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【发明授权】新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒和方法_华中科技大学同济医学院附属同济医院_202010060229.X 

申请/专利权人:华中科技大学同济医学院附属同济医院

申请日:2020-01-19

公开(公告)日:2020-09-15

公开(公告)号:CN111057797B

主分类号:C12Q1/70(20060101)

分类号:C12Q1/70(20060101);C12Q1/6851(20180101);C12N15/11(20060101);C12R1/93(20060101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2020.09.15#授权;2020.05.19#实质审查的生效;2020.04.24#公开

摘要:本发明属于病毒检测技术领域,尤其涉及一种新型冠状病毒2019‑nCoV双通道实时荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒和方法。本发明采用单管双荧光通道同时检测新型冠状病毒2019‑nCoV和内参基因RnaseP的存在,能检测肺泡灌洗液、鼻咽拭子、全血、血清、粪便和组织等标本中新型冠状病毒2019‑nCoVRNA的存在。本发明检测时间周期短,适用于临床和床旁的快速检测诊断;检测病毒特异性高,准确率高;在进行病毒定性分析、定量分析,定量线性范围好;检测灵敏度高;实验结果重复性好,精密度高;检测体系中加入了内参基因,能通过内参基因的检测结果对样本的提取和扩增整个过程进行质量监控。

主权项:1.一种新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测试剂盒,包括:实时荧光定量PCR检测引物如SEQIDNO.1-2所示及其探针如SEQIDNO.3所示;以及内标基因RnaseP特异性引物如SEQIDNO.4-5所示、及其探针如SEQIDNO.6所示;且所述新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测试剂盒的反应体系为:RNA模板5μl;新型冠状病毒2019-nCoV特异性荧光探针10μmolL,1μl;新型冠状病毒2019-nCoV特异性上游引物10μmolL,0.75μl;新型冠状病毒2019-nCoV特异性下游引物10μmolL,0.75μl;RnaseP特异性荧光探针10μmolL,0.5μl;RnaseP特异性上游引物10μmolL,0.5μl;RnaseP特异性下游引物10μmolL,0.5μl;5×PCRbuffer,5μl;EnzymeMix,5μl;超纯水或RnaseFreeH2O6μl;其中,所述5×PCRBuffer的配方为:20mMTris·Cl,80mMKCl,80mMNH42SO4,1.5mMDTT;12mMMgCl2,10mMdNTP,2.5mMdUTP,0.5μM随机六聚体引物;0.25μMOligodT;所述EnzymeMix的配方为:20mMTris·Cl,80mMKCl,1mMDTT;0.1mMEDTA,0.5%NonidetP-40,0.5%Tween20;50%甘油,20UμlRNA酶抑制剂;2UμlUNG酶,200Uμl高效逆转录酶;快速Taq酶2.5Uμl。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 华中科技大学同济医学院附属同济医院 新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒和方法

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