申请/专利权人：贵州省草业研究所

申请日：2020-06-16

公开（公告）日：2020-09-22

公开（公告）号：CN111690710A

主分类号：C12Q1/24(20060101)

分类号：C12Q1/24(20060101);C12Q1/34(20060101);C12Q1/54(20060101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2020.10.20#实质审查的生效;2020.09.22#公开

摘要：本发明属于微生物检测技术领域，公开了一种牛粪纤维素降解菌降解能力的判定方法，所述牛粪纤维素降解菌降解能力的判定方法包括进行牛粪的预处理得到牛粪液；将牛粪液与培养基混合，振荡培养；离心，取上清液作为牛粪样品；取培养基置于厌氧试管中，通入氮气填满试管；吸取牛粪样品加入试管，晃匀；恒温水浴培养后冷藏；试管壁上附着物即牛粪纤维素降解菌菌株；将牛粪纤维素降解菌菌株置于发酵培养基中进行发酵培养，离心，取上清液，即为酶液；计算酶液的纤维素酶酶活。本发明对牛粪进行充分处理，最大程度保留牛粪中的纤维素降解菌；在纤维素降解菌提取后进行酶液获取，通过酶液活性实现牛粪纤维素降解菌降解能力判定，判定结果更准确。

主权项：1.一种牛粪纤维素降解菌降解能力的判定方法，其特征在于，所述牛粪纤维素降解菌降解能力的判定方法包括以下步骤：步骤一，进行牛粪的预处理，得到牛粪液；所述进行牛粪的预处理包括以下步骤：1.1除去牛粪表面沾染的青草、枝叶、泥沙；1.2对牛粪含水量进行测定，取含水量为65-75％的牛粪置于烧杯中；1.3将盛放牛粪的烧杯置于摇床上，室温下进行振荡培养，得到牛粪固液混合物；1.4将待检测的牛粪样品进行充分搅拌，搅拌至固液融合，得到牛粪液。步骤二，配制培养基，并将牛粪液与培养基按照一定比例进行混合，将混合物置于摇床上进行振荡培养；所述培养基配置方法包括：2.1将牛肉膏10g、琼脂20g加入1000ml蒸馏水中，得到基础培养基；2.2在基础培养基中添加葡萄糖5-10g、酵母膏5-8g，缓慢晃匀，得到混合培养基；2.3在混合培养基中缓慢加入预先配置好的盐溶液，得到培养基；步骤三，将振荡培养后的混合物进行离心，取上清液作为牛粪样品；所述离心方法包括：3.1将振荡培养后的混合物置于离心机内；控制离心转速变化，升速到2500rpm转速后停止升速；3.2升速结束后保持转速，离心3min；继续提升转速，控制转速变化，升速到4000rpm转速后停止升速；3.3升速结束后保持转速，离心6min，离心完成；控制转速变化，降速到3000rpm转速后后停止降速；3.4降速结束后保持转速不变一段时间；继续降速，控制转速变化，降速到1000rpm转速后后停止降速；降速结束后保持转速不变一段时间；3.5稳速结束后关闭离心机，使转子自由惯性停止；步骤四，取步骤二配制的培养基置于厌氧试管中，盖好盖子，通入氮气至氮气填满试管；步骤五，使用注射器吸取牛粪样品加入试管，晃匀；步骤六，将试管置于35-42℃环境下，恒温水浴培养4h，培养结束后置于5-8℃冷藏3h；步骤七，取出试管，开盖，刮取试管壁上的附着物，即为牛粪纤维素降解菌菌株；步骤八，将牛粪纤维素降解菌菌株置于发酵培养基中进行发酵培养，培养结束后进行发酵培养液的离心，取上清液，即为酶液；步骤九，计算酶液的纤维素酶酶活，即为牛粪纤维素降解菌降解能力。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 贵州省草业研究所 一种牛粪纤维素降解菌降解能力的判定方法

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