申请/专利权人：广东海洋大学

申请日：2016-11-08

公开（公告）日：2020-07-03

公开（公告）号：CN106350560B

主分类号：C12P21/06(20060101)

分类号：C12P21/06(20060101);A61K38/01(20060101);A61P17/02(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.07.03#授权;2017.03.01#实质审查的生效;2017.01.25#公开

摘要：本发明提供了一种鱼蛋白肽粉的制备方法，将鱼肉糜浆加入蛋白酶进行酶解，酶解后灭酶活，再经离心、陶瓷膜微滤即得鱼蛋白肽液，干燥后即得鱼蛋白肽粉；所述蛋白酶选自中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶中的一种或多种；所述蛋白酶的加入量为400IUg～1500IUg，该方法过程简单，操作容易，利于实现产业化生产；生产获得的鱼蛋白肽，涂抹给药，在剂量为每个创面50～150mg时对烫伤皮肤有促进愈合的作用。

主权项：1.一种鱼蛋白肽粉在制备促进烫伤皮肤愈合药物中的应用，其特征在于，所述鱼蛋白肽粉的制备方法为：将罗非鱼鱼肉糜浆加入蛋白酶进行酶解，50℃，酶解5小时，酶解后灭酶活，再经离心、用膜孔径为200nm的陶瓷膜微滤即得鱼蛋白肽液，干燥后即得鱼蛋白肽粉；所述蛋白酶为中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，加入量为分别为500IUg和450IUg；所述应用是将鱼蛋白肽粉加水拌成糊状，涂抹于创伤皮肤表面。

全文数据：一种鱼蛋白肽的制备方法及其得到的鱼蛋白肽和应用技术领域[0001]本发明涉及生物制品制备技术领域，更具体地，涉及一种鱼蛋白肽的制备方法及其得到的鱼蛋白肽和应用。背景技术[0002]由于各种意外，烫伤常有发生，烫伤不仅造成皮肤的毁损，而且还会引起严重的全身性反应，尤其是大面积烫伤，全身反应甚为剧烈，可出现各系统器官的代谢紊乱和功能失调，带来严重甚至是巨大的伤害。烫伤治疗存在着创面疼痛、进行性坏死、易感染、瘢痕愈合等难题。治疗烧烫伤的药物亦是针对这四个问题进行研究的，有中药和西药两大类，中药对烫伤的治疗作用在于抗菌、收敛、生肌、清热、消肿和止痛等药用疗效；西药在于消炎、抗感染、生肌、促进伤口愈合和促进上皮生长等。目前较多应用抗生素类药物来预防治疗烫伤创面感染、消炎和抗菌。伤口愈合是一个复杂的动态过程，其细胞结构和受损组织的组织层被尽可能地恢复到正常状态，而伤口挛缩是愈合过程的一部分，是指成纤维细胞迀移至受伤组织，随后伤口区域收缩。对于伤口的快速愈合有必要为再生受损组织提供更好的条件，包括各种生长因子，如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血管内皮细胞生长因子等肽或蛋白类物质。促进伤口愈合是一个复杂和昂贵的过程，研究促进伤口愈合的药物是十分必要且很有意义的课题。[0003]肽的可溶性强，容易被吸收，生物效价和营养价值比游离氨基酸高，许多活性肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质与能量还具有防治疾病、调节人体生理机能的重要功能。这些功能是原料食品蛋白质或其组成氨基酸所不具备的，这也是目前活性肽引起广泛重视的重要原因之一。酶解法水解天然蛋白是目前制备肽的最广泛应用的一种方法，该法条件温和，产品安全度高。海洋与淡水水产资源已成为获取及制备活性肽的重要来源，一方面是水产蛋白肽链中普遍蕴含着功能区，即氨基酸以特定序列通过肽键连接而成的肽段，该肽段为活性肽的前体物质，经释放后可具有特殊的生物活性，另一方面是水产蛋白作为动物蛋白，氨基酸组成比例平衡，必需氨基酸含量高，蛋白质消化吸收率达85~90%。随着现代科技的发展，多肽作为治疗疾病的药物受到人们越来越多地关注，因其是最符合人体生物学调节规律的治疗手段，可以避免许多其他类型药物给人体带来的不良反应，药用多肽已引起人们的高度重视。发明内容[0004]本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种鱼蛋白肽的制备方法。[0005]本发明的第二个目的是提供上述方法获得的鱼蛋白肽。[0006]本发的第三个目的是提供上述鱼蛋白肽的应用。[0007]本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：一种鱼蛋白肽粉的制备方法，将鱼肉糜浆加入蛋白酶进行酶解，酶解后灭酶活，再经离心、陶瓷膜微滤即得鱼蛋白肽液，干燥后即得鱼蛋白肽粉;所述蛋白酶选自中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶中的一种或多种;所述蛋白酶的加入量为400IUg~1500IUg。[0008]利用酶解技术将鱼蛋白降解为分子量大小不等的多肽、低聚肽及游离氨基酸的混合液，利用离心分离除渣，经陶瓷膜微滤分离去除大分子，并能达到澄清脱色的目的，得到多肽粗蛋白含量在90.0%以上，分子量在3000道尔顿以下的占95%以上，1000道尔顿以下的占75%以上的蛋白肽产品。[0009]优选地，酶解的温度为50~55°C，酶解的时间为3~5小时。[0010]优选地，所述陶瓷膜的孔径为50nm~200nm。[0011]优选地，所述鱼肉糜浆是将去除内脏、去鳃、清洗、切块并绞碎后的鱼肉糜与水混合制得，所述鱼肉糜与水的质量比为1:1~1:2.5。[0012]优选地，所述灭酶活的操作是酶解结束后将酶解液升温至90°C~95°C，灭酶10分钟~15分钟。[0013]本发明还提供所述方法获得的鱼蛋白肽。[0014]本发明还提供所述鱼蛋白肽在促进烫伤皮肤床上愈合中的应用，具体地，是将鱼蛋白肽粉加水拌成糊状，涂抹于创伤皮肤表面。[0015]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明提供了一种鱼蛋白肽粉的制备方法，将鱼肉糜浆加入蛋白酶进行酶解，酶解后灭酶活，再经离心、陶瓷膜微滤即得鱼蛋白肽液，干燥后即得鱼蛋白肽粉;所述蛋白酶选自中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶中的一种或多种；所述蛋白酶的加入量为400IUg~1500IUg，该方法过程简单，操作容易，利于实现产业化生产;生产获得的鱼蛋白肽，涂抹给药，在剂量为每个创面50~150mg时对烫伤皮肤有促进愈合的作用。具体实施方式[0016]下面将结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤、条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若无特别说明，实施例中所用的实验方法均为本领域技术人员所熟知的常规方法和技术，试剂或材料均为通过商业途径得到。[0017]实施例1一、鱼蛋白妝的制备取4kg已处理好的罗非鱼肉糜，放入30L酶解罐中，按料液比为1:2.5重量比）的比例加入自来水，搅拌均匀，待物料水溶液温度达到50°C，同时加入中性蛋白酶500IUg和木瓜蛋白酶425IUg，酶解5小时后，升温至95°C灭酶10分钟，酶解液冷却后，采用三足式离心机离心（转速2000转分钟）去渣，采用膜孔径为200nm的无机管式陶瓷膜对离心后的酶解液进行循环式微滤，当残留液体积约为进料液的10%时，停止操作，得到透过液，透过液经真空浓缩至固形物含量20%以上，经喷雾干燥制备成干粉即为鱼蛋白肽粉。[0018]获得的蛋白肽粗蛋白含量为91.92%，灰分4.53%，脂肪0.7%;分子量在3000道尔顿以下的多肽占98.64%，1000道尔顿以下的占76.37%。[0019]二、鱼蛋白肽对新西兰兔烫伤创面愈合实验新西兰兔，体重1608~2367g，普通级，雌雄各半，共48只。新西兰兔肌注速眠新（约0.5mL只）和静注戊巴比妥钠约0.6mLkg进行联合麻醉。兔背部脱毛区皮肤以75%乙醇消毒后，使用超级控温烫伤仪在新西兰兔背部两侧各制备一个深Π度m度烫伤创面，创面面积为4cm2，设模型对照组，阳性对照组采用湿润烧伤膏，汕头市美宝制药有限公司），鱼蛋白肽组，每组16只新西兰兔；模型对照组:造模后不进行给药。[0020]阳性对照组:造模当天开始，烫伤创面以润湿烫伤膏进行涂抹治疗，每个创面涂抹软膏约1.0mL，每天涂抹一次，连续涂抹28d。[0021]鱼蛋白肽组：用适量灭菌注射用水溶解搅拌鱼蛋白肽成糊状，灌装于50mL注射器中用于皮肤给药。每个创面涂抹约150mg，每天涂抹一次，给药后以无刺激医用胶布包扎固定4h，连续涂抹28d。[0022]给药第11天，模型对照组动物烫伤创面开始缩小，创面愈合率为8.7%;阳性对照组动物烫伤创面愈合率高于模型对照组，无统计学差异P〇.05。鱼蛋白肽组动物烫伤创面可见显著缩小，创面愈合率为42.3%，显著高于模型对照组和阳性对照组，差异具有统计学意义P〈0.01。给药第18、21、25天，与模型对照组比较，阳性对照组和鱼蛋白肽组动物烫伤创面愈合均优于模型对照组，创面愈合率均显著高于模型对照组，差异具有统计学意义P〈0.01，（见表1。[0023]给药第7天，模型对照组、阳性对照组、鱼蛋白肽组创面新生表皮部分覆盖分别为2例、2例、1例，各治疗组新西兰兔烫伤部位皮肤病理损伤修复与模型对照组基本相同。（见表2〇[0024]给药第14天，模型对照组、阳性对照组、鱼蛋白肽组创面新生表皮完全覆盖分别为2例、0例、6例，提示鱼蛋白肽组新西兰兔烫伤部位皮肤病理损伤修复优于模型对照组。（见表2。[0025]给药第21天，模型对照组、阳性对照组、鱼蛋白肽组创面新生表皮完全覆盖分别为5例、6例、7例，表皮成熟度+++分别为2例、6例、7例，提示阳性对照组、鱼蛋白肽组新西兰兔烫伤部位皮肤病理损伤修复优于模型对照组。（见表3。[0026]给药第28天，模型对照组、阳性对照组、鱼蛋白肽K组、鱼蛋白肽T组、鱼蛋白肽TP组、贝蛋白肽P组创面新生表皮完全覆盖分别为6例、7例、6例，表皮成熟度+++分别为2例、6例、6例，提示阳性对照组、鱼蛋白肽组新西兰兔烫伤部位皮肤病理损伤修复优于模型对照组。（见表3。[0027]综合上述实验结果，鱼蛋白肽对兔烫伤皮肤具有促进愈合作用。藝養:白二薪藤建冤歲織伤_衡愈僉率的影_:録::謹与摸型嫌_|昧较，…：ρϋ.0ί;与阳性对照组比较，?&GS,:爾.露:。

权利要求：1.一种鱼蛋白肽粉的制备方法，其特征在于，将鱼肉糜浆加入蛋白酶进行酶解，酶解后灭酶活，再经离心、陶瓷膜微滤即得鱼蛋白肽液，干燥后即得鱼蛋白肽粉;所述蛋白酶选自中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶中的一种或多种；所述蛋白酶的加入量为400IUg~1500iugo2.根据权利要求1所述的鱼蛋白肽粉的制备方法，其特征在于，酶解的温度为50~55°C，酶解的时间为3~5小时。3.根据权利要求1所述的鱼蛋白肽粉的制备方法，其特征在于，所述陶瓷膜的孔径为50nm~200nm〇4.权利要求1至3任一项所述方法获得的鱼蛋白肽。5.权利要求4所述鱼蛋白肽在促进烫伤皮肤床上愈合中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，是将鱼蛋白肽粉加水拌成糊状，涂抹于创伤皮肤表面。

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