恒温避光共培养48h后，将混合菌液连同纤维素薄膜转移至选择培养基，在贴合紧密的纤维素薄膜表面倒上一层选择培养基，22～25℃恒温避光培养；取穿透上层选择培养基的菌丝转接至传代培养基中，22～25℃恒温避光培养3～4d，筛选获得含外源基因的蛹虫草；本发明采蛹虫草外源基因遗传转化效率高达100％，成本低，操作简易。

主权项：1.一种农杆菌介导外源基因导入蛹虫草细胞的方法，其特征在于所述方法至少包括以下步骤：将无菌纤维素薄膜贴合在共培养固体培养基表面，然后将蛹虫草孢子悬液与含外源基因的农杆菌菌液等体积混合，涂布于无菌纤维素薄膜上，24℃恒温避光共培养48h后，将混合菌液连同纤维素薄膜转移至选择培养基，在贴合紧密的纤维素薄膜表面倒上一层选择培养基，22～25℃恒温避光培养；取穿透上层选择培养基的菌丝转接至传代培养基中，22～25℃恒温避光培养3～4d，筛选获得含外源基因的蛹虫草；所述共培养固体培养基为IM+200mmol·L-1乙酰丁香酮；所述选择培养基是IM+200mg·L-1潮霉素B+200mg·L-1头孢菌素+100mg·L-1卡那霉素；所述传代培养基是沙氏培养基+200mg·L-1潮霉素B。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江工业大学 一种农杆菌介导外源基因导入蛹虫草细胞的方法

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