申请/专利权人：福建医科大学孟超肝胆医院(福州市传染病医院)

申请日：2020-04-29

公开（公告）日：2020-10-16

公开（公告）号：CN111778210A

主分类号：C12N5/0783(20100101)

分类号：C12N5/0783(20100101);B82Y40/00(20110101);C12N15/115(20100101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.11.04#授权;2020.11.03#实质审查的生效;2020.10.16#公开

摘要：本发明提供一种增强NK细胞对肿瘤细胞靶向杀伤力的培养方法。本发明通过制备透明质酸包埋的负载有细胞因子的介孔硅材料，并进一步吸附人工合成双特异性核酸适体，并利用其暴露的核酸适体，将材料标记在NK细胞表面，当其回输入肿瘤模型中，其肿瘤微酸性环境会导致双特异性核酸适体释放，同时，间质中的透明质酸酶可进一步降解介孔硅表面的透明质酸而释放内部的细胞因子，进而原位扩增肿瘤组织内浸润的NK细胞，并利用双特异性核酸适体提高对肝癌的靶向杀伤作用，其具有良好的临床转化潜力。

主权项：1.一种增强NK细胞对肿瘤细胞靶向杀伤力的培养方法，所述方法包括：1纳米材料制备：将介孔二氧化硅负载细胞因子后用透明质酸封闭孔道，再吸附CD16TLS11a双特异性核酸适配体，得到双特异性核酸适体修饰的纳米材料；所述CD16TLS11a双特异性核酸适配体由Apt-CD16和TLS11a两条脱氧核酸链构成；Apt-CD16的序列如下：5’-GGCCATGTGTATGTGGGCCACTGCGGGGGTCTATACGTGAGGAAGAAGTGGGCAGGTCCCCACATACTTTGTTGATCCTACCGTCGTT-3’TLS11a的序列如下：5’-CGACGGTAGGATCAATCATGGCCAGCATCCCCATGTGAACAATCGCATTGTGATTGTTACGGTTTCCGCCTCATGGACGTGCTG-3’2NK细胞激活：PBMC细胞重悬于NK细胞激活培养基中，加入辐射的工程化IL-21K562细胞共培养，培养过程中每天根据细胞数量添加培养液和细胞因子，培养12～14天收集获得激活的NK细胞；所述NK细胞激活培养基组成如下：庆大霉素10～200IUmL，重组人IL-250～1000IUmL，自体血浆1％～5％，溶剂为KBM581无血清培养基；3共培养：将激活的NK细胞与双特异性核酸适体修饰的纳米材料共培养30～60min。

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