【发明授权】化合物、缀合物、试剂盒及其用途_深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司_201610586821.7 

申请/专利权人:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司

申请日:2016-07-25

发明/设计人:刘锐;李可;何飞

公开(公告)日:2020-09-15

代理机构:北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙)

公开(公告)号:CN107652302B

代理人:李志东

主分类号:C07D495/04(20060101)

地址:518057 广东省深圳市南山区高新技术产业园区科技南十二路迈瑞大厦

分类号:C07D495/04(20060101);C12N9/08(20060101);C12N9/16(20060101);C12N9/50(20060101);G01N33/82(20060101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2020.09.15#授权;2018.03.02#实质审查的生效;2018.02.02#公开

摘要:本发明公开了化合物、缀合物、检测维生素D的试剂盒以及试剂盒在检测维生素D中的用途。所述化合物具有式1所示的结构,其中,L表示连接臂,R1、R2和R3分别独立地为氢基、羟基、C1~3烷氧基、C1~3烷基、C2~3烯基或C2~3炔基。本发明的化合物能够准确地对维生素D进行检测。

主权项:1.一种化合物,其特征在于,所述化合物具有以下之一的结构:

全文数据:化合物、缀合物、试剂盒及其用途技术领域[0001]本发明涉及分析领域。具体地,本发明涉及化合物、缀合物、试剂盒及其用途。更具体地,本发明涉及化合物、缀合物、检测维生素D的试剂盒以及试剂盒在检测维生素D中的用途。背景技术[0002]维生素D是指具有如下母核结构单元的物质,常见的有25-轻基维生素D。[0003][0004]目前,利用免疫方法检测维生素D的原理为:由于维生素D上没有可以直接连接上标记分子的官能团,需要经过化学合成的方法引入可以直接连接上标记分子的结构(称为连接臂,可以为羧基、氨基等),得到维生素D衍生物。接着,通过化学键将标记分子连接到维生素D衍生物的连接臂上,得到维生素D标记分子,该标记分子能够直接或者间接产生可检测信号。在检测过程中,维生素D标记分子与待测样本中的维生素D竞争结合抗体结合的维生素D标记分子与样本中维生素D浓度存在反比例函数关系)。经过免疫反应过程,产生光信号值。通过赋值校准,获得待测维生素D的浓度值,从而完成对待测样本中维生素D含量的测定。[0005]然而,目前适用的维生素D衍生物仍有待开发。发明内容[0006]本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。[0007]本发明是基于发明人的下列发现而完成的:[0008]在竞争法检测维生素D的试剂盒中,维生素D衍生物的性能是影响试剂盒质量的重要因素,而维生素D衍生物上连接臂的位置选择是个难点,既要有合成的可行性,又要保证得到的维生素D衍生物能够与抗体有效地结合。进而,本发明的发明人通过对维生素D的结构进行深入研究发现,通过在维生素D母核结构的9、11或12位碳上衍生出连接臂,从而得到维生素D衍生物。引入的连接臂不会破坏抗原决定簇的结构,得到的维生素D衍生物能够有效地与相应抗体特异性结合,且结合率较高。此外,维生素D衍生物能够与标记分子相连,进而通过连接的标记分子直接或者间接产生的可检测信号(如显色、光信号变化等),从而可以准确地对维生素D进行检测。[0009]有鉴于此,在本发明的第一方面,本发明提出了一种化合物。根据本发明的实施例,所述化合物具有下式所示的结构,其中,L表示连接臂,R^RdPR3分别独立地为氢基、羟基、Cl〜3烧氧基、Cl〜3烧基、C2〜3稀基或C2〜3块基。发明人经过大量实验发现,通过在维生素D母核结构的9、11或12位碳上衍生出连接臂得到的本发明的化合物一一维生素D衍生物,引入连接臂不会破坏抗原决定簇的结构,因此该化合物能够有效地与相应抗体特异性结合。此夕卜,该化合物容易获得,易于推广应用。[0010][0011]在本发明的第二方面,本发明提出了一种缀合物。根据本发明的实施例,所述缀合物包括前面所描述的化合物以及标记分子,所述标记分子与所述化合物的连接臂相连。根据本发明实施例的缀合物能够有效地与抗体特异性结合,通过与检测底物反应,标记分子直接或间接产生可检测信号,从而准确地检测样本中维生素D的含量。[0012]在本发明的第三方面,本发明提出了一种检测维生素D的试剂盒。根据本发明的实施例,所述试剂盒包括前面所描述的缀合物。发明人发现,利用本发明的试剂盒,基于缀合物能够有效地与抗体特异性结合,通过与检测底物反应,标记分子直接或间接产生可检测信号,从而准确地检测样本中维生素D的含量。[0013]在本发明的第四方面,本发明提出了一种前面所描述的试剂盒在检测维生素D中的用途。如前所述,根据本发明的实施例,利用本发明的试剂盒能够准确有效地对维生素D进行检测。[0014]此外,根据本发明的实施例,化合物、缀合物、检测维生素D的试剂盒以及该试剂盒在检测维生素D中的用途具有下列优点的至少之一:[0015]通过在维生素D母核结构的9、11或12碳上引入连接臂,从而得到本发明的化合物。引入连接臂不会破坏抗原决定簇的结构,所得到的化合物能够有效地与相应抗体特异性结合,且该化合物容易获得,易于推广应用。此外,该化合物能够连接到标记分子上,得到缀合物,并将其应用于维生素D的检测,能够基于免疫检测原理如显色、光信号变化等准确地检测样本中维生素D的含量。[0016]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出,部分将从下面的描述中变得明显,或通过本发明的实践了解到。附图说明[0017]本发明的上述和或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解,其中:[0018]图1显示了根据本发明一个实施例的检测维生素D含量的过程示意图;以及[0019]图2显示了根据本发明一个实施例的标准曲线图;以及[0020]图3显示了根据本发明一个实施例的曲线图。具体实施方式[0021]下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。[0022]本发明提出了化合物、缀合物、检测维生素D的试剂盒及检测维生素D的试剂盒在检测维生素D中的用途,下面将分别对其进行详细描述。[0023]化合物[0024]在本发明的第一方面,本发明提出了一种化合物。该化合物具有式(1所示的结构,其中,L表示连接臂,R1、R2和R3分别独立地为氢基、羟基、烷氧基、烷基、C2〜3烯基或C2〜3炔基。[0025][0026]需要说明的是,关于式(1所示化合物的连接臂L衍生位点的确定,发明人进行了大量实验研究。[0027]具体地,首先,如下式所示:[0028][0029]发明人发现,以9、11或12位碳作为衍生位点,能够较容易地引入连接臂L,不会破坏抗原决定簇的结构,且合成的化合物稳定性强,L不易丢失。在该位点引入L所得到的化合物能够有效地与抗原进行特异性结合,进而能够准确地对维生素D进行检测。然而,以其他位点引入连接臂所得到的化合物对维生素D检测的效果不佳。进而,发明人以维生素D母核的9、11或12位碳作为交联位点,引入连接臂,从而得到本申请的化合物一维生素D衍生物。[0030]需要说明的是,参见式b所示化合物,取代基L画一个键连接到中心的环上所形成的环体系代表取代基L取代环上面9位碳上的氢(如式bl所示化合物)、11位碳上的氢如式b2所示化合物或12位碳上的氢如式b3所示化合物)。[0031][0032]根据本发明的实施例,该化合物具有以下之一的结构。该化合物能够有效地与抗体进行特异性结合,结合率较高,进而能够准确地对维生素D进行检测。[0033][0034][0035]根据本发明的另一个实施例,所述化合物具有以下之一的结构。该化合物能够有效地与抗体进行特异性结合,结合率较高,进而能够准确地对维生素D进行检测。[0036][0037][0038]缀合物[0039]在本发明的第二方面,本发明提出了一种缀合物。本发明化合物可作为式(1所示化合物的缀合物的形式使用。本文中使用的“缀合物”是指本发明作为式(1所示化合物通过其连接臂与标记分子连接而形成的物质。根据本发明实施例的缀合物能够有效地与抗体特异性结合,通过与检测底物反应,标记分子直接或者间接产生可检测信号,从而准确地检测样本中维生素D的含量。[0040]根据本发明的实施例,对标记分子的种类不作严格限定。根据本发明的一些实施例,所述标记分子为酶、P丫啶酯或其类似物、吡啶钌或其类似物、鲁米诺或其类似物、异鲁米诺或其类似物、异硫氰酸荧光素或其类似物。由此,通过与检测底物反应,标记分子直接或间接产生可检测信号,以准确地确定维生素D的含量。[0041]根据本发明的实施例,对酶的种类不作严格限定。其中,辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或乙酰蛋白酶与催化底物特异性结合能力强,用于免疫检测时效率高,检测结果准确可靠。因而,根据本发明的一些实施例,所述酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或乙酰蛋白酶。[0042]本领域技术人员能够理解的是,前面针对化合物所描述的特征和优点同样适用于该缀合物,在此不再赘述。[0043]检测维生素D的试剂盒[0044]在本发明的第三方面,本发明提出了一种检测维生素D的试剂盒。根据本发明的实施例,所述试剂盒包括前面所描述的缀合物。发明人发现,利用本发明的试剂盒,基于缀合物能够有效地与抗体特异性结合,通过与检测底物反应,标记分子能够直接或间接产生可检测信号,从而能够准确地检测样本中维生素D的含量。[0045]根据本发明的一些实施例,维生素D为25-羟基维生素D,例如25-羟基维生素D2和D3〇[0046]本领域技术人员能够理解的是,前面针对缀合物所描述的特征和优点同样适用于该检测维生素D的试剂盒,在此不再赘述。[0047]检测维生素D的试剂盒在检测维生素D中的用途[0048]在本发明的第四方面,本发明提出了一种前面所描述的试剂盒在检测维生素D中的用途。如前所述,根据本发明的实施例,利用本发明的试剂盒能够准确有效地对维生素D进行检测。[0049]根据本发明的实施例,试剂盒是采用竞争结合法对维生素D进行检测。试剂盒中的维生素D衍生物结构与维生素D相似,将竞争性地结合抗体。根据本发明的具体实施例,可以先将含有维生素D的样品与固相载体中包被的抗体进行反应,得到固相载体-抗体-维生素D复合物。接着,将固相载体-抗体-维生素D复合物与缀合物进行反应,缀合物中所连接的维生素D将竞争性取代固相载体-抗体-维生素D复合物中的维生素D,从而形成固相载体-抗体-缀合物复合物。最后,将固相载体-抗体-缀合物复合物与检测底物混合,使缀合物所连接的标记分子与检测底物发生反应产生光信号,并基于光信号大小确定样品中维生素D的含量。具体地,固定载体可以为磁微粒、胶体金或纤维素膜。[0050]本领域技术人员能够理解的是,前面针对检测维生素D的试剂盒所描述的特征和优点,同样适用于该检测维生素D的试剂盒在检测维生素D中的用途,在此不再赘述。[0051]下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解,下面的实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。[0052]实施例1[0053]在该实施例中,按照下列方法制备式6所示化合物:[0054][0055]合成路线如下所示:[0056][0057]其中,化合物7、R基团的结构如下所示:[0058][0059]合成化合物2:[0060]将120mg化合物10·46mmol溶解于含有2mLCH3CNH2〇10:1混合溶液的20mL原底烧瓶中并恒温至8_10°C,依次加入1,1,1三氟丙酮0.411^,4.6111111〇1、过硫酸氢钾复合盐Oxone848mg,1·38mmol以及NaHC〇3232mg,2·76mmol,充分反应6h后加入IOmL水并用20mLCH2Cl2萃取。萃取物用食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥,过滤后旋蒸除去溶剂。所得到的固体物通过层析柱分离纯化(乙酸乙酯石油醚=1:1后得到79mg,0.29mmo1无色透明的油状化合物2,收率为62%。[0061]lHMffiCDCl3,300MHz2.252H,m,2.10-1.1017H,m,1.066H,s,0.753H,d,0.483H,s;HRMSEICICi8H32〇2M-H2〇+预估峰:262.2276,实际峰:262.2275。[0062]合成化合物3:[0063]将1.4g,5.0mmol的化合物2溶解于400mLCH2CI2中,依次加入1.6g,1.74mL,15mmol二甲基吡啶以及1·58mL,7mmoITESOTf,-80°C下搅拌25min,加入30mL水以停止反应。取出有机层并用无水硫酸钠干燥,过滤后旋蒸除去CH2Cl2,所得到的残余物用15%的乙酸乙酯石油醚溶液在层析柱中分离纯化得到1.96g,4.96mmol无色油状化合物3,收率为99%。[0064]IHNMRCDCl3,300MHz2.352H,dd,2.24-1.1225H,m,1.126H,s,0.854H,t,0.523H,s,0.436H,q;HRMSEICIC24H46〇2SiM+H预估峰:395.3345,实际峰395.3348。[0065]合成化合物4:[0066]将2.6811^,1.948,19.2111111〇1的二异丙胺溶于641111^冊中,并在冰水浴中逐滴加入12mL1.6Mn-BuLi的THF溶液。15min后,把混合液置于-78°C中,并逐滴加入含化合物36·30g,16·Ommol的THF溶液30mL。Ih后,向混合液中逐滴加入含2·78g,19·2mmolPhSeCl的THF溶液20mL,并加入4:1的饱和食盐水与10%盐酸的混合溶液,用2XIOOmL的二氯甲烷萃取反应液中的有机物并将有机层用无水硫酸镁干燥,过滤后用旋转蒸发仪除去有机溶剂,并将残留物溶解后重新溶于200mL二氯甲烷中并冷却至0°C,分多次加入6.82g,80%,32mmol的MCPBA。反应15min后,用1:1的饱和食盐水与饱和碳酸氢钠的混合溶液停止反应,并用二氯乙烷萃取得到有机层,用无水硫酸镁干燥过滤后旋干。将得到的有机物用5%的乙酸乙酯石油醚溶液在层析柱上纯化后得到3.1Ig,7.89mmol的无色油状液体化合物4,收率为49%。[0067]IHNMRCDC13,300MHz6.48lH,dt,6.03lH,d,2·32-0.9429H,m,0.834H,t,J=8Hz,0.533H,s,0.416H,q,J=7Hz;HRMSEICIC24H44〇2SiM+H预估峰:393.3144,实际峰393.3248。[0068]合成化合物6:[0069]在N2保护下,将7.62mmol,0.85M的叔丁基锂溶于4.5mL庚烷中,在-85°C的温度下缓慢加入含8mL化合物53.8ImmoI,1.52g的无水乙醚溶液20mL,并搅拌30min。同时,在另一个反应容器中将0.48!111^,1.91111]1〇111-13113?以及36211^,1.91]11]1〇1]111加入151111^干燥的无水乙醚中,得到CuIn-BmP的配合物。-85°C下,将CuIn-BmP溶液加入先前的含η-叔丁基锂的无水乙醚溶液,并将得到的混合溶液置于-50°C中反应Ih,然后重新冷却到-78°C。逐滴加入含化合物4373mg,0.95mmol的无水乙醚溶液并搅拌30min后,加入2.5mL饱和氯化铵的水溶液,停止反应并加入25mL无水乙醚。依次用饱和氯化铵溶液、水以及饱和食盐水洗涤,并用无水硫酸镁干燥。过滤后旋干得到的液体状有机物用8:1的石油醚乙酸乙酯过柱分离得到535mg,0.57mmol无色透明液体化合物6,收率为60%。[0070]1HM1RCDC13,300MHz8.0-7.52H,s,6.2-6.02H,s,4.592H,s,3.7-3.023H,m,2.8-2.035H,m,1.5-0.226H,m;HRMSEICIC49H9〇N4〇9SSiM+H预估峰:939·6321,实际峰:939·8851。[0071]合成化合物8:[0072]-78°CN2保护下,将0·18mL,1·6M正叔丁基锂0·28mmol的四氢呋喃溶液加入ImL含有123.6mg,0.28mmol化合物7的四氢呋喃中,搅拌40min后,逐滴加入溶解有65mg,[0073]0.07mmol化合物6的干燥的四氢呋喃。在-78°C中搅拌2h后,加入0.4mL甲醇以停止反应,然后用50mL无水乙醚稀释。混合液依次用饱和氯化铵溶液以及饱和食盐水洗涤后加入无水硫酸铵干燥,浓缩。得到的残余物用50:1的乙酸乙酯石油醚溶液过柱得到64.8mg,0.055mmol化合物8,收率为79%。[0074]IHNMRCDCl3,300MHz8.0-7.52H,s,6.2-6.04H,m,5.0-4.54H,m,3.7-3.024H,m,2.8-2.039H,m,l.5-0.243H,m;HRMSEICIC64Hii6N4〇9SSi2M+H预估峰:1173.8772,实际峰:1173.6587。[00M]合成式6所示化合物:[0076]将0.0514mmol60.3mg化合物8溶解于6mL9:1的丙酮水的混合液中,加入4.6mg,0.0184mm〇lPPTs,回流3h后冷却,用乙酸乙酯稀释后依次用饱和碳酸氢钠溶液、水以及饱和食盐水洗涤,用无水硫酸镁干燥后过滤,浓缩。残留物用2:1的石油醚乙酸乙酯混合液过柱得到48.Omg,0.0509mmo1式6所示化合物,收率为98%。[0077]IHNMRCDCl3,300MHz8.0-7.52H,s,6.2-6.06H,m,5.0-4.54H,m,3.7-3.024H,m,2.8-2.039H,m,1.5-0.213H,m;!11^5^1:1〇521188财〇93]\1+!1预估峰:945·6852,实际峰:945·7658。[0078]实施例2[0079]在该实施例中,按照下列过程合成式5所示化合物:[0080][0081]合成路线如下所示:[0082][0083]其中,化合物5、化合物7及R基团的结构如下所示:[0084][0085]具体合成步骤如下:[0086]按照实施例1的方法合成化合物2和3。[0087]合成化合物10:[0088]将1.3411^,0.978,9.6111111〇1的二异丙胺溶于321111^冊中,并在冰水浴中逐滴加入6mL0.8Mn-BuLi的THF溶液。15min后,在N2保护下,把混合液置于-78°C中,并逐滴加入含化合物33·15g,8·Ommol的THF溶液20mL,Ih后,缓慢加入含化合物516·Ommo1,6·58g的THF溶液24mL,搅拌Ih后,用1:1的饱和食盐水与饱和碳酸氢钠的混合溶液停止反应,并用二氯乙烷萃取得到有机层,用无水硫酸镁干燥过滤后旋干。将得到的有机物用1:8的乙酸乙酯石油醚溶液在层析柱上纯化后得到4.42g,4.48mmol无色油状液体化合物10,得率为56%。[0089]lHMMRCDC13,300MHz8.0-7.52H,s,6.2-6.02H,s,4.592H,s,3.7-3.023H,m,2.8-2.034H,m,1.5-0.227H,m;HRMSEICIC49H9〇N4〇9SSiM+H预估峰:939·6426,实际峰:939·8651。[0090]合成化合物11:[0091]-78°CN2保护下,将0·18mL,1·6M正叔丁基锂0·28mmol的四氢呋喃溶液加入ImL含有123.4mg,0.28mmol化合物7的四氢呋喃中,搅拌40min后,逐滴加入溶解有65.7mg,0.07mmo1化合物10的干燥的四氢呋喃。在-78°C中搅拌2h后,加入0.4mL甲醇以停止反应,然后用50mL无水乙醚稀释。混合液依次用饱和氯化铵溶液以及饱和食盐水洗涤后加入无水硫酸铵干燥,浓缩。得到的残余物用50:1的乙酸乙酯石油醚溶液过柱得到62.4mg,0.0532111111〇1纯的化合物11,收率为76%。[0092]IHMMRCDCl3,300MHz8.0-7.52H,s,6.2-6.04H,m,5.0-4.54H,m,3.7-3.02纽,111,2.8-2.038!1,111,1.5-0.244!1,111,!11«^化1。1。6411116他〇93512]«+!〇预估峰:1173.8659,实际峰:1173.6798。[0093]合成式5所示的化合物:[0094]将0.0514mmol60.2mg化合物11溶解于6mL9:1的丙酮水的混合液中,加入4.7mg,0.0185mmolPPTs,回流3h后冷却,用乙酸乙酯稀释后依次用饱和碳酸氢钠溶液、水以及饱和食盐水洗涤,用无水硫酸镁干燥后过滤,浓缩。残留物用2:1的石油醚乙酸乙酯混合液过柱得到47.6mg,0.0504mmo1式5所示的化合物,得率为98%。[0095]IHNMRCDCl3,300MHz8.0-7.52H,s,6.2-6.06H,m,5.0-4.54H,m,3.7-3.024H,m,2·8-2.038H,m,1.5-0·214H,mHRMSEICIC52H88N4〇9SM+H预估峰:945·6745,实际峰:945·7632。[0096]对比例I[0097]在该对比例中,按照下列方法制备式8所示化合物。[0098][0099]合成路线如下所示:[0100][0101]式8所示化合物的合成:[0102]在N2保护下,将0·728mmol,IOlmg的K2⑶3以及0·073mmol,30mg化合物5溶于5mLDMF中,80°C下搅拌,加入0·073mmol,36mg化合物13,反应3h后加入IOmL水停止反应并加入15mL无水乙醚。依次用饱和氯化铵、水以及饱和食盐水洗涤,并用无水硫酸镁干燥。过滤后旋干得到的液体状有机物用8:1的石油醚乙酸乙酯过柱分离得到535mg,0.037mmoI34mg无色透明液体的式8所示化合物,收率为51%。[0103]IHNMRCDCl3,300MHz8.0-7.52H,s,6.2-6.06H,m,5.0-4.54H,m,3.7-3.024H,m,2.8-2.038H,m,1.5-0.220H,m;HRMSEICIC44H7iN0i2预估峰:1013.3524,实际峰:1013.3841。[0104]实施例3[0105]在该实施例中,分别将式5、式6及式8所示的化合物与连接有链酶亲和素的碱性磷酸酶ALP混合,于37摄氏度下孵育,得到缀合物1、2和3。[0106]实施例4[0107]在该实施例中,分别利用实施例3所得到的缀合物1〜3对不同浓度维生素D校准品进行检测,主要过程示意图如图1所示。具体步骤如下:[0108]1取3份不同浓度的维生素D校准品溶液分别与样品处理液混匀后于37摄氏度下孵育12.5分钟,从而将维生素D抗原从样本中释放出来,得到游离的维生素D;[0109]2分别将每种处理后的维生素D校准品进行下述操作:[0110]2-1向维生素D校准品中加入包被有抗体的磁性颗粒,使抗体与校准品中游离维生素D结合,形成磁性颗粒-抗体-维生素D复合物;[0111]2-2分别向含有磁性颗粒-抗体-维生素D复合物的混合液中加入实施例3所得到的缀合物1〜3,于37摄氏度下孵育12.5分钟,缀合物所连接的维生素D将与校准品中的维生素D竞争性结合抗体,置换下已经结合在磁性颗粒上的维生素D,形成磁性颗粒-抗体-缀合物复合物,然后清洗磁性颗粒-抗体-缀合物复合物以除去多余游离的维生素D、抗体及碱性磷酸酶;[0112]2-3分别向步骤2-2所得到的三种磁性颗粒-抗体-缀合物复合物中加入3-2-螺旋金刚烷-4_甲氧基-4-3-磷氧酰-苯基-1,2-二氧环乙烷,于37摄氏度下孵育12.5分钟,记录发光读数。[0113]图2显示了分别利用缀合物1、2和3测定不同浓度校准品溶液中维生素D浓度的曲线图,具体数据如表1所示。可以看出利用缀合物1和2进行检测所得到的曲线信噪比较好,说明化合物能够特异性结合抗体,从而与校准品中的维生素D抗原竞争,进而能够准确地测定校准品中维生素D浓度。而缀合物3所得到的曲线发光值很低,也没有明显的梯度,说明缀合物3无法与维生素D抗体结合。由此,说明以维生素D母核结构2位碳作为衍生位点所形成的化合物无法特异性地结合抗体,从而无法对维生素D进行检测。[0114]表1标准曲线[0115][0116]实施例5[0117]分别采用下列两种方式测定48个样本中维生素D含量:[0118]方式(1:利用缀合物2,按照实施例4的步骤采用迈瑞CL-2000i全自动化学发光免疫分析系统进行检测。[0119]方式2:利用市售的维生素D试剂盒购自DiaSorin索林公司),按照该试剂盒的说明书采用DiaSorin公司的LIAISON分析仪检测系统进行检测。[0120]结果展示在图3中,其中,可以确定相关系数R2为0.986,说明本发明的缀合物2能够有效地测定样品中的维生素D含量,检测结果与业内认可的试剂盒的检测结果一致。[0121]在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外,在不相互矛盾的情况下,本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。[0122]尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例,可以理解的是,上述实施例是示例性的,不能理解为对本发明的限制,本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

权利要求:1.一种化合物,其特征在于,具有下式所示的结构:其中,L表示连接臂,Ri、R2和R3分别独立地为氢基、羟基、烷氧基、烷基、C2〜3烯基或C2〜3炔基。2.根据权利要求1所述的化合物,其特征在于,所述化合物具有以下之一的结构:3.根据权利要求1所述的化合物,其特征在于,所述化合物具有以下之一的结构:4.一种缀合物,其特征在于,所述缀合物包括:权利要求1〜3任一项所述的化合物;以及标记分子,所述标记分子与所述化合物的连接臂相连。5.根据权利要求4所述的缀合物,其特征在于,所述标记分子为酶、吖啶酯或其类似物、吡啶钌或其类似物、鲁米诺或其类似物、异鲁米诺或其类似物、异硫氰酸荧光素或其类似物。6.根据权利要求5所述的缀合物,其特征在于,所述酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或乙酰蛋白酶。7.—种检测维生素D的试剂盒,其特征在于,包括权利要求4〜6任一项所述的缀合物。8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述维生素D为25-羟基维生素D。9.权利要求7或8任一项所述试剂盒在检测维生素D中的用途。10.根据权利要求9所述的用途,其特征在于,所述试剂盒是采用竞争结合法对维生素D进行检测。

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