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【发明授权】一株嗜麦芽寡养单胞菌及其合成的广谱嗜麦芽菌素maltocin和应用_武汉大学_201711489586.2 

申请/专利权人:武汉大学

申请日:2017-12-30

公开(公告)日:2020-10-16

公开(公告)号:CN108587936B

主分类号:C12N1/20(20060101)

分类号:C12N1/20(20060101);C07K14/195(20060101);A61K38/16(20060101);A61P31/04(20060101);C12R1/01(20060101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2020.10.16#授权;2018.10.26#实质审查的生效;2018.09.28#公开

摘要:本发明属于微生物技术领域,具体涉及一株嗜麦芽寡养单胞菌及其合成的广谱嗜麦芽菌素maltocin和应用。所述嗜麦芽寡养单胞菌命名为嗜麦芽寡养单胞菌S16株,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCM2017431。本发明提供的嗜麦芽寡养单胞菌S16株是一株新的菌株,其在丝裂霉素C诱导下可以大量产生嗜麦芽菌素S16;所述嗜麦芽菌素S16具有较高的杀菌活性,杀菌谱广,不仅能杀灭大部分嗜麦芽寡养单胞菌,而且能杀灭大肠杆菌,并且对蛋白酶有抗性,在较高温度下比较稳定,具有良好的开发和应用前景。

主权项:1.一株产嗜麦芽菌素maltocin的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)S16,其特征在于,所述菌株保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCNO:M2017431。

全文数据:一株嗜麦芽寡养单胞菌及其合成的广谱嗜麦芽菌素maItoeiη和应用技术领域[0001]本发明属于微生物技术领域,具体涉及一株嗜麦芽寡养单胞菌及其合成的广谱嗜麦芽菌素maltocin和应用。背景技术[0002]近年来,随着抗生素的不合理使用,多重耐药菌(multi-drugresistantorganism,MDR0日益增多。国内主要地区临床分离菌对常用抗菌药物的敏感性和耐药性检测结果显示大肠杆菌^EscherichiacoIi是最多的临床分离菌株,达到20%左右,其中超过一半的大肠杆菌产超广谱β_内酰胺酶Extended-SpectrumP-Lactamase,ESBL。检测发现大肠杆菌对环丙沙星、庆大霉素、昵拉西林和甲氧苄啶一磺胺甲恶唑的耐药率均接近或高于50%。同时,对多种抗生素具有抗性的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia也日益成为医院感染的主要致病菌之一,其数量位于临床分离的不发酵糖革兰阴性杆菌菌株数量第三位。多重耐药菌对多种广谱抗菌药物耐药,导致其所致感染后可供选择的有效治疗药物非常有限。加上抗生素研究开发周期长,目前多重耐药菌给临床抗感染治疗带来了极大的挑战。为此,迫切需要采取有效措施来预防与控制多重耐药菌的感染,而高效安全的细菌素是目前被认为最有前景的抗生素替代物。[0003]细菌素是某些细菌在代谢过程中通过核糖体合成产生的具有抗菌活性的多肽、蛋白质或蛋白质复合物。细菌素不仅能选择性抑菌或杀菌,而且具备无毒、无残留、抗菌性强、无抗药性、不污染环境等传统抗生素没有的优势,因此随着抗生素耐药性问题的加剧,细菌素将在人类疾病防治、医药保健及食品防腐等方面体现巨大的应用潜力。尽管细菌素的自然资源丰富、种类繁多,国内外研究者对细菌素开展了较为广泛的研究。但因为细菌素的生产成本高、产量低和抑菌谱窄等原因,限制了其在实际中的应用,所以,目前工业化生产最为广泛的只有nisin。[0004]本实验室曾分离了嗜麦芽寡养单胞菌P28菌株产生的细菌素,称之为嗜麦芽菌素P28maltocinP28。嗜麦芽菌素P28是目前为止唯一报道的嗜麦芽寡养单胞菌所产的细菌素,是一种类似噬菌体尾部的细菌素。嗜麦芽菌素P28对高温和蛋白酶敏感,杀菌谱较窄,只能杀灭嗜麦芽寡养单胞菌,80株嗜麦芽寡养单胞菌受试菌株中只有36株对嗜麦芽菌素P28敏感,并且不能杀灭或抑制其它种菌株。发明内容[0005]本发明针对现有技术的不足,目的在于提供一株新的产嗜麦芽菌素maltocin的嗜麦芽寡养单胞菌。[0006]本发明的另一目的在于提供一种新型广谱嗜麦芽菌素maltocin。[0007]本发明的第三个目的在于提供上述新型广谱嗜麦芽菌素maltocin的合成基因簇序列。[0008]本发明的第四个目的在于提供上述广谱嗜麦芽菌素maltocin的应用。[0009]为实现上述发明目的,本发明采用的技术方案为:[0010]—株产嗜麦芽菌素maltocin的嗜麦芽寡养单胞菌,该菌株命名为嗜麦芽寡养单胞菌S16株(StenotrophomonasmaltophiliaS16株),保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:武汉大学,保藏编号为CCTCCM2017431,保藏日期是2017年7月21日。[0011]上述方案中,所述嗜麦芽寡养单胞菌S16株的菌落形态特征为:菌落淡黄色,形状为规则圆形、中央突起,细胞为杆状。嗜麦芽寡养单胞菌S16株生化特征是:还原硝酸盐为亚硝酸盐,不产生吲哚,水解七叶灵和明胶,可利用葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、苹果酸和柠檬酸,不能利用阿拉伯糖、甘露醇、葵酸、己二酸和苯乙酸。对嗜麦芽寡养单胞菌S16株的16SrRNA基因序列分析显示:嗜麦芽寡养单胞菌S16株与嗜麦芽寡养单胞菌P28株的同源性超过99%〇[0012]一种嗜麦芽菌素maltocin,其特征在于,所述嗜麦芽菌素maltocin是由权利要求1所述嗜麦芽寡养单胞菌合成、由如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列编码获得的的蛋白复合物,形态类似于肌尾噬菌体的尾部,命名为嗜麦芽菌素S16。[0013]上述嗜麦芽菌素maltocin通过如下方法获得:将嗜麦芽寡养单胞菌S16株接种至LB液体培养基培养至菌液OD6qq值为0.4〜0.6,加入丝裂霉素C后继续培养过夜;取发酵液,加入PEG8000和NaCl,混匀后4°C静置过夜,离心取沉淀;将沉淀悬浮于TE缓冲液中,经DEAE-纤维素离子交换柱层析后,得到嗜麦芽菌素maltocin。[0014]含上述嗜麦芽菌素maltocin的药物组合物。[0015]本发明中,所述嗜麦芽菌素S16对嗜麦芽寡养单胞菌的杀菌率超过72%,并能杀灭部分检测的大肠杆菌。而已知的嗜麦芽菌素P28对嗜麦芽寡养单胞菌的杀菌率为45%,不能杀灭除嗜麦芽寡养单胞菌外其它种的细菌。本发明所述嗜麦芽菌素S16能杀灭嗜麦芽寡养单胞菌P28和S21株,而已知的嗜麦芽菌素P28不能杀灭这两株菌,这表明嗜麦芽菌素S16是一种新的广谱细菌素。[0016]本发明所述嗜麦芽菌素S16对蛋白酶有抗性,用胰蛋白酶trypsin,终浓度0.5mg11^或者蛋白酶1?代以%1,0.21^11^作用1小时都没有降低嗜麦芽菌素516的杀菌活力,而在相同条件下,胰蛋白酶可使已知的嗜麦芽菌素P28的杀菌活力降到10%以下,蛋白酶K则完全破坏了其杀菌活力。[0017]本发明中所述嗜麦芽菌素S16在较高温度下比较稳定,在45°C及以下温度处理时,其杀菌活力没有变化,温度为50°C时其杀菌活力才会降低,直到60°C时杀菌活力才会完全丧失。而已知的嗜麦芽菌素P28在45°C时杀菌活力就会大幅降低,到50°C时则完全没有杀菌活力。[0018]上述嗜麦芽菌素maltocin的合成基因簇序列,全长19658bp,与嗜麦芽菌素P28基因簇的核苷酸一致性为75.8%,所述合成基因簇序列具有:[0019]1如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列;或[0020]2如SEQIDNo.2所示核苷酸序列经取代、缺失和或增加一个或几个核苷酸;或[0021]3在严格条件下与1限定的核苷酸序列杂交的DNA序列。[0022]上述嗜麦芽菌素maltocin在制备抑制或杀灭革兰氏阴性菌药物方面的应用;所述革兰氏阴性菌为嗜麦芽寡养单胞菌和或大肠杆菌。[0023]本发明的有益效果如下:(1本发明提供的嗜麦芽寡养单胞菌S16株是一株新的菌株,其在丝裂霉素C诱导下可以大量产生细菌素;(2本发明的嗜麦芽菌素S16具有较高的杀菌活性,杀菌谱广,不仅能杀灭大部分嗜麦芽寡养单胞菌,还能杀灭大肠杆菌,并且所述嗜麦芽菌素S16对蛋白酶有抗性,稳定性好;3本发明提供了嗜麦芽菌素S16的合成基因簇序列,在此基础上可以构建多种专一的杀菌剂,具有良好的开发和应用前景。附图说明[0024]图1为实施例1中嗜麦芽寡养单胞菌菌株16SrDNA序列系统发育树图。[0025]图2为实施例2中嗜麦芽菌素S16杀菌活性图(以S21株为指示菌)。[0026]图3为实施例2中嗜麦芽菌素S16的电镜图(图中标尺为IOOnm。具体实施方式[0027]为了更好地理解本发明,下面结合实施例进一步阐明本发明的内容,但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。[0028]本发明中所涉及的微生物菌种情况如下:嗜麦芽寡养单胞菌S16株StenotrophomonasmaltophiliaS16株),保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCM2017431。[0029]对照菌株-嗜麦芽寡养单胞菌P28株,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCAB204026,任何符合要求的研究者可向中国典型培养物保藏中心索取。[0030]实施例1菌种的筛选及鉴定过程[0031]1.1嗜麦芽寡养单胞菌S16株的筛选[0032]1.1.1将嗜麦芽寡养单胞菌单菌落接入5mL液体LB培养基中,30°C、200rpm过夜培养;[0033]1.1.2取IOOyL过夜培养菌液与4.5mL半固体培养基混匀,倒入LB平板中,制备双层平板;[0034]1.1.3按1%接种量将步骤1.1.1中过夜培养菌液转接到新鲜的液体LB培养基中,培养3h之后,加入丝裂霉素C终浓度0.5ygmL,继续培养过夜;取ImL菌液于4°C、IOOOOrpm离心Imin,取上清,过滤;[0035]1.1.4取2.5yL上述培养物上清滴在双层平板上,室温放置过夜后观察双层平板上是否形成透明圈;[0036]1.1.5检测能形成抑菌圈的培养物上清中的核酸。根据核酸检测结果筛选出14株产生细菌素的嗜麦芽寡养单胞菌。[0037]本发明人将可产广谱细菌素的嗜麦芽寡养单胞菌S16株(StenotrophomonasmaltophiliaS16株保藏于湖北省武汉市武汉大学校内的中国典型培养物中心,保藏编号为CCTCCM2017431,保藏日期是2017年7月21日。[0038]1.2嗜麦芽寡养单胞菌S16株的鉴定:通过形态特征观察、生理生化测定以及16SrDNA序列分析结果对S16菌株进行鉴定。在鉴定中,本实验选择嗜麦芽寡养单胞菌P28株CCTCCAB204026和KAC11358株CCTCCAB2012001作为对照菌株。嗜麦芽寡养单胞菌P28和KACl1358分别登载于中国典型培养物保藏中心索取目录,处于公开状态,科学工作者可向保藏中心索取。[0039]1.2.1嗜麦芽寡养单胞菌S16株形态特征观察:将菌种分离纯化,然后划线接种LB平板,温度为30°C的条件下培养24h;菌落淡黄色、形状为规则圆形,表面湿润、突起,培养较长时间后,菌落颜色加深;菌体为杆状,革兰氏染色为阴性。[0040]1.2.2嗜麦芽寡养单胞菌S16株生理生化特征[0041]用API20NE非肠道革兰氏阴性菌鉴定系统)对S16菌株进行生理生化测定,结果见表1。[0042]表1菌株S16的API20NE生化实验结果[0043][0044]注:+:阳性;阴性[0045]目的菌株能够水解七叶灵和明胶,还原硝酸盐为亚硝酸盐,不产生吲哚;可利用葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、苹果酸和柠檬酸,不能利用阿拉伯糖、甘露醇、葵酸、己二酸和苯乙酸。[0046]1.2.3通过163扣嫩序列分析进行系统发育地位鉴定[0047]用细菌基因组DNA提取试剂盒(TaKaRa公司)提取嗜麦芽寡养单胞菌S16株的总DNA,以总DNA为模板,用引物27F5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3’)和1492R5’TACGGCTACCTTGTTACGACTT3’)进行PCR扩增。按以下的反应条件共进行30个循环:94°C预变性5min,94°C变性3〇8,54°:退火3〇8,72°:延伸11^113〇8,30个循环后,72°:延伸1〇1^11。所得PCR产物送上海生工生物工程股份有限公司测序。[0048]获得的菌株的16SrDNA序列如下所示,同时该序列记录在序列表SEQIDNO.1中。[0049]gagtttgatcctggctcagagtgaacgctggcggtaggcctaacacatgcaagtcgaacggcagcacagtaagagcttgctcttatgggtggcgagtggcggacgggtgaggaatacatcggaatctactttttcgtgggggataacgtagggaaacttacgctaataccgcatacgacctacgggtgaaagcaggggatcttcggaccttgcgcgattgaatgagccgatgtcggattagctagttggcggggtaaaggcccaccaaggcgacgatccgtagctggtctgagaggatgatcagccacactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatgggcgcaagcctgatccagccataccgcgtgggtgaagaaggccttcgggttgtaaagcccttttgttgggaaagaaatccagctggttaatacccggttgggatgacggtacccaaagaataagcaccggctaacttcgtgccagcagccgcggtaatacgaagggtgcaagcgttactcggaattactgggcgtaaagcgtgcgtaggtggtcgtttaagtctgttgtgaaagccctgggctcaacctgggaactgcagtggaaactggacgactagagtgtggtagagggtagcggaattcctggtgtagcagtgaaatgcgtagagatcaggaggaacatccatggcgaaggcagctacctggaccaacactgacactgaggcacgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccctaaacgatgcgaactggatgttgggtgcaatttggcacgcagtatcgaagctaacgcgttaagttcgccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagtatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctggccttgacatgtcgagaactttccagagatggattggtgccttcgggaactcgaacacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgtccttagttgccagcacgtaatggtgggaactctaaggagaccgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatggcccttacggccagggctacacacgtactacaatggtagggacagagggctgcaagccggcgacggtaagccaatcccagaaaccctatctcagtccggattggagtctgcaactcgactccatgaagtcggaatcgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagtttgttgcaccagaagcaggtagcttaaccttcgggagggcgcttgccacggtgtggccgatgactggggtgaagtcgtaacaaggtagccgta[0050]1.2.4构建系统发育树:[0051]将测定的S16菌株的16SrDNA序列与GenBank核酸数据库中的16SrDNA序列进行比对分析,采用ClustalX软件进行匹配排列(align,用MEGA5.0软件中的邻接Neighborjoining分析法推演系统发生关系,构建系统发育树如图1所示;[0052]1.2.5通过菌体的形态特征观察、菌株生理生化测定、16SrDNA扩增序列和构建系统发育树,鉴定S16菌株为嗜麦芽寡养单胞菌。[0053]实施例2嗜麦芽菌素的获得及鉴定[0054]2.1嗜麦芽菌素的获得[0055]将嗜麦芽寡养单胞菌在IOOmLLB液体培养基中30°C培养至菌液㈤600值为0.5时加入丝裂霉素C0.5ygmL,200rpm振荡继续培养12-14小时。培养的菌液4°C,10000g离心lOmin,吸取上清,并加入PEG80004%,mv和NaCl3%,mv,混匀后4°C静置过夜。4°C,IOOOOg离心30min,将沉淀悬浮于ImLTE缓冲液中,过滤后即得到嗜麦芽菌素提取物。[0056]将嗜麦芽菌素粗提液上样于DEAE-纤维素离子交换层析柱中,依次用溶于0.OlM磷酸缓冲液PH6.8非线性梯度的NaCl溶液0,0.3,0.4及0.7M洗脱,得到纯化样品。[0057]2.2嗜麦芽菌素杀菌活性检测及电镜观察[0058]用TE缓冲液对嗜麦芽菌素样品进行2倍梯度稀释,依次取2.5yL稀释液滴在双层平板上,30°C培养后观察抑菌圈,如图2所示。嗜麦芽菌素的杀菌活性大小为可以形成肉眼可见,抑菌圈的最大稀释倍数X400,单位为AUmL。检测结果显示,嗜麦芽菌素S16样品杀菌活性为216X400AUmL,嗜麦芽菌素P28样品杀菌活性为211X400AUmL〇[0059]取嗜麦芽菌素S16样品滴到铜网上,静置3min后滴加2%mv的磷钨酸盐溶液,静置2min,在JEM_1400plus透射电子显微镜(日本JEOL公司)下观察,样品图像见图3所不。从图3可以看出:嗜麦芽菌素S16呈长杆状,大小约120X20nm,与已知的嗜麦芽菌素P28类似。[0060]实施例3嗜麦芽菌素在不同温度下杀菌活性的变化[0061]将嗜麦芽菌素S16样品分别在不同温度下保温lOmin,之后迅速置于冰中冷却,接着用TE缓冲液2倍梯度稀释样品,取2.5yL稀释液依次滴在双层平板上,30°C培养后观察抑菌圈,计算嗜麦芽菌素的杀菌活性。[0062]表2嗜麦芽菌素经不同温度处理后的剩余杀菌活性(X400AUmL[0065]注:嗜麦芽菌素16指示菌株为嗜麦芽寡养单胞菌S21株;[0066]嗜麦芽菌素P28指示菌株为嗜麦芽寡养单胞菌c6株。[0067]表2的结果显示,温度为45°C及45°C以下时对嗜麦芽菌素S16的杀菌活性没有影响,当温度升到50°C时,其杀菌活性大幅降低,60°C时杀菌活性完全丧失。而嗜麦芽菌素P28在温度为45°C时杀菌活性就会大幅降低,50°C时杀菌活性则完全丧失。结果说明嗜麦芽菌素S16的稳定性受温度影响较小。[0068]实施例4嗜麦芽菌素对蛋白酶的敏感性[0069]在嗜麦芽菌素样品中分别加入胰蛋白酶(trypsin,终浓度0.5mgmL和蛋白酶KproteaseK,终浓度0.2mgmL,37°C保温Ih之后进行杀菌活性检测。嗜麦芽菌素S16样品杀菌活性为216X400AUmL,嗜麦芽菌素P28样品杀菌活性为211X400AUmL。[0070]表3嗜麦芽菌素经蛋白酶处理后的剩余杀菌活性(X400AUmL[0071][0072]表3结果显示,嗜麦芽菌素S16是抗蛋白酶作用的,不管是胰蛋白酶0.5mgmL还是蛋白酶K0.2mgmL作用1小时都没有降低嗜麦芽菌素S16的杀菌活力,进一步提高ProteaseK浓度到lmgmL,其活性才大幅度下降。而嗜麦芽菌素P28在胰蛋白酶作用下其杀菌活力降低到10%以下,在蛋白酶K作用下则完全失去了杀菌活性。结果说明嗜麦芽菌素S16具有较好的热稳定性,并有蛋白酶抗性。是一种具有应用潜力的一种生物制剂。[0073]实施例5最低抑菌浓度的检测[0074]最低抑菌浓度的检测:首先取活化好的嗜麦芽寡养单胞菌S21菌株接种至5mLLB液体培养基中,200rpm,30°C培养至㈤600值为0.5,接着用LB液体培养基将菌液稀释10倍,备用;在96孔板中用LB液体培养基2倍梯度稀释嗜麦芽菌素S16样品,每个孔中溶液体积为50μU最后一梯度弃去50yL。另设对照,在对照孔中加入50yLLB;然后在样品孔及对照孔中均加入200yL稀释菌液,混匀后30°C静置培养;6h后取出96孔板,用酶标仪检测㈤595值,能够完全抑制嗜麦芽寡养单胞菌S21菌株生长的嗜麦芽菌素S16最低浓度即为嗜麦芽菌素S16的最低抑菌浓度值。三次重复实验,每次三个重复,测定嗜麦芽菌素S16的最低抑菌浓度值为5120AUmL〇[0075]实施例6嗜麦芽菌素对嗜麦芽寡养单胞菌和大肠杆菌的杀灭作用[0076]以86株嗜麦芽寡养单胞菌为受试菌,用双层平板法检测到有62株嗜麦芽寡养单胞菌对嗜麦芽菌素S16敏感。说明嗜麦芽菌素S16杀菌谱覆盖了72%的嗜麦芽寡养单胞菌受试菌,远大于嗜麦芽菌素P28的45%杀菌率。[0077]用表4中所列大肠杆菌作为受试菌,检测了嗜麦芽菌素S16对这些菌株的杀灭作用,同时以嗜麦芽菌素P28和大肠杆菌T4噬菌体作为对照,结果见表4所示。表4结果说明了:嗜麦芽菌素S16不仅可以杀灭与产生菌同种的嗜麦芽寡养单胞菌,而且可以杀灭与产生菌无亲缘关系的大肠杆菌,但是已知的嗜麦芽菌素P28只能杀灭嗜麦芽寡养单胞菌。[0078]表4嗜麦芽菌素S16、嗜麦芽菌素P28和T4噬菌体的杀灭作用[0079][0080]注:+能杀灭;-没有作用。[0081]实施例7嗜麦芽菌素S16的基因簇[0082]嗜麦芽菌素S16有2个主要结构蛋白,分别是尾鞘蛋白和尾管蛋白,因此SDS-PAGE电泳分析嗜麦芽菌素S16样品时可以显示有两条主要蛋白条带。将这两条蛋白条带送至中科新生命生物科技公司进行N-端测序分析。分析表明这2种蛋白的N-端序列分别是MAEFLH和MARKIR,依据已知的这2段氨基酸序列设计了一对PCR引物,以嗜麦芽寡养单胞菌S16菌株总DNA为模板,扩增得到的DNA片段序列经BLAST比对发现与嗜麦芽寡养单胞菌ISMMS2菌株基因组GenBankno.CP011305中一段序列的核苷酸一致性达到了95%,预测编码产物属于Phage_sheath_l超家族蛋白,其氨基酸序列与嗜麦芽菌素P28尾鞘蛋白的一致性为87.8%。为了克隆与嗜麦芽菌素S16合成相关的其它基因,依据已克隆的DNA序列以及IS匪S2菌株基因组相关序列设计了一系列引物,通过PCR扩增获得了完整的合成嗜麦芽菌素S16的基因簇,大小为19.6kb,该序列记录在序列表SEQIDNO.2中。嗜麦芽菌素S16基因簇DNA序列与嗜麦芽菌素P28基因簇GenBankno.KC787694的核苷酸一致性是76.7%,与ISMMS2菌株基因组中相关序列的核苷酸一致性为74.7%。嗜麦芽菌素S16基因簇预测有23个基因,这些基因的排列与嗜麦芽菌素P28基因簇中的基因排列完全一致,但是各个预测蛋白的同源性则差异较大,其中嗜麦芽菌素S16与嗜麦芽菌素P28尾鞘蛋白的氨基酸一致性为87.8%,分子伴侣蛋白的氨基酸一致性则仅为15.7%。序列分析结果表明嗜麦芽菌素S16与嗜麦芽菌素P28不同,是一种新的细菌素。[0083]显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例,而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。

权利要求:1.一株产嗜麦芽菌素maltoein的嗜麦芽寡养单胞菌,其特征在于,所述嗜麦芽寡养单胞菌命名为嗜麦芽寡养单胞菌S16株,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCCM2017431。2.—种嗜麦芽菌素maltocin,其特征在于,所述嗜麦芽菌素maltocin是由权利要求1所述嗜麦芽寡养单胞菌合成、由如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列编码获得的的蛋白复合物,形态类似于肌尾噬菌体的尾部,命名为嗜麦芽菌素S16。3.含权利要求2所述嗜麦芽菌素maltocin的药物组合物。4.权利要求2所述嗜麦芽菌素maltocin的合成基因簇序列,其特征在于,所述合成基因簇序列具有:如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列;或如SEQIDNo.2所示核苷酸序列经取代、缺失和或增加一个或几个核苷酸;或3在严格条件下与1限定的核苷酸序列杂交的DNA序列。5.权利要求2所述嗜麦芽菌素maltocin在制备抑制或杀灭革兰氏阴性菌药物方面的应用。6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述革兰氏阴性菌为嗜麦芽寡养单胞菌和或大肠杆菌。

百度查询: 武汉大学 一株嗜麦芽寡养单胞菌及其合成的广谱嗜麦芽菌素maltocin和应用

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