申请/专利权人：中国农业科学院生物技术研究所

申请日：2018-02-06

公开（公告）日：2020-10-23

公开（公告）号：CN108396012B

主分类号：C12N5/20(20060101)

分类号：C12N5/20(20060101);C07K16/12(20060101);G01N33/577(20060101);G01N33/68(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.10.23#授权;2018.09.07#实质审查的生效;2018.08.14#公开

摘要：本发明提供了一种单克隆抗体，该抗体由保藏编号为CGMCCNO.12268的杂交瘤细胞分泌得到，同时提供了该抗体在检测转IrrE的转基因农作物中的用途以及一种检测转IrrE的转基因农作物的方法。本发明的单克隆抗体能够用于抗旱耐盐胁迫调控蛋白IrrE的WESTERNBLOT检测，可检测到重组IrrE蛋白及转IrrE作物种子；对7种不同来源的各种非IrrE转基因作物也不呈现交叉反应。

主权项：1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.12268。

全文数据：单克隆抗体1DB4在检测IrrE转基因农作物中的应用技术领域[0001]本发明涉及农业生物技术领域，具体地，涉及一种杂交瘤细胞株、一种单克隆抗体及其在检测转IrrE的转基因农作物中的用途和检测转IrrE的转基因农作物的方法。背景技术[0002]耐福射异常球菌Deinococcusradiodurans被公认为是迄今发现的具有最强电离辐射抗性的细菌菌株。这种非孢子形成的细菌对其损伤基因组的激活修复，使其能够在极端剂量电离辐射中得以生存，并且不会受到致命损伤以及基因突变。耐辐射异常球菌拥有的修复机制使其对电离辐射的抗性比大肠杆菌高200倍以上。耐辐射异常球菌并不是仅被动的保护细胞抵抗电离辐射，同时还具有异乎寻常的准确DNA损伤修复能力。耐辐射异常球菌对多种形式的氧化胁迫具有很高的抗性。耐辐射异常球菌对于长期的干旱胁迫具有极高的抗性。相对湿度小于5%干旱环境处理6周并不能对耐辐射异常球菌的生存能力产生影响，耐辐射异常球菌Rl经过这样的干旱处理细胞生存力仅丧失15%。甚至有相关报道指出将耐辐射异常球菌进行干旱处理6年，菌体仍保留10%的生存力。这一存活效率对于不形成孢子的细菌来说非比寻常。[0003]irrE基因位于耐辐射异常球菌基因组1号染色体上，ORF编号为DR0167。基因全长987-bp，编码一个由328个氨基酸组成的35kDa蛋白。在已有的数据库中并未发现IrrE蛋白的类似蛋白，鉴定其是异常球菌属特异蛋白。近年来研究发现，耐辐射异常球菌中irrE基因是一个特有的、极其重要的DNA修复保护途径的开关基因，对DNA损伤修复起重要的作用。研究认为irrE基因是一种新型的负责极端辐射抗性的启动基因，在各种DNA损伤修复和保护辐射胁迫反应的途径中起中心调控作用。同时，将该基因在大肠杆菌中表达能显著提高其辐射抗性以及清除氧自由基的能力，而且irrE基因在大肠杆菌中表达显著提高了菌株的高渗、高盐、干旱等抗性。转入irrE基因的大肠杆菌和油菜具有极高的耐盐能力，因此该基因在培育抗旱耐盐新品种作物上具有广泛的应用前景[0004]随着社会的进步，越来越多的基于转基因优良特性的转基因作物商业化种植被国家批准，由此可能带来的食品和环境安全问题引起了人们的高度重视。对转基因作物或转基因食品的检测和鉴定不仅是相关法规的必然要求，也是满足公众知情权的必要技术。因此，建立有效、敏感、快速、准确的检测方法，既是转基因安全性评价的重要研究内容，也是进一步加强我国在转基因作物和产品监管方面的重要技术保障。[0005]在转基因植物的研制开发或在对转基因产品进行筛选或安全性评价时，往往需要对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。而单克隆抗体的使用是实施免疫学检测技术的必要条件，高敏感性和特异性的单克隆抗体则是进一步优化反应的重要保证。发明内容[0006]本发明的目的是提供一种较高的敏感度和特异性的抗IrrE蛋白的单克隆抗体。[0007]为了实现上述目的，一方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.12268。[0008]再一方面，本发明还提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.12268的杂交瘤细胞株产生。[0009]再一方面，本发明还提供了如上所述的单克隆抗体在检测转IrrE的转基因农作物中的用途。[0010]另一方面，本发明还提供了一种检测转IrrE的转基因农作物的方法，其中，该方法包括如下步骤:S1、从待检测的农作物中提取全蛋白；S2、对所述全蛋白使用如上所述的单克隆抗体进行免疫杂交;S3、如果免疫杂交结果中出现IrrE的阳性条带，则指示待检测的农作物为转IrrE的转基因农作物。[0011]通过上述技术方案，本发明能够通过WESTERNBLOT方法对IrrE蛋白进行检测，并且对7种不同来源的各种非IrrE转基因作物也不呈现交叉反应。[0012]本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。[0013]生物材料保藏[0014]分泌本发明单克隆抗体1DB4的杂交瘤细胞株由发明人自行融合筛选得到的，其保藏编号为CGMCCNO.12268,保藏日期为2016年04月07日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为抗IrrE单克隆抗体杂交瘤细胞株。附图说明[0015]附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：[0016]图1是实施例1中His-TagIrrE融合蛋白的表达与纯化结果图。[0017]图2是实施例2中单克隆抗体亲和层析纯化的结果图。[0018]图3是实施例2中单克隆抗体1DB4低倍稀释应用在WesternBlot检测里的结果图。具体实施方式[0019]以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。[0020]一方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.12268。[0021]再一方面，本发明还提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.12268的杂交瘤细胞株产生。[0022]其中，由保藏编号为CGMCCNO.12268的杂交瘤细胞株产生单克隆抗体的方法可以为本领域常规的方法，例如小鼠腹水法。[0023]再一方面，本发明还提供了如上所述的单克隆抗体在检测转IrrE的转基因农作物中的用途。[0024]其中，所述IrrE蛋白是指IrrE基因所编码的蛋白，IrrE基因是指NCBIGeneID为1798483的基因（基因编号:DR_0167。[0025]其中，可以使用本领域常规的蛋白免疫检测方法将如上所述的单克隆抗体用于检测转IrrE基因农作物。例如，可以从待检测的农作物中提取全蛋白，然后用免疫杂交WESTERNBLOT的方法进行检测，如果待检测的农作物的全蛋白用如上所述的单克隆抗体进行免疫杂交后出现IrrE的阳性条带，则指示待检测的农作物为转IrrE的转基因农作物。[0026]可选地，其中，所述农作物为花椰菜、油菜、棉花、玉米、水稻或大豆。[0027]另一方面，本发明还提供了一种检测转IrrE的转基因农作物的方法，其中，该方法包括如下步骤:S1、从待检测的农作物中提取全蛋白；S2、对所述全蛋白使用如上所述的单克隆抗体进行免疫杂交;S3、如果免疫杂交结果中出现IrrE的阳性条带，则指示待检测的农作物为转IrrE的转基因农作物。[0028]在如上所述的方法中，可选地，所述农作物为花椰菜、油菜、棉花、玉米、水稻或大豆。[0029]以下，通过实施例进一步详细说明本发明。以下实施例中，所用的试剂均为商购获得。[0030]实施例1[0031]IrrE蛋白的诱导表达与纯化。[0032]根据已公布的耐辐射异常球菌基因组序列信息，设计特异性引物扩增目的基因片段。利用天根细菌基因组提取试剂盒提取耐辐射异常球菌基因组DNA。以提取和纯化后的耐辐射异常球菌基因组DNA为模板，利用特异性引物IrrEFIrrEI?进行PCR反应，扩增耐辐射异常球菌IrrE基因序列，PCR反应中利用高保真聚合酶进行扩增，以确保DNA片段的准确性。PCR所用的引物为IrrE⑻：5’-CACAGGAGGACCCCATATGCCCAGTGC-3’（SEQIDN0·l和IrrE⑻：5’-ACCAAGCTTAGTTCACTGTG-3’（SEQIDN0.2。[0033]PCR产物上下游分别含有NdeI和HindIII限制性内切酶酶切位点。将获得的PCR产物纯化回收后，利用限制性内切酶NdeI和HindIII进行双酶切消化。同样的利用限制性内切酶NdeI和HindIII进行双酶切消化大肠杆菌高表达载体pET28a。将上述酶切产物进行纯化回收，在T4DNA连接酶作用下进行连接，连接产物通过热激转化进入常用蛋白表达宿主菌株BL21DE3中，并将重组菌株涂布于含有卡那霉素的LB固体培养基上。挑取若干单菌落按顺序转接同样的抗性平板，并同时转接含有抗生素的LB液体培养基中培养，提取菌体中含有的质粒DNA进行酶切和PCR验证;实验中同样利用菌落PCR技术对重组菌株进行验证。得到的正确重组质粒PET-IrrE经过DNA测序做进一步验证。测序结果显示IrrE基因的编码序列如SEQIDNO.3所示，其编码的蛋白氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。[0034]SEQIDN0.4为：MPSANVSPPCPSGVRGGGMGPKAKAEASKPHPQIPVKLPFVTAPDALAAAKARMRDLAAAYVAALPGRDTHSLMAGVPGVDLKFMPLGWRDGAFDPEHNVILINSAARPERQRFTLAHEIGHAILLGDDDLLSDIHDAYEGERLEQVIETLCNVAAAAILMPEPVIAEMLERFGPTGRALAELAKRAEVSASSALYALTEQTPVPVIYAVCAPGKPPREQAASDEDAGPSTEKVLTVRASSSTRGVKYTLASGTPVPADHPAALALATGMEVREESYVPFRSGRKMKAEVDAYPSRGIVAVSFEFDPARLGRKDSEQADRDEPQDAAQ;具体参见序列表。[0035]SEQIDN0.3为：ATGCCCAGTGCCAACGTCAGCCCCCCTTGCCCCTCTGGGGTAAGGGGCGGGGGGATGGGGCCAAAAGCTAAAGCTGAAGCCTCCAAGCCCCACCCCCAAATCCCTGTTAAGCTCCCATTCGTGACCGCCCCCGACGCCCTCGCCGCCGCCAAAGCCAGGATGCGCGACCTGGCGGCGGCCTACGTGGCGGCCCTGCCCGGACGCGACACCCACAGCCTGATGGCGGGGGTGCCCGGCGTAGACCTCAAATTCATGCCGCTCGGCTGGCGCGACGGGGCGTTCGACCCCGAGCACAACGTCATCCTCATCAACTCGGCGGCCCGCCCCGAACGCCAGCGCTTCACCCTCGCCCACGAAATCGGGCACGCGATTTTACTCGGCGACGACGACCTGCTCTCCGACATCCACGACGCCTACGAGGGCGAGCGGCTCGAACAGGTCATCGAAACGCTGTGCAACGTGGCGGCGGCGGCGATTTTGATGCCCGAACCCGTCATCGCGGAAATGCTGGAACGCTTCGGCCCCACCGGGCGCGCCCTCGCCGAACTCGCCAAGCGGGCCGAAGTCAGCGCGTCGTCGGCGCTCTACGCCCTGACCGAGCAGACCCCGGTGCCCGTCATCTACGCGGTCTGTGCGCCGGGCAAGCCTCCGCGTGAGCAGGCCGCAAGCGACGAGGACGCTGGCCCAAGCACAGAAAAAGTCCTGACGGTCCGCGCCAGCAGCTCGACGCGGGGCGTCAAGTACACCCTGGCGAGCGGCACGCCGGTACCCGCCGACCACCCGGCGGCGCTTGCCCTCGCCACGGGCATGGAAGTGCGCGAGGAAAGCTACGTGCCCTTTCGCTCGGGCCGGAAAATGAAGGCGGAGGTGGACGCCTACCCGTCGCGCGGCATCGTGGCCGTCAGTTTCGAGTTCGACCCCGCCCGCCTGGGCCGCAAGGACAGCGAGCAGGCCGACCGGGACGAGCCGCAGGACGCTGCACAGTGA;具体参见序列表。[0036]构建的高效表达IrrE蛋白的载体pET-IrrE中的基因含有终止密码子，表达的融合IrrE蛋白的氨基端携带有6His-Tag可用于蛋白的分离纯化。将含有重组质粒pET-IrrE的BL21DE3菌株活化后转接于新鲜的培养基中。菌株生长到OD值为0.6左右，向培养基中加入终浓度分别为〇.5mM的IPTG，16°C培养12h，诱导细胞表达IrrE蛋白。利用IrrE融合蛋白氨基末端含有的His-Tag，采用Ni-NTA偶联的NTA树脂进行亲和层析纯化该融合蛋白。收集40mM咪唑洗脱液脱液中的目的蛋白，经过SDS-PAGE检测，结果如图1所示。图1中，泳道M为分子量标记，泳道1为对照菌株全细胞蛋白；泳道2为IPTG诱导后表达IrrE细胞可溶性蛋白；泳道3为IPTG诱导后表达IrrE细胞不可溶蛋白；泳道4为可溶蛋白上样流出液;泳道5为NTA-O洗脱液;泳道6为纯化后的His-TagIrrE融合蛋白，可见纯度较高。纯化的IrrE蛋白可用于制备其单克隆抗体。[0037]实施例2[0038]IrrE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[0039]将6-8¥+的从1^3雌小鼠按剂量分为四组，按剂量50、100、150、20^8只（即实施例1得到的IrrE蛋白）进行免疫，共免疫3次。初次免疫前取眼血作为阴性对照，初次免疫时加等体积福氏完全佐剂皮下多点注射；以后隔四周进行一次免疫，以相同剂量重组抗原加等体积福氏不完全佐剂皮下多点注射。第三次免疫结束后10天左右用重组抗原包被ELISA板，用间接ELISA测定小鼠血清的抗体效价;融合前三天对抗体效价最高的（1:IO5以上）小鼠尾静脉注射50yg重组IrrE蛋白加强免疫。加强免疫三天后进行细胞融合。[0040]细胞融合前一天，按照以下方法制备饲养层细胞：1将8W+健康雄性BALBc小鼠，拉颈处死后，于75%乙醇浸泡3-5min;2移至超净台内，用无菌剪刀剪开皮肤，暴露腹膜，并用75%乙醇消毒其腹膜;3用止血钳轻轻拉起腹膜，将IOmL预温的1640液体培养基用注射器注入腹腔，用棉球轻揉腹腔l_2min，吸出细胞悬液，放入离心管中；4离心：1000Xg，5min，弃上清;5用IOmL含血清HAT培养基将细胞混匀，细胞计数，调整细胞密度于2XIO5mL;6将此细胞悬液按IOOyL孔加入96孔细胞培养板，则细胞密度为2XIO4孔;7置37°C，5%CO2孵箱培养，供次日融合实验用。[0041]骨髓瘤细胞SP20的制备：1收获对数生长期SP20细胞，用1640液体培养基洗涤3次，1000Xg离心5min，弃上清；2用1640液体培养基重悬细胞。取IOOyL细胞悬液，以0.2%台盼蓝染色，进行细胞计数，要求细胞活力95%，并调整细胞密度待用。[0042]脾细胞悬液的制备：1将3天前经过冲击免疫的BALBc小鼠摘除眼球放血，断颈处死，于75%乙醇浸泡2min;2移至超净台内，剪开腹部皮肤向两侧剥离，暴露腹壁;换剪刀、镊子，剪开腹膜，取出脾脏，去掉脂肪和结缔组织，用1640培养基冲洗;3将脾脏置于200目的筛网上，一边用注射器芯轻轻地研磨;一边以培养液冲洗，收集脾细胞悬液，离心1000Xg，5min，弃上清;4用1640培养基重悬细胞，离心洗涤2次：1000Xg，5min，弃上清;5用IOmL不完全培养基重悬。取IOOyL细胞悬液，以0.2%台盼蓝染色，要求细胞活力95%，并计数脾细胞。剩余细胞调整细胞密度待用。[0043]细胞融合及培养：1将脾细胞与SP20骨髓瘤细胞以5:1比例混合于50mL离心管中，1000Xg离心5min，弃上清，轻弹离心管底部，使细胞沉淀松散;2—边均匀转动离心管，一边用吸管滴加37°C预温的50%PEG4000lmL，于Imin内完成;3加37°C预热的1640培养基lmL，在Imin内完成;4加37°C预热的1640培养基IOmU在5min内完成;58008离心81^11;用IOOmLHAT培养基重悬细胞沉淀;6按IOOyL孔将细胞悬液转移到接种了饲养细胞的细胞培养板中，同时留2孔加未经融合的SP20细胞作对照，观察细胞对HAT的敏感性。培养板置于37°C、5%⑶2孵箱中培养;7融合3天后，每孔补加IOOyL新鲜的HAT培养液。以后每3-5天半量更换HAT培养液一次;82周后，HT培养基半量换液;93-4周后，换完全培养基维持培养。[0044]ELISA筛选阳性杂交瘤细胞：1融合后的细胞生长到培养孔底面积的14时培养约12-15天左右），取上清用间接ELISA法检测特异性反应和交叉反应，对杂交瘤细胞进行筛选。重组蛋白IrrE为包被抗原，包被浓度5ygmL常规包被ELISA板。往包被ELISA板中加100μL孔的细胞培养上清液，用PBS1:100稀释的免疫鼠血清为阳性对照，SP20细胞孔培养上清为阴性对照。细胞上清与包被ELISA板37°C孵育30min，充分洗涤后加入HRP标记的羊抗鼠IgG抗体（1:10000稀释）IOOyL孔，37°C孵育30min，弃二抗。充分洗板后每孔加TMBIOOyL显色15min，每孔再加入50yLINH2S〇4终止反应。测定0D45Q值。2ELISA筛选获得98株分泌IrrE单抗的细胞株;上述98株IrrE单抗的细胞株所分泌的单克隆抗体均对重组IrrE蛋白具有阳性反应。选择其中阳性反应最强的37株细胞进一步亚克隆培养，其余细胞株直接扩大培养，冻存和少量生产腹水。[0045]有限稀释法进行克隆化培养：1用移液器将待克隆的细胞吹打混匀，用含20%血清的HT选择培养液稀释至1个细胞孔的密度，加入已有饲养细胞的细胞板，置5%CO2、37°C的培养箱中进行培养;2培养至第4天时，在倒置显微镜下观察并记录细胞单克隆生长孔；培养1周左右，吸取IOOyL已变黄的细胞培养液上清，用上述ELISA法检测细胞培养上清;3检测为强阳性的孔内细胞进行2-3次亚克隆，直到最后一次所有仅一个细胞集落生长的培养孔上清ELISA检测结果均为阳性为止;4将最后一次有限稀释后ELISA检测结果最好的杂交瘤细胞克隆扩大培养，并冻存。[0046]腹水的制备：1选取10周龄BALBc小鼠，腹腔注射液体石蜡0.5mL只；27天后，腹腔接种经PBS稀释的培养至对数期的阳性杂交瘤细胞，每只小鼠5XIO5AiL杂交瘤细胞;35天后观察，当小鼠腹部明显膨胀时，用12号注射针头收集腹水，每隔3天收集一次，直到小鼠死亡;4将腹水以7000Xg，离心IOmin;留上清分装后-80°C冰箱保存。[0047]单克隆抗体的纯化proteinA亲和层析）：1装柱：用EquilibrationBuffer50mMTris-HCl，150mMNaCl，pH8.6湿润柱子，检查柱子是否堵塞，加5mLProteinAAgarose于柱中；2加入10倍柱体积的EquilibrationBuffer平衡柱子;3缓慢将腹水上样;4加入10倍柱体积的EquilibrationBuffer，按4_5mL管收集穿透液直至0D28q〈0.I;5准备收集管，收集洗脱液的试管按500yL管加入中和缓冲液20mM磷酸盐缓冲液，pH7.7;6用5倍柱体积的ElutionBuffer50mMglycine，0.5MNaCl，pH2.3洗脱，按1.5mL管收集洗脱液直至〇D28〇〈0.1;7用5倍柱体积的EquilibrationBuffer洗柱及平衡柱子。[0048]适应于WESTERNBLOT的单克隆抗体筛选：[0049]将所获得的37株纯化单抗，使用WESTERNBLOT方法，通过对IrrE重组抗原和非IrrE转基因作物的特异性筛选，最后筛选出只针对IrrE高特异性高灵敏性的单抗。[0050]WESTERNBLOT单克隆抗体筛选的操作步骤：12%SDS-PAGE电泳分离蛋白。泳道1为蛋白Marker;泳道2为重组IrrE蛋白（lmgmL;泳道3为转IrrE油菜种子抽提物0.2gmL;泳道4为转NPTII水稻种子抽提物0.2gmL;泳道5为转BTCryIAc玉米种子抽提物0.2gmL;泳道6为转phy玉米种子抽提物（0.2gmL;泳道7为转CP4-EPSPS大豆种子提取物0.2gmL;泳道8为转G2-EPSPS玉米种子抽提物0.2gmL;泳道9为转PATbar玉米种子抽提物〇.2gmL;泳道10为转BTCPTI棉花种子提取物0.2gmL;半干转移凝胶中的蛋白至硝酸纤维膜NC膜），20伏恒压Ih;将PBST中加入5%脱脂奶粉作为以封闭液，电转完成后取出NC膜放入封闭液中，4°C封闭过夜，PBST洗涤5minX3次；以筛选出的37株抗IrrE单抗分别为一抗，用封闭液分别按1:200比例稀释，室温振荡孵育2h后弃反应液，PBST洗涤NC膜5minX3次；以HRP标记羊抗鼠IgG为二抗，用封闭液按1:10000比例稀释，室温下摇床孵育2h后弃反应液，PBST洗涤5minX4次;DAB显色液显色，观察结果。[0051]单克隆抗体亚类的鉴定：利用免疫球蛋白标准亚类鉴定试剂盒（Sigma公司）对各株单抗进行亚类鉴定，具体试验方法如下:在酶标板中分别加入1:1000倍PBS稀释的羊抗鼠IgGIgM、IgA、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3，IOOyL孔，37°C放置Ih;弃去酶标板中液体，用PBST洗涤3次；IOOyL孔加入I3BS稀释后的纯化单克隆抗体抗体浓度2-5ygmL，室温孵育Ih;I3BST洗涤3次;加入HRP标记的羊抗鼠IgG抗体（1:10000稀释）IOOyL孔，室温孵育30min;充分洗板后每孔加IOOyLTMB，显色15min，再加入INH2S〇450yL孔终止反应。测定0D45Q值。[0052]单克隆抗体纯度及亚类的鉴定结果：实验证明单克隆抗体IDB4适用于TCSTERNBLOT，单抗1DB4纯化结果如图2示，纯度大于95%。[0053]单抗1DB4亚类鉴定结果为IgGl亚型。[0054]单克隆抗体特异性和灵敏度评价:WESTERNBLOT实验筛选到的单克隆抗体1DB4按1:200、1:500、1:1000、1:2000、1:5000稀释时，对重组IrrE蛋白进行检测。检测结果显示，不同稀释倍数的单克隆抗体1DB4均能够检测到重组IrrE蛋白，说明单抗1DB4有良好的检测灵敏度。表1中，+代表具有阳性条带+的数量代表条带的浓度），_代表条带不可见，±代表条带与背景差异不显著或有杂条带，难以判断；以下相同。[0055]表1[0057]将产1DB4单克隆抗体的杂交瘤细胞株进行保藏，保藏编号为CGMCCNO.12268。[0058]将单克隆抗体1DB4按1:200稀释，对重组IrrE蛋白、转IrrE作物种子和7种不同来源的各种非IrrE转基因作物进行WESTERNBLOT检测。结果如表2显示，单克隆抗体1DB4能够特异性检测到重组IrrE蛋白及转IrrE作物种子，结果如图3示。对7种不同来源的各种非IrrE转基因作物也不呈现交叉反应。说明单抗1DB4有良好的检测灵敏度。[0061]根据实施例2可以看出，本发明筛选到了一种单克隆抗体1DB4,能够用于WESTERNBLOT检测。可检测到重组IrrE蛋白及转IrrE作物种子;对7种不同来源的各种非IrrE转基因作物也不呈现交叉反应。单克隆抗体1DB4具有非常优异的敏感性和特异性。[0062]对比例1[0063]将实施例2所获得的37株纯化单抗中除1DB4以外的其余10株，使用WESTERNBLOT方法，按1:200稀释，进行特异性和灵敏性的检测，结果如表3所示。[0064]表3[0066]根据表3可以看出，单克隆抗体1DB4相比其它单克隆抗体具有非常优异的敏感性和特异性。[0067]以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。[0068]另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。[0069]此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。

权利要求：1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCCNO.12268。2.—种单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNO.12268的杂交瘤细胞株产生。3.权利要求2所述的单克隆抗体在检测转IrrE的转基因农作物中的用途。4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述农作物为花椰菜、油菜、棉花、玉米、水稻或大豆。5.根据权利要求3或4所述的用途，其中，如果待检测的农作物的全蛋白用权利要求2所述的单克隆抗体进行免疫杂交后出现IrrE的阳性条带，则指示待检测的农作物为转IrrE基因的农作物。6.—种检测转IrrE的转基因农作物的方法，其中，该方法包括：51、从待检测的农作物中提取全蛋白；52、对所述全蛋白使用权利要求2所述的单克隆抗体进行免疫杂交；53、如果免疫杂交结果中出现IrrE的阳性条带，则指示待检测的农作物为转IrrE的转基因农作物。7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述农作物为花椰菜、油菜、棉花、玉米、水稻或大豆。

百度查询： 中国农业科学院生物技术研究所 单克隆抗体1DB4在检测IrrE转基因农作物中的应用

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