申请/专利权人：朗姿赛尔生物科技(广州)有限公司

申请日：2020-09-03

公开（公告）日：2020-10-13

公开（公告）号：CN111763655A

主分类号：C12N5/0735(20100101)

分类号：C12N5/0735(20100101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.01.08#授权;2020.10.30#实质审查的生效;2020.10.13#公开

摘要：本发明涉及干细胞领域，提供一种促进干细胞扩增的方法，用于解决干细胞增殖效率低的问题。本发明提供的一种促进干细胞扩增的方法，包括：采用差速贴壁法去除正常培养的胚胎干细胞的饲养层MEF细胞；将干细胞按照1×104个孔接种到多孔板上，在扩增培养基中培养；所述扩增培养基包括：高糖DMEM20~25质量份，非必需氨基酸10~12质量份，谷氨酰胺0.5~0.7质量份，β‑巯基乙醇0.001~0.05质量份，白血病抑制因子1000UmL，纳米层状双氢氧化物0.1~0.3质量份。纳米层状层氢氧化物可以在一定程度上维持细胞自我更新，成本低廉，材料合成便捷，可以有效的促进干细胞扩增。

主权项：1.一种促进干细胞扩增的方法，其特征在于，包括：采用差速贴壁法去除正常培养的胚胎干细胞的饲养层MEF细胞；将干细胞按照1×104个孔接种到多孔板上，在扩增培养基中培养；所述扩增培养基包括：高糖DMEM20~25质量份，非必需氨基酸10~12质量份，谷氨酰胺0.5~0.7质量份，β-巯基乙醇0.001~0.05质量份，白血病抑制因子1000UmL，纳米层状双氢氧化物0.1~0.3质量份；所述纳米层状双氢氧化物的制备方法为：取硝酸镍10~15质量份，硝酸铝20~40质量份，氢氧化钠60~80质量份，碳酸钠10~20质量份，氧化石墨烯5~10质量份，硝酸锌1~5质量份，尿素20~30质量份；将硝酸镍和硝酸铝溶解于1000~1200质量份的去离子水中得到混合盐溶液，将氢氧化钠和碳酸钠溶解于800~1000质量份的去离子水中得到混合碱液，将氧化石墨烯分散到1000~1200质量份的去离子水中，得到分散液；将混合碱液同分散液混合，超声分散1~2h，再加入混合盐溶液，超声分散10~20min，得到混合液；将混合液在80~100摄氏度下晶化24~36h，冷却至室温，过滤，洗涤至洗液呈中性，在40~50摄氏度下烘干得到复合物；将硝酸锌溶解于1000质量份去离子水中，加入尿素，搅拌均匀，加入复合物，超声分散30~60min，得到悬浮液，将悬浮液升温至80~100摄氏度，反应12~24h，冷却至室温得到固体产物；将固体产物在氮气气氛以600~700摄氏度焙烧6~10h，然后冷却至室温，得到纳米层状双氢氧化物。

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