【发明公布】一种促进干细胞扩增的方法_朗姿赛尔生物科技(广州)有限公司_202010912886.2 

申请/专利权人:朗姿赛尔生物科技(广州)有限公司

申请日:2020-09-03

发明/设计人:陈忠平

公开(公告)日:2020-10-13

代理机构:广州一锐专利代理有限公司

公开(公告)号:CN111763655A

代理人:董云

主分类号:C12N5/0735(20100101)

地址:510000 广东省广州市白云区机场路131号四楼D09房

分类号:C12N5/0735(20100101)

优先权:

专利状态码:在审-公开

法律状态:2020.10.13#公开

摘要:本发明涉及干细胞领域,提供一种促进干细胞扩增的方法,用于解决干细胞增殖效率低的问题。本发明提供的一种促进干细胞扩增的方法,包括:采用差速贴壁法去除正常培养的胚胎干细胞的饲养层MEF细胞;将干细胞按照1×104个孔接种到多孔板上,在扩增培养基中培养;所述扩增培养基包括:高糖DMEM20~25质量份,非必需氨基酸10~12质量份,谷氨酰胺0.5~0.7质量份,β‑巯基乙醇0.001~0.05质量份,白血病抑制因子1000UmL,纳米层状双氢氧化物0.1~0.3质量份。纳米层状层氢氧化物可以在一定程度上维持细胞自我更新,成本低廉,材料合成便捷,可以有效的促进干细胞扩增。

主权项:1.一种促进干细胞扩增的方法,其特征在于,包括:采用差速贴壁法去除正常培养的胚胎干细胞的饲养层MEF细胞;将干细胞按照1×104个孔接种到多孔板上,在扩增培养基中培养;所述扩增培养基包括:高糖DMEM20~25质量份,非必需氨基酸10~12质量份,谷氨酰胺0.5~0.7质量份,β-巯基乙醇0.001~0.05质量份,白血病抑制因子1000UmL,纳米层状双氢氧化物0.1~0.3质量份;所述纳米层状双氢氧化物的制备方法为:取硝酸镍10~15质量份,硝酸铝20~40质量份,氢氧化钠60~80质量份,碳酸钠10~20质量份,氧化石墨烯5~10质量份,硝酸锌1~5质量份,尿素20~30质量份;将硝酸镍和硝酸铝溶解于1000~1200质量份的去离子水中得到混合盐溶液,将氢氧化钠和碳酸钠溶解于800~1000质量份的去离子水中得到混合碱液,将氧化石墨烯分散到1000~1200质量份的去离子水中,得到分散液;将混合碱液同分散液混合,超声分散1~2h,再加入混合盐溶液,超声分散10~20min,得到混合液;将混合液在80~100摄氏度下晶化24~36h,冷却至室温,过滤,洗涤至洗液呈中性,在40~50摄氏度下烘干得到复合物;将硝酸锌溶解于1000质量份去离子水中,加入尿素,搅拌均匀,加入复合物,超声分散30~60min,得到悬浮液,将悬浮液升温至80~100摄氏度,反应12~24h,冷却至室温得到固体产物;将固体产物在氮气气氛以600~700摄氏度焙烧6~10h,然后冷却至室温,得到纳米层状双氢氧化物。

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