申请/专利权人：济南国科医工科技发展有限公司

申请日：2020-07-01

公开（公告）日：2020-09-15

公开（公告）号：CN111662893A

主分类号：C12N9/12(20060101)

分类号：C12N9/12(20060101);C12N15/70(20060101);C12Q1/686(20180101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.03.24#发明专利申请公布后的驳回;2020.10.13#实质审查的生效;2020.09.15#公开

摘要：本发明公开了一种分子诊断酶制剂的制备方法，包括以下步骤：1构建表达菌株：1‑1克隆选择的表达基因的核酸序列；1‑2构建重组质粒；1‑3获得重组表达菌株；2重组表达菌株进行目的蛋白表达；3目的蛋白纯化。本发明的分子诊断酶制剂的制备方法可获得高纯度DNA聚合酶，不仅可用于普通的PCR反应，在对反应条件要求较高的荧光定量PCR及数字PCR反应也可以有效使用；本发明中的纯化方法可以应用到所有耐热DNA聚合酶的纯化流程，能减少相关实验的操作难度，且可以为工业化大规模生产提供借鉴和帮助；本发明获得的酶可在‑20℃下稳定保存1年以上，具有良好的产品开发潜质。

主权项：1.一种分子诊断酶制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1构建表达菌株：1-1克隆选择的表达基因的核酸序列，该核酸序列的3′段引物带有6个His密码子；1-2构建重组质粒；1-3获得重组表达菌株；2重组表达菌株进行目的蛋白表达；3目的蛋白纯化：3-1收集步骤2获得的菌株，洗涤；3-2将洗涤后的菌体重悬，破碎；3-3无需离心，直接将破碎后的具体进行热纯化，再离心取上清液；3-4将上清液进行Ni柱纯化，收集目的蛋白洗脱液；3-5目的蛋白洗脱液浓缩，获得目的酶制剂。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 济南国科医工科技发展有限公司 分子诊断酶制剂的制备方法

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