申请/专利权人：广州中医药大学

申请日：2017-09-18

公开（公告）日：2020-10-16

公开（公告）号：CN107550954B

主分类号：A61K36/19(20060101)

分类号：A61K36/19(20060101);A61P25/16(20060101);A61P25/28(20060101);A61P9/10(20060101);A61P25/00(20060101);A61P21/00(20060101);A61P25/02(20060101);A61P27/02(20060101);A61P27/06(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.10.16#授权;2018.02.02#实质审查的生效;2018.01.09#公开

摘要：本发明涉及药物领域，具体而言，涉及一种鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用及药物。鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用，神经损伤由帕金森病、阿尔兹海默症、脑中风、tau蛋白病引起的。一种用于制备神经保护剂的药物，其包括鳄嘴花。鳄嘴花对中枢神经元逐渐发生变性、凋亡具有疗效。鳄嘴花的提取物或者药物具有保护神经元损伤，从而阻止或延迟神经细胞死亡的效果；能推迟发病时间或延缓病情的发展。鳄嘴花制备的药物能够细胞保持健康形态和增殖，抑制细胞凋亡；该药物对于神经细胞具有显著的保护作用。

主权项：1.鳄嘴花的提取物在制备治疗或预防阿尔兹海默病的药物中的应用；其特征在于，所述鳄嘴花的提取物主要通过以下步骤制得：将鳄嘴花采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液；其中，所述鳄嘴花与所述溶剂的重量比为1:5~20；所述溶剂为95%乙醇水溶液。

全文数据：鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用及药物技术领域[0001]本发明涉及药物领域，具体而言，涉及一种鳄嘴花在制备治疗或预防祌经损伤药物中的应用及药物。背景技术[0002]鳄嘴花为双子叶植物爵床科鳄嘴花属植物鳄嘴花ClinacanthusnutansBurm•f•Lindau的干燥地上部分，全年均可采收。主要功能为清热解毒、利湿、散瘀消肿、活血调经、止痛;主治黄疸、肝炎腹水、月经不调、跌打肿痛、骨折、风湿痹痛等。[0003]不同地区用于治疗疾病的侧重点不同。在云南，鳄嘴花为傣族民族药，傣医用其续筋接骨、治疗跌打损伤及强壮补骨;在两广和海南，鳄嘴花作为野生蔬菜，药食同用，常用于治疗肝炎及肝炎腹水、风湿痹痛、月经不调、跌打肿痛、骨折及钩端螺旋体病。鳄嘴花在其它国家用于治疗疾病种类也相差甚远，其中马来西亚用其治疗各种癌症，包括淋巴癌、肝癌、肺癌、肾癌、乳癌、鼻咽癌、子宫癌、卵巢癌、血癌、脑癌、前列腺癌等;印度尼西亚用其治疗各种肾炎、肾萎缩、肾衰竭及肾结石;而泰国则用其治疗疱疹、湿疹、皮瘆、虫及蛇咬伤，并已被列为泰国基本卫生保健药用植物。发明内容[0004]本发明的目的在于提供一种鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用及药物，其旨在提供一种用于制备治疗中枢神经变性疾病药剂的药物。[0005]本发明提供一种技术方案：[0006]鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用，神经损伤由帕金森病、阿尔兹海默症、脑中风、tau蛋白病引起的。[0007]进一步地，上述鳄嘴花的提取物作为神经保护剂的应用。鳄嘴花的提取物主要通过以下步骤制得:将鳄嘴花采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液;其中，鳄嘴花与溶剂的重量比为1:5〜20。[0008]进一步地，上述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3_丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。[0009]本发明还提供一种技术方案：[0010]一种用于制备神经保护剂的药物，其包括鳄嘴花。[0011]进一步地，上述药物主要通过以下步骤制得:将鳄嘴花采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液;其中，鳄嘴花与溶剂的重量比为1:5〜20。[0012]进一步地，上述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3_丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。[0013]进一步地，上述溶剂为质量分数为30-95%乙醇水溶液。[0014]进一步地，上述将鳄嘴花在30-90°C下超声提取15-60min。[0015]进一步地，上述分离得到提取液后还包括对提取液浓缩、千燥。[0016]进一步地，上述对提取液进行蒸发浓缩、减压浓缩或者膜浓缩。对浓缩后的提取液进行常压干燥、减压干燥、真空冷冻干燥或者喷雾干燥。[0017]本发明实施例提供的一种鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用及药物的有益效果是：[0018]鳄嘴花对中枢神经元逐渐发生变性、凋亡具有疗效。鳄嘴花的提取物或者药物具有保护神经元损伤，从而阻止或延迟神经细胞死亡的效果;能推迟发病时间或延缓病情的发展。鳄嘴花制备的药物能够细胞保持健康形态和增殖，抑制细胞凋亡;该药物对于神经细胞具有显著的保护作用。附图说明[0019]为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。[0020]图1显示了MTT法检测的实施例1提供的药物对L-glutamate诱导HT-22细胞的保护作用；[0021]图2显示了显微镜下观察的实施例1提供的药物对L-glutamate诱导HT-22细胞的保护作用。具体实施方式[0022]中枢神经变性疾病是一组以中枢神经系统神经元逐渐发生变性、凋亡所导致的神经退行性疾病或神经病症。其病因大多不明，发病机制和病理表现复杂，临床表现各异。[0023]中枢神经变性疾病包括帕金森病合并痴呆、太平洋关岛的阿尔茨海默、帕金森综合征等。目前来说，由于缺乏特异的生化、影像学和病理生理学特征，往往主要依靠临床医生的经验作出诊断。除少数疾病如帕金森病依靠药物或手术可能暂时改善临床症状外，对大多数疾病目前尚无特效的治疗方法。[0024]神经保护治疗是通过阻碍缺血级联反应涉及的一种或多种机制，在初始阶段保护缺血引起的半暗带神经元损伤，从而阻止或延迟神经细胞死亡。可以通过药物实现血液迅速回流入缺血组织，从而抑制缺血所引起的生化水平、代谢水平和细胞水平上的损害。[0025]例如缺血性中风的治疗策略主要包括溶栓治疗和神经保护治疗。溶栓药物阿替普酶rt-PA是首个也是迄今为止唯一被FDA批准用于治疗中风的溶栓药物。尽管rt-PA己经被证实能有效治疗急性缺血性中风，但其治疗时间窗窄，作用机理不明确，有出血风险，因此只有少数病人能够及时接受rt-PA的有效治疗。复方左旋多巴是治疗PD的首选药物，但患者长期服用会出现开关现象、剂末恶化等严重并发症。因此开展神经保护性治疗，可能推迟发病时间或延缓病情的发展。[0026]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。[0027]下面对本发明实施例的鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用及药物进行具体说明。[00¾]鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用，神经损伤由帕金森病、阿尔兹海默症、脑中风、tau蛋白病引起的。[0029]进一步地，上述鳄嘴花的提取物作为神经保护剂的应用。鳄嘴花的提取物主要通过以下步骤制得:将鳄嘴花采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液;其中，鳄嘴花与溶剂的重量比为1:5〜20。[0030]进一步地，上述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2_丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。[0031]鳄嘴花为双子叶植物爵床科鳄嘴花属植物鳄嘴花ClinacanthusnutanWBurm.f.Lindau的千燥地上部分，全年均可采收。鳄嘴花的主要功能为清热解毒、利湿、散瘀消肿、活血调经、止痛;主治黄疸、肝炎腹水、月经不调、跌打肿痛、骨折、风湿痹痛等。[0032]经过发明人的研究以及探讨发现，鳄嘴花在制备治疗、辅助治疗或预防神经退行性疾病的药物中具有较好的疗效。鳄嘴花对中枢神经元逐渐发生变性、凋亡具有疗效。[0033]需要说明的是，在本发明的实施例中，“神经保护剂”是指有助于保护神经细胞免受细胞损伤和或抵抗神经变性过程以及神经元功能损害的治疗剂或活性物质。[0034]进一步地，鳄嘴花应用于制备治疗或预防神经变性疾病的药物中。神经变性疾病包括帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿病、tau蛋白病如，额颞痴呆、皮层基底节变性、皮克氏病、进行性核上性麻痹）、威尔逊氏病、朊病毒病及其他痴呆包括血管性痴呆、肌萎缩侧索硬化ALS、急性中风脑中风引起的神经损伤及其他外伤性损伤;脑血管意外如，年龄相关性黄斑变性）；脑和脊髓外伤、周围神经病、视网膜病和青光眼。[0035]本发明还提供一种用于制备神经保护剂的药物，其包括鳄嘴花。[0036]进一步地，本实施例的药物主要通过以下步骤制得:将鳄嘴花采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液;其中，鳄嘴花与溶剂的重量比为1:5〜20。[0037]进一步地，上述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2_丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。[0038]具体地，上述溶剂为质量分数30-95%乙醇水溶液。在本实施例中，为质量分数95%的乙醇水溶液。[0039]具体地，采用超声提取，具体地将鳄嘴花在30-9TC下超声提取15-60min。[0040]进一步地，上述分离得到提取液后还包括对提取液浓缩、干燥。[0041]进一步地，上述对提取液进行蒸发浓缩、减压浓缩或者膜浓缩。具体地，采用减压浓缩。在本发明较佳的实施例中，采用旋转蒸发仪蒸发浓缩。[0042]对浓缩后的提取液进行常压干燥、减压干燥、真空冷冻干燥或者喷雾干燥。具体地，在本发明中采用减压干燥。[0043]鳄嘴花对中枢神经元逐渐发生变性、凋亡具有疗效。鳄嘴花的提取物或者药物具有保护神经元损伤，从而阻止或延迟神经细胞死亡的效果;能推迟发病时间或延缓病情的发展。鳄嘴花制备的药物能够细胞保持健康形态和增殖，抑制细胞凋亡;该药物对于神经细胞具有显著的保护作用。[0044]此外，在其他实施例中，该药物还包括药学上可接受的载体或辅料。L〇〇45]例如:稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、薦糖、氯化纳、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等;湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等;崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等;吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等;润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。[0046]此外，为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。如:葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等;粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等;崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。[0047]此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。[0048]进一步地，本发明实施例的药物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。[0049]此外，本发明实施例的药物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。[0050]承上所述，在给药过程中，可改变药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。[0051]以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。[0052]实施例1[0053]本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：[0054]称取鳄嘴花30.llg，置于三角瓶中，向三角瓶中加入300ml95%乙醇水溶液，于60°C超声提取30min，过滤，用旋转蒸发仪浓缩成浸膏状后置于蒸发皿中蒸干，于恒温烘箱内50°C烘至恒重。[0055]实施例2[0056]本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：[0057]称取鳄嘴花l〇g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入50ml30%乙醇水溶液，于30°C超声提取15min，过滤，减压浓缩成浸膏状后置于蒸发皿中蒸干，于恒温烘箱内（5〇°C烘至恒重。[0058]实施例3[0059]本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：[0060]称取鳄嘴花l〇g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入200ml6〇%1，2_丙二醇水溶液，于90°C超声提取60min，过滤，减压浓缩成浸膏状后真空冷冻干燥至恒重。[0061]实施例4[0062]本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：[0063]称取鳄嘴花l〇g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入l〇〇ml乙酸乙酯，于60°C超声提取45min，过滤，膜浓缩后减压干燥至恒重。[0064]实施例5[0065]本实施例提供一种药物，该药物主要由以下步骤制备：[0066]称取鳄嘴花l〇g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入l5〇ml水，于45°C超声提取6〇min，过滤，用旋转蒸发仪浓缩成浸膏状后置于蒸发皿中蒸干，于恒温烘箱内（5〇°C烘至恒重。[0067]试验例[0068]本试验例对实施例1得到的药物进行神经保护测试。[0069]1.HT-22神经细胞的培养[0070]将三批HT-22细胞用胰酶0.25%，lmL从中皿消化下来（lmin内），吹散成单细胞悬液，加入少量胎牛血清TOS100yL。lOOOrpm离心5min，去上清，将细胞沉淀分散在3mL完全培养基中，取lmL细胞悬液加入到24mL完全培养基中，来回颠倒10次混匀，取〇.lmL用于计数。稀释至适当的细胞浓度8X104cel1mL后，48孔板先加5〇此培养基，使培养基彻底分布于孔板边缘。种植在48孔板中（三批细胞三块板，1〇〇1^，8\104；£511111〇。边种边旋转离心管，种一半孔用力吹打细胞，使之均匀，同时让细胞悬液铺满孔板底部，全部种完后在显微镜下观察细胞分散是否均匀，十字摇匀使细胞在孔板底部分散均匀。放置24小时细胞融合度约为30〜40%用于实验。[0071]2.MTT法测试[0072]将实施例1中获得药物200yg分散于2mL完全培养基中，用于3X48孔板换液，做MTT实验。取种好细胞的48孔板，分为Control对照组），Glutamate谷氨酸组，NACN-acetylcysteineN-乙酰半胱氨酸），Tr〇l〇x水溶性维生素E组和样品组实施例1提供的药物组）。每组三个复孔，培养基换液，每孔200此，每次换液前，吹打培养基，使药物分散均匀。换液完37°C孵育lh后加入谷氨酸使终浓度达到3mM6yL。摇匀后放置在37°C培养24h。观察细胞形态，并检测细胞存活率MTT法），然后用20此MTT5mgmL避光37°C孵育2h，轻轻吸去液体，每孔加200uLDMS0,摇床5min摇匀。然后用多功能酶标仪计算490nm下各吸光值下面图中数据均为490nm下测得，损伤组细胞存活率约为Control组的20%。取三孔0D值，求平均值，减去空白DMS0的0D值，然后除以对照组的平均值标准化。三批细胞的MTT的0D值的平均值用SigmaPlotl2.5软件做统计差异。[0073]统计结果如图1所示，具体地，图1显示了MTT法检测的鳄嘴花提取物对L-glutamate诱导HT-22细胞的保护作用。图中“+”代表相应的试验组有相应的组分，代表相应的试验组没有相应的组分。其中，#P0.01，*#P〈0.001与谷氨酸组比较单因素方差分析，Dunnett法）Jroloxl〇yM作为阳性对照使用。[0074]由图1的结果显示，实施例1提供的药物对于HT-22神经细胞具有显著的保护作用。[0075]3.显微镜下观察的鳄嘴花提取物的保护作用[0076]实施例1提供的药物20ug分散于2mL完全培养基中，用于3X48孔板换液。取种好细胞的48孔板，分别是Control组，Glutamate组，GluGlutamate+NACN-acetylcysteine组，Glu+Trolox和Glu+样品组实施例1提供的药物组），每组三个复孔，培养基换液，每孔200UL，每次换液前，吹打培养基，使药物分散均匀。换液完37°C孵育lh后加入谷氨酸使终浓度达到3mM6iiL。摇匀后放置在37°C培养24h。最后在显微镜下观察细胞形态,并拍照，结果如图2所示。图2显示了显微镜下观察的鳄嘴花提取物对L-glutamate诱导HT-22细胞的保护作用。由图2可知，实施例1提供的药物可以使细胞保持健康形态和增殖，抑制了L-glutamateL-谷氨酸）引起的细胞凋亡。[0077]从本实验例可知，实施例1提供的药物能够细胞保持健康形态和增殖，抑制细胞凋亡;该药物对于HT-22神经细胞具有显著的保护作用。[0078]以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

权利要求：1.鳄嘴花在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用，其特征在于，所述神经损伤由帕金森病、阿尔兹海默症、脑中风、tau蛋白病引起的。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述鳄嘴花的提取物在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用；_所述鳄嘴花的提取物主要通过以下步骤制得:将鳄嘴花采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液;其中，所述鳄嘴花与所述溶剂的重量比为1:5〜20。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1,3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。4.一种用于制备神经保护剂的药物，其特征在于，所述药物包括鳄嘴花。5.根据权利要求4所述的用于制备神经保护剂的药物，其特征在于，所述药物主要通过以下步骤制得:将所述鳄嘴花采用溶剂进行提取，提取后分离得到提取液•,其中，所述鳄嘴花与所述溶剂的重量比为1:5〜20。6.根据权利要求5所述的用于制备神经保护剂的药物，其特征在于，所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、异丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2_丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一种或者多种。7.根据权利要求5所述的用于制备神经保护剂的药物，其特征在于，所述溶剂为质量分数为30-95%乙醇水溶液。8.根据权利要求5所述的用于制备神经保护剂的药物，其特征在于，将所述鳄嘴花在30-90°C下超声提取15-60min。9.根据权利要求5所述的用于制备神经保护剂的药物，其特征在于，分离得到所述提取液后还包括对所述提取液浓缩、干燥。10.根据权利要求9所述的用于制备神经保护剂的药物，其特征在于，对所述提取液进行蒸发浓缩、减压浓缩或者膜浓缩;对浓缩后的所述提取液进行常压干燥、减压干燥、真空冷冻干燥或者喷雾千燥。~

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