申请/专利权人：鲁南制药集团股份有限公司

申请日：2016-12-21

公开（公告）日：2020-07-03

公开（公告）号：CN108219031B

主分类号：C08B37/10(20060101)

分类号：C08B37/10(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.07.03#授权;2019.11.05#实质审查的生效;2018.06.29#公开

摘要：本发明提供新的响应面法辅助设计优化的依诺肝素钠精制方法，具体涉两次双氧水氧化脱色、甲醇分级醇沉、响应面法辅助设计获得实验方案、多批次实验获得最优条件，并最终在此基础上制备得各项指标符合要求的依诺肝素钠精制品。该生产工艺简单、易于进行产品收集、效率高，同时所得产品合格率稳定可靠，可直接应用于工业化大生产。

主权项：1.一种依诺肝素钠的精制方法，其特征在于，步骤1是将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25～35％浓度质量百分数的药液，用1molL的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5～10.5后，加入1.0～2.0％药液体积的浓度为30％的过氧化氢，搅拌20小时后，用1molL的盐酸水溶液调节pH至7.0～7.5，之后向药液中逐步加入3～5倍量质量比的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20～60倍量的甲醇质量体积比，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品；步骤2喷雾干燥条件为：配制依诺肝素钠水溶液浓度为45％质量百分数；经0.1μm滤膜过滤后喷雾干燥，喷雾干燥入口温度170℃；喷雾干燥出口温度80℃；喷雾速率600mlh。

全文数据：一种依诺肝素钠的精制方法技术领域[0001]本发明属于医药技术领域，具体涉及一种依诺肝素钠的精制方法。背景技术[0002]依诺肝素钠BnoxaparinSodium是一种低分子肝素钠盐，主要用于预防静脉血栓栓塞性疾病，特别是预防与骨科或普外手术有关的血栓形成;治疗已形成的深静脉栓塞，伴或不伴有肺栓塞；与阿司匹林同用，治疗不稳定性心绞痛及非Q波心梗；用于血液透析体外循环中，防止血栓形成等；是目前抗凝血、抗血栓形成的主要治疗药物之一。其结构如下所示：[0005]可见其结构中有一个4-烯吡喃糖醛酸结构。依诺肝素钠通过对猪肠黏膜肝素的苄基酯衍生物进行碱解聚而获得，其基本步骤为：以猪黏膜肝素为起始原料，经肝素季铵盐制备、肝素苄酯制备、对肝素苄酯进行碱解聚，以酸中和、醇沉淀，精制、脱色、干燥得到依诺肝素钠成品。其中，在酸中和、醇沉淀后得到的依诺肝素钠中间体，其澄清度往往很差，如果不加以精致纯化，就无法达到2015版《中国药典》的要求，由于依诺肝素钠属于注射剂用原料药，其水溶液澄清度必须小于0.5号浊度标准液，中国药典对此的标准比欧洲药典要严格许多。但经过上述制备步骤，会引入很多对澄清度造成影响的杂质，所以提供一种能够提高澄清度，进而提高依诺肝素钠质量的制备纯化方法尤为重要。[0006]目前依诺肝素钠的精制方法几近成熟，但最终产品的干燥环节成为制约依诺肝素钠澄清度的关键因素，目前主流工业生产采用的是冷冻干燥的方法，但该方法受样品分子量分布、冷冻样品浓度、冷冻干燥机内空气对流情况、承载物料托盘材质等诸多难以控制的因素影响，产品质量难以稳定保证，澄清度往往不合格，极大地制约了其在工业化生产中的效率，因此，喷雾干燥法因其效率高、受影响因素少的特点成为冷冻干燥法的完美替代，目前也有一些喷雾干燥法应用于依诺肝素钠制备的专利报道，如CN104592421A等，但均未对喷雾干燥方法进行系统优化，所得产品质量及其它各项指标也均存在不同程度的问题。[0007]专利CN104592421A提供了一种依诺肝素钠喷雾干燥路线:将依诺肝素钠粗品加入纯化水中，10〜30°C下，搅拌溶解形成20%〜40%浓度的药液，药液经0.Ιμπι滤膜过滤，喷雾干燥，其中喷雾干燥药液入口温度为140〜180°C，出口温度为70〜90°C，药液喷雾速率为500〜1000mLh。在该专利中有两组实施例样品最终符合药典中澄明度项下规定。但该方法未进行更多批次验证优化，所得样品的抗Xa及抗IIa因子效价（IUmg未经检测，产品质量并不能严格保证，在实际应用中产品质量合格率不足40%，且所得样品性状不一致，偶尔存在广品粘度过大，难以收集等问题。[0008]因此，上述依诺肝素钠干燥方法存在产品质量不稳定、澄清度差、指标参数不合格、技术耐用性差等问题，不利于进行工业化大生产。发明内容[0009]鉴于现有技术的不足，本发明提供一种依诺肝素钠的精制方法，即利用响应面法辅助优化的依诺肝素钠喷雾干燥条件，该方法对影响依诺肝素钠喷雾干燥产品质量的四个主要因素:喷雾干燥样品浓度、喷雾干燥入口温度、喷雾干燥出口温度及喷雾速率进行统计学分析优化，获得了一条合理的喷雾干燥条件。[0010]本发明以依诺肝素钠粗品为原料，具体通过如下技术方案实现：[0011]—种依诺肝素钠的喷雾干燥方法，包括如下步骤：（1将依诺肝素钠粗品溶于水后，经双氧水氧化脱色、甲醇分级醇沉，制备依诺肝素钠成品；⑵喷雾干燥获得依诺肝素钠精制品。[0012]所述制备方法具体包括如下步骤：[0013]步骤1:依诺肝素钠成品的制备[00M]将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25〜35%浓度质量百分数的药液，用lmolL的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5〜10.5后，加入1.0〜2.0%药液体积的浓度为30%的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用lmolL的盐酸水溶液调节pH至7.0〜7.5，之后向药液中逐步加入3.0〜5.0倍量质量比）的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20〜60倍量的甲醇质量体积比），沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品。[0015]步骤2:依诺肝素钠成品的干燥条件[0016]将依诺肝素钠成品加入到纯化水中，搅拌溶解形成45%〜60%浓度质量百分数）的药液，药液经0.Iym滤膜过滤，喷雾干燥，喷雾干燥条件按照响应面法优化所得方案进行，控制喷雾干燥药液入口温度150〜170°C，出口温度75〜85°C，药液喷雾速率为600〜900mLh，喷雾干燥后得到依诺肝素钠精制品，并对样品的全部指标进行检测分析，优选最佳条件。[0017]进一步地，我们优选步骤⑴中所述用氢氧化钠水溶液调节药液的pH值为10.0〜10.2〇[0018]进一步地，我们优选步骤⑴中所述盐酸水溶液调节药液的pH值为7.0〜7.2。[0019]进一步地，我们优选步骤⑴中所述氯化钠的用量为4倍。[0020]进一步地，我们优选步骤⑴中所述醇沉所用甲醇量为35倍。[0021]进一步地，我们优选步骤（2中喷雾干燥条件为：依诺肝素钠水溶液浓度为45%质量百分数），喷雾干燥入口温度170°C，出口温度80°C，喷雾干燥速率为600mlh。[0022]与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：[0023]通过脱色、分级醇沉及响应面法辅助优化的喷雾干燥等技术的整体配合，得到的产品重均分子量为3800〜5000Da;低于2000Da的百分比为12.0〜20.0%;2000〜80000的百分比为68.0〜82.0%，大于8000Da的百分比应不高于18.0%。澄明度不深于0.5号比浊液;抗Xa因子效价为90IUmg〜125IUmg;抗IIa因子效价为20.OlUmg〜35.OlUmg;抗Xa因子效价与抗IIa因子效价的比值为3.3〜5.3;干燥失重不大于5.0%;其他项下如溶剂残留、重金属含量等均符合中国药典项下要求，且产品合格率达90%以上，较现有喷雾干燥工艺40%左右的广品合格率有$父大提尚。该生广工艺简单、易于进彳丁广品收集、效率尚，同时所得产品合格率稳定可靠，可直接应用于工业化大生产。附图说明[0024]图1实施例四中澄清度与样品的浓度、入口温度及出口温度关系图。[0025]图2实施例四中抗Xa因子效价与入口温度、出口温度关系图。[0026]图3实施例四中干燥失重与样品浓度、出口温度及喷雾速率关系图。具体实施方式[0027]以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对发明本身不做任何形式的限定。在以下实施例中选用的试剂均为市售的普通分析纯试剂。[0028]实施例一[0029]依诺肝素钠成品的制备：[0030]在3000mL三口反应瓶中，将依诺肝素钠粗品20g，加入到纯化水中，搅拌溶解形成25%浓度质量百分I»的药液，用lmolL的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5后，加入1.0%药液体积的浓度为30%的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用lmolL的盐酸水溶液调节pH至7.0,之后向药液中逐步加入3倍量质量比）的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20倍量的甲醇质量体积比），沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率95.6%。[0031]实施例二[0032]依诺肝素钠成品的制备：[0033]在3000mL三口反应瓶中，将依诺肝素钠粗品20g，加入到纯化水中，搅拌溶解形成35%浓度质量百分数）的药液，用lmo1L的氢氧化钠水溶液调节pH至10.5后，加入2.0%药液体积的浓度为30%的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用lmolL的盐酸水溶液调节pH至7.5，之后向药液中逐步加入5倍量质量比）的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入60倍量的甲醇质量体积比），沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率94.3%。[0034]实施例三[0035]依诺肝素钠成品的制备：[0036]在3000mL三口反应瓶中，将依诺肝素钠粗品20g，加入到纯化水中，搅拌溶解形成30%浓度（质量百分数）的药液，用lmo1L的氢氧化钠水溶液调节pH至10.0〜10.2后，加入1.5%药液体积的浓度为30%的过氧化氢，持续搅拌20小时后，用lmolL的盐酸水溶液调节pH至7.2,之后向药液中逐步加入4倍量质量比）的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入35倍量的甲醇质量体积比），沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率96.5%。[0037]实施例四[0038]喷雾干燥：[0039]在喷雾干燥条件中，根据现有文献报道，对产品质量产生关键影响的四个因素分别为：样品溶液浓度（Factor1、喷雾干燥入口温度（Factor2、喷雾干燥出口温度Factor3及喷雾速率Factor4;各指标考察范围分别为样品溶液浓度45〜60%;喷雾干燥入口温度150〜170°C;喷雾干燥出口温度75〜85°C;喷雾速率600〜900mlh。根据该因素分析设定其试验方案如下表所示：[0040]表1响应面试验因素水平[0042]根据以上试验设计，进行响应面分析试验方案设计，共进行30批次实验。依诺肝素钠精制品的指标中受干燥条件影响的4个因变量分别为:澄清度Response1，合格者编号为1，不合格者编号为0、抗Xa因子效价Response2，IUmg、抗IIa因子效价Response3，IUmg及干燥失重Response4,％。由于实验在3日内完成，3日内因其他不可控因素的变化可能会对实验造成影响，因此需设置3个BLOCK，在三个BLOCK中设置对应的几个中点实验重复，以检验中点实验的重复性是否良好，观察这些不可控因素对实验造成的影响，从而最大限度的降低实验中不可控因素对实验的干扰。所得试验结果如下表2所示。[0043]通过对数据进行统计学分析发现：（1在澄清度指标下，样品的浓度、入口温度及出口温度直接与其相关，结果见附图1。[0044]2在抗Xa因子效价指标下，入口温度与出口温度直接与其相关，结果见附图2。[0045]3在抗IIa因子效价指标项下，该指标数据未能与以上四个因素呈现出显著性相关，即此项指标的变化可忽略不计。[0046]4在干燥失重项下，该指标数据与样品浓度、出口温度及喷雾速率呈负相关，结果见附图3。[0047]通过分析确认相关因素后对实验结果进一步分析，综合考虑以上四个因变量后对实验条件进行优化计算，最终获得条件为:依诺肝素钠水溶液浓度为45%质量百分数），喷雾干燥入口温度170°C，出口温度80°C，喷雾干燥速率为600mlh的条件为最佳。此条件经计算预测其澄明度应合格;抗Xa因子效价为95.02IUmg95%置信区间内抗Xa因子效价值范围为93.40〜96.6411]1职）；抗11因子效价为25.0011]1职95%置信区间内抗11因子效价值范围为24.80〜25.20IUmg;抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比值为3.8比值范围为3.7〜3.9;干燥失重值应为3.32%95%置信区间内干燥失重值范围为2.69〜3.95%。[0049]实施例五[0050]依诺肝素钠精制品的制备：[0051]在6个IOOOmL三口反应瓶中，分别将6批依诺肝素钠成品20g加入到纯化水中，搅拌溶解形成45%浓度质量百分数的药液，药液经0.Iym滤膜过滤，喷雾干燥，喷雾干燥条件按照响应面法优化所得方案进行，控制喷雾干燥药液入口温度170°C，出口温度80°C，药液喷雾速率为600mLh，喷雾干燥后得到依诺肝素钠精制品，并对样品的全部指标进行检测分析，所得数据情况如下见表3。[0052]对比例一[0053]依诺肝素钠成品的制备：[0054]在干燥的2000mL三口反应瓶中加入依诺肝素钠粗品20g，加入纯化水400mL，10〜30°C下，搅拌溶解形成5%浓度的药液，以lmolL的氢氧化钠水溶液调节pH值至8.8，按药液体积加入0.5%倍的过氧化氢，过氧化氢浓度为30%，持续搅拌20小时，向药液中逐步加入40g氯化钠搅拌溶解，加入药液体积2.5倍的甲醇，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间体。按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率90.1%。[0055]对比例二[0056]依诺肝素钠成品的制备：[0057]在干燥的2000mL三口反应瓶中加入依诺肝素钠粗品20g，加入纯化水400mL，10〜30°C下，搅拌溶解形成5%浓度的药液，以lmolL的氢氧化钠水溶液调节pH值至7.8，按药液体积加入1.0%倍的过氧化氢，过氧化氢浓度为30%，持续搅拌12小时，向药液中逐步加入40g氯化钠搅拌溶解，加入药液体积2.5倍的甲醇，沉淀，过滤得依诺肝素钠中间体。按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品，质量收率87.4%。[0058]对比例三[0059]依诺肝素钠精制品的制备：[0060]向干燥的250mL三口反应瓶中加入依诺肝素钠成品15g，加入纯化水50mL，于20〜30°C下，搅拌溶解形成30%浓度的药液，药液经0.Ιμπι滤膜过滤，喷雾干燥，其中喷雾干燥药液入口温度为120°C，出口温度为60°C，药液喷雾速率为800mLh，喷雾干燥后得依诺肝素钠精制品，并对其各项指标进行测定。[0061]对比例四[0062]依诺肝素钠精制品的制备：[0063]称取依诺肝素钠成品20g加入2000mL三口反应瓶中，加入200mL5%的氯化钠溶液中搅拌溶解，得依诺肝素钠药液，将其过滤得滤液。将滤液在2000rmin的离心机中离心30min得上清液和沉淀物。将500mL甲醇加入到上清液中，搅拌1.5h后静置5h，得沉淀物。将沉淀物用纯化水溶解成15%的溶液质量百分数），以0.Ιμπι滤膜过滤后，喷雾干燥得依诺肝素钠精制品，并对其各项指标进行测定。[0064]表3实验所得依诺肝素钠精制品检测结果[0065][0067]由表3可知，本发明的依诺肝素钠的各项检测指标均优于对比例，且所得结果稳定可靠，合格率高。

权利要求：1.一种依诺肝素钠的精制方法，其特征在于，包括如下步骤：（1将依诺肝素钠粗品溶于水后，经双氧水氧化脱色、甲醇分级醇沉，制得依诺肝素钠成品；⑵喷雾干燥获得依诺肝素纳精制品。2.根据权利要求1所述的精制方法，其特征在于，步骤（1是将依诺肝素钠粗品加入到纯化水中，搅拌溶解形成25〜35%浓度质量百分数的药液，用lmolL的氢氧化钠水溶液调节pH至9.5〜10.5后，加入1.0〜2.0%药液体积的浓度为30%的过氧化氢，搅拌20小时后，用lmolL的盐酸水溶液调节pH至7.0〜7.5，之后向药液中逐步加入3〜5倍量质量比）的氯化钠，搅拌至完全溶解后向药液中加入20〜60倍量的甲醇质量体积比），沉淀，过滤得依诺肝素钠中间品；按此步骤重复操作一次得依诺肝素钠成品。3.根据权利要求1所述的精制方法，其特征在于，步骤2所述的喷雾干燥条件为:配制依诺肝素钠水溶液浓度为45%质量百分数）；经0.Ιμπι滤膜过滤后喷雾干燥，喷雾干燥入口温度170°C;喷雾干燥出口温度80°C;喷雾速率600mlh。4.根据权利要求2所述的精制方法，其特征在于，步骤（1中lmolL的氢氧化钠水溶液调节药液的pH值为10.0〜10.2;lmolL的盐酸水溶液调节药液的pH值为7.0〜7.2;氯化钠的用量为4倍量质量比）；醇沉所用甲醇倍量为35倍量的甲醇质量体积比）。

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