申请/专利权人：内蒙古中能生物科技有限公司

申请日：2020-04-17

公开（公告）日：2020-07-24

公开（公告）号：CN111440744A

主分类号：C12N1/20(20060101)

分类号：C12N1/20(20060101);C12Q1/689(20180101);C12Q1/04(20060101);A23L5/20(20160101);C12R1/125(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2023.10.27#发明专利申请公布后的视为撤回;2020.07.24#公开

摘要：本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌降解饲料霉菌毒素的试验方法，通过从酸性、高温的热泉、火山口或醋厂环境采集土壤、水样品，筛选分离得到一株耐酸、耐高温高效降解黄曲霉毒素AFB1和玉米赤霉烯酮ZEN的枯草芽孢杆菌，本发明涉及饲料生产技术领域。该利用枯草芽孢杆菌降解饲料霉菌毒素的试验方法，为食品和饲料加工过程中玉米黄曲霉毒素AFB1和玉米赤霉烯酮ZEN的去除提供了菌种资源，具有重要的应用价值，将筛选出的枯草芽孢杆菌降解菌株加入选取的DDGS饲料样品中进行发酵，能够将DDGS饲料的残糖进行利用，同时将水溶性的真菌毒素进行降解，既生产单细胞蛋白，同时也降低真菌毒素提高DDGS的质量。

主权项：1.一种利用枯草芽孢杆菌降解饲料霉菌毒素的试验方法，其特征在于：具体包括以下步骤：S1、样品的采集：首先从不同地区热泉、火山口或醋厂的酸性、高温环境条件下采集土壤样品或水样品，并于-20℃的温度下保存；S2、发酵降解处理：首先对步骤S1采集的样品中筛选出枯草芽孢杆菌降解菌株，然后将筛选出的枯草芽孢杆菌降解菌株加入选取的DDGS饲料样品中进行发酵，发酵处理2-3天后，将发酵料取出进行浓缩干燥，能够将DDGS饲料的残糖进行利用，同时将水溶性的真菌毒素进行降解；S3、毒素的检测：应用高效液相色谱-荧光检测器HPLCFLD检测ZEN浓度：将有显著降解效果的富集液涂布于LB固体培养基上，28℃恒温培养箱培养24h后，挑取不同的单菌落，首先接种于LB培养基中，并于28℃摇床恒温培养24h，再按5％vv的接种量接种到含有2μg*mL-1黄曲霉毒素AFB1和玉米赤霉烯酮ZEN毒素的MM培养基中，以仅含相同浓度黄曲霉毒素AFB1和玉米赤霉烯酮ZEN毒素的MM培养基作为对照组，在28℃摇床恒温培养72h后，用氯仿抽提3次，氮吹至干，再用1mL乙腈水复溶，HPLC-FLD检测毒素浓度并对比对照组筛选具有高效降解毒素的单一菌株；S4、降解菌的鉴定：利用细菌16SrDNA通用引物对筛选得到的单一菌株的16SrDNA基因序列进行测定，并将分析测序结果在NCBI使用Blast比对，从GenBank数据库中获得与菌株16SrDNA源的公认标准序列数据B4-31，并利用软件MEGA7.0中的最大似然法分析该单一菌种的16SrDNA基因与相似种属的进化关系；S5、降解菌最适降解条件的分析：挑取降解菌的单菌落于LB液体培养基活化24h，按5％vv的接种量分别接种于LB、NB和MM培养基，28℃、180rmin恒温培养72h，检测其在600nm波长下的光密度值，以分析菌株生长状况，然后每隔9h取样检测一次，绘制不同培养基条件下ZEN降解菌的生长曲线。

全文数据：

权利要求：

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