申请/专利权人：浙江大学

申请日：2017-05-27

公开（公告）日：2020-09-15

公开（公告）号：CN107281501B

主分类号：A61K47/69(20170101)

分类号：A61K47/69(20170101);A61K31/506(20060101);A61P31/18(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.09.15#授权;2017.11.24#实质审查的生效;2017.10.24#公开

摘要：本发明公开了一种呋喃硫胺6‑已基环糊精纳米粒体及体外抗HIV‑1活性的应用，6‑已基β‑环糊精与呋喃硫胺先形成包合物，由于6‑已基β‑环糊精两亲结构，在没有表面活性剂的情况下，形成6‑已基β‑环糊精载呋喃硫胺的呋喃硫胺6‑已基β‑环糊精纳米复合物。呋喃硫胺除了具有已知的药效，还具有抗HIV‑1活性，与常规的脂质体相比较，6‑已基β‑环糊精内部的空腔及它的长脂肪链部分均可包载药物，因此这种结构的载体具有较高的包封率，6‑已基β‑环糊精与呋喃硫胺包和后可以形成纳米粒，由于纳米粒的特殊性质，其抗HIV‑1IIIB活性有很大的提高。

主权项：1.一种呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物，其特征在于，所述的6-已基β-环糊精与呋喃硫胺先形成包合物，由于6-已基β-环糊精两亲结构，在没有表面活性剂的情况下，形成6-已基β-环糊精载呋喃硫胺的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物，所述的两亲结构是指6-已基β-环糊精具有亲水端的环糊精结构和疏水端的长脂肪链，在水中通过纳米沉淀法能自发的形成纳米球或纳米囊结构；所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精复合物具有纳米特征，具体粒径分布在100-200nm，纳米粒的Zeta电位为-19.3±1.8mV；所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物的包封率为89.29±0.67，载药量为7.78±0.03。

全文数据：—种呋喃硫胺6-已基环糊精纳米粒体及体外抗HIV-1活性的应用技术领域[0001]本发明属于利用特殊助剂提高药物疗效的领域，具体地说，是涉及一种采用6-已基环糊精作为包结呋喃硫胺的呋喃硫胺6-已基环糊精纳米粒体，以及使药物聚集成纳米粒，由于纳米粒的特殊性质，从而增强体外抗HIV-I活性的应用。背景技术[0002]呋喃硫胺作为维生素Bl的衍生物，在人体能够快速转化成活性硫胺，不被硫胺酶分解，对组织兼容性和亲和力都很强，在脏器与血中含量浓度高，持续存在时间长，其特性是长期、高效、小毒。呋喃硫胺跟维生素Bl—样，是糖类代谢的必需物质。人体缺乏时，氧化受阻会导致乳酸大量堆积，继而影响到能量的供应，导致食欲下降、身体衰弱和体重下降等消化道方面问题，导致感觉神经和运动神经均受影响的多发性周围神经炎，导致感觉异常、神经痛、四肢无力、肌肉酸痛和萎缩等神经和心血管问题，导致心悸、急促、胸闷、心脏肥大、肝肺充血和周围水肿等心脏功能方面的问题。最新的研究发现呋喃硫胺还有其他疗效，如在治疗艾滋病过程中也起到疗效。但由于呋喃硫胺结构复杂，不稳定，在治疗过程中为了增强其稳定性及其疗效，本发明采用6-已基β_环糊精作为包结呋喃硫胺的药物载体，使药物聚集成纳米粒，并药物缓释，增加疗效。[0003]两亲性环糊精衍生物分子的自组装两亲性环糊精衍生物（amphiphiliccyclodex-trins是由β-环糊精上的轻基与长链脂肪族化合物7个C分子上的基团成醚后形成的两亲性化合物。该分子由于同时具有亲水端的环糊精结构，和疏水端的长脂肪链，它在水中通过纳米沉淀法能自发的形成纳米球或纳米囊结构。[0004]两亲性环糊精衍生物分子的主要优点在于它具有定向排列和组装的能力，在一定的溶液条件下不需要表面活性剂即可自发的形成纳米粒。由于环糊精内部的空腔及它的长脂肪链部分均可包载药物，因此这种结构的载体具有较高的包封率。[0005]与传统的药物制剂相比，纳米药物载体具备特定的优势，表现在：1纳米药物载体可经过血液循环进入毛细血管，还可透过内皮细胞间隙，进入病灶，被细胞以胞饮的方式吸收，实现靶向用药，提高了药物的生物利用率。2纳米载体粒径较小，拥有较高的比表面，可以包埋疏水性药物，提高其溶解性，减少常规用药中助溶剂的副作用。3纳米载体可延长药物的消除半衰期（tvaO，提高有效血药浓度时间，提高药效，降低用药频率，减少其毒副作用。4纳米载体可透过机体屏障对药物作用的限制，如血脑屏障、血眼屏障及细胞生物膜屏障等，使药物到达病灶，提高药效。发明内容[0006]本发明公开了一种6-已基β-环糊精与呋喃硫胺先形成包合物;在没有表面活性剂的情况下，形成载呋喃硫胺的6-已基β-环糊精纳米复合物，并对呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒进行体外抗HIV-I活性实验，呋喃硫胺具有抗HIV-I活性，特别是呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒使抗HIV-I活性大幅提高。[0007]本发明具体是通过如下技术方案来实现的：[0008]本发明公开了一种呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物，所述的6-已基β-环糊精与呋喃硫胺先形成包合物，由于6-已基β-环糊精两亲结构，在没有表面活性剂的情况下，形成6-已基β-环糊精载呋喃硫胺的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物。[0009]作为进一步地改进，本发明所述的两亲结构是指6-已基β-环糊精具有亲水端的环糊精结构和疏水端的长脂肪链，在水中通过纳米沉淀法能自发的形成纳米球或纳米囊结构。[0010]作为进一步地改进，本发明所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精复合物具有纳米特征，具体粒径分布在100-200nm，纳米粒的Zeta电位为-19.3±1.8mV。[0011]作为进一步地改进，本发明所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物的包封率为89.29±0.67，载药量为7.78±0.03。[0012]本发明还公开了一种呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物体外抗HIV-ImB活性的应用。[0013]作为进一步地改进，在呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物应用于对HIV-ImB诱导C8166细胞形成合胞体的抑制中，呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物对C8166的细胞毒性109.12以8，111114：5为0.09以8.111厂1，选择指数为236.16。[00Μ]作为进一步地改进，咲喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒对HIV-IIIIB急性感染C8166细胞内HIV-Iρ24抗原表达水平抑制的EC50为4.65yg·mL一、呋喃硫胺对HIV-IIIIB急性感染C8166细胞内HIV-Ip24抗原表达水平抑制的EC50为22.55yg·mL一、[0015]本发明的有益效果如下：[0016]1呋喃硫胺除了具有已知的药效，还具有抗HIV-I活性，特别是呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒使抗HIV-I活性大幅提高。2与常规的脂质体相比较，6-已基β-环糊精内部的空腔及它的长脂肪链部分均可包载药物，因此这种结构的载体具有较高的包封率。36-已基β-环糊精由于同时具有亲水端的环糊精结构，和疏水端的长脂肪链，它在水中通过纳米沉淀法能自发的形成纳米球或纳米囊结构。46-已基β-环糊精与呋喃硫胺包和后可以形成纳米粒，由于纳米粒的特殊性质，其抗HIV-IIiiB活性有很大的提高。具体实施方式[0017]下面结合具体实施例对本发明的技术方案作详细说明：[0018]实施例1[0019]16-已基β_环糊精与呋喃硫胺包合物的制备[0020]称取α-环糊精衍生物，呋喃硫胺摩尔比为21。加入乙醇水=1110ml，室温搅拌一周。乙醇通过旋蒸除去，水通过冷冻干燥除去，得到粉末状。[0021]⑵载呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物制备[0022]包合物溶于二甲基甲酰胺中，闭光放置24h后移入透析袋中，用大量蒸馏水透析2天，去除有机溶剂、未包埋的呋喃硫胺，然后将透析袋中液体移至小瓶中，超声波制备载药纳米粒溶液，真空冷冻干燥后保存备用。动态光散射仪测量的粒径测载药的纳米粒径分布，咲喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒径分布在100_200nm。通过动态光散射仪测定纳米粒的Zeta电位为_19·3±1.8mV。[0023]对照试验同以上步骤I:脂质体与呋喃硫胺的包和物的制备。[0024]实施例2[0025]绘制准曲线[0026]准确称IOmg咲喃硫胺溶于5Om1甲酰胺中，配制成10Oygm1的咲喃硫胺标准储备液。从配好的溶液中取0.Iml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，Iml溶液加入到IOml棕色瓶中，配成5ygml、IOygml、20ygml、30ygml、40ygml、50ygml的一系列咲喃硫胺标准液。用紫外可见光分光光度计分别测定这一系列标准液在620nm处的吸光度值，做咲喃硫胺的标准曲线。[0027]6-已基β_环糊精纳米粒包封率和载药量的计算[0028]称取载呋喃硫胺环糊精衍生物纳米粒溶于甲酰胺中，用紫外可见光分光光度计测定溶液在620nm处的吸光度，利用咲喃硫胺标准曲线计算溶液中咲喃硫胺的含量，并计算呋喃硫胺环糊精衍生物纳米粒的包封率和载药量。实验都要重复三次。[0029]包封率=W2W1X100%[0030]载药量=W2WtX100%[0031]Wl:初始呋喃硫胺量;W2:纳米粒溶液中呋喃硫胺量;Wt:纳米粒总质量[0032]6-已基β-环糊精纳米粒包封率89.29±0.67;载药量7.78±0.03;脂质体包封率39.29±0.34;载药量1.38±0.02。[0033]实施例3[0034]呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒对HIV-ImB诱导C8166细胞形成合胞体的抑制实验[0035]将8XIO5·mL一1C8166细胞50yL接种到含有IOOyL倍比稀释要测化合物的96孔细胞培养板上，然后加50yL的HIV-IniB稀释上清MOI=0.06。设3个重复孔。同时设置不含化合物的正常细胞对照孔，齐多夫定AZT为阳性药物对照。培养3d后，倒置显微镜下（X100计数合胞体的形成。EC5Q为抑制合胞体形成50%时的化合物浓度。样品是咲喃硫胺环糊精纳米粒，未形成纳米粒的咲喃硫胺。[0036]表1样品对C8166细胞的毒性作用及对合胞体形成的抑制作用[0039]从表1可见，呋喃硫胺除有特有的生物活性，对于抗HIV-ImB具有活性;特别是呋喃硫胺形成纳米粒后，抗HIV-ImB活性有可观的提高，对比实验表明6-已基β-环糊精作为具有一定潜力的药物助剂，其比一般的两性脂质体作为药物助剂效果还好。[0040]呋喃硫胺环糊精纳米粒对C8166的细胞毒性109.12yg·mir1，对合胞体形成有一定的抑制作用。EC5q为0.09yg·mL一1，选择指数为236.16。[0041]呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒对HIV-Iiiib急性感染C8166细胞的复制抑制实验[0042]将4XIO5·mL一1HIV-Iiiib预感染2h的C8166细胞IOOyL接种到含有100yL倍比稀释化合物的96孔板上MOI=O.03。培养3d后离心收集培养上清，Triton-XlOO灭活。采用捕捉P24抗原ELISA方法检测化合物对HIV-I复制的抑制作用。齐多夫定AZT为阳性药物对照；样品是咲喃硫胺环糊精纳米粒，未形成纳米粒的咲喃硫胺。[0043]阳性对照药物AZT对HIV-IIIIB急性感染C8166细胞内HIV-Ip24抗原表达水平抑制较好，EC50则为4.28ng·mIT1;呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒对HIV-IIIIB急性感染C8166细胞内HIV-Iρ24抗原表达水平抑制的EC50为4.65yg·mL一、呋喃硫胺对HIV-IIIIB急性感染C8166细胞内HIV-Ip24抗原表达水平抑制的EC50为22.55yg·mL一、呋喃硫胺脂质体包和物对HIV-IIIIB急性感染C8166细胞内HIV-Ip24抗原表达水平抑制的EC50为18.15yg·mlT1。表明咲喃硫胺环糊精纳米粒比未形成纳米粒的咲喃硫胺对急性感染的C8166细胞中的HIV-I复制有更强的抑制作用。同样是两性药物助剂，与脂质体相比，6-已基β-环糊精具有特殊的结构，其与呋喃硫胺包和后可以形成纳米粒，由于纳米粒的特殊性质，其抗HIV-Iiiib活性有很大的提高。[0044]最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的几个具体实施例，显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形，本领域的普通技术人员能从本实发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

权利要求：1.一种呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物，其特征在于，所述的6-已基β-环糊精与呋喃硫胺先形成包合物，由于6-已基β-环糊精两亲结构，在没有表面活性剂的情况下，形成6-已基β-环糊精载呋喃硫胺的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物。2.根据权利要求1所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物，其特征在于，所述的两亲结构是指6-已基β-环糊精具有亲水端的环糊精结构和疏水端的长脂肪链，在水中通过纳米沉淀法能自发的形成纳米球或纳米囊结构。3.根据权利要求1或2所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物，其特征在于，所述的咲喃硫胺6-已基β-环糊精复合物具有纳米特征，具体粒径分布在100_200nm，纳米粒的Zeta电位为_19.3±1.8mV。4.根据权利要求3所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物，其特征在于，所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物的包封率为89.29±0.67，载药量为7.78±0.03。5.—种如权利要求1或2或4所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物体外抗HIV-Iiiib活性的应用。6.根据权利要求5所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物体外抗HIV-ImB活性的应用，其特征在于，在呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物应用于对HIV-Ιπιβ诱导C8166细胞形成合胞体的抑制中，呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物对C8166的细胞毒性109.12以8.111厂14〇5〇为0.0948.111厂1，选择指数为236.16。7.根据权利要求5所述的呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米复合物体外抗HIV-ImB活性的应用，呋喃硫胺6-已基β-环糊精纳米粒对HIV-1IIIB急性感染C8166细胞内HIV-lp24抗原表达水平抑制的EC50为4.65yg·mL一S呋喃硫胺对!11¥-11118急性感染08166细胞内!11¥-1?24抗原表达水平抑制的EC50为22.55yg·mL一、

百度查询： 浙江大学 一种呋喃硫胺/6-已基环糊精纳米粒体及体外抗HIV-1活性的应用

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