申请/专利权人：山东大学

申请日：2019-09-05

公开（公告）日：2020-10-23

公开（公告）号：CN110592026B

主分类号：C12N7/00(20060101)

分类号：C12N7/00(20060101);C12N15/85(20060101);G01N33/569(20060101);C12Q1/02(20060101);A61K45/00(20060101);A61P31/20(20060101);A61P1/16(20060101)

优先权：["20190830 CN 201910814688X"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.10.23#授权;2020.01.14#实质审查的生效;2019.12.20#公开

摘要：本公开属于生物工程技术领域，具体涉及一种HBVcccDNA与宿主互作研究模型构建及应用。本公开提供了一种高度模拟乙型肝炎病毒基因组cccDNA的微环DNA模型构建及其应用，通过构建pmini‑MC‑HBV‑Intron质粒，体外获得高纯度MC‑HBV微环质粒；通过优化嵌合内含子序列和RNA的二级结构，实现了嵌合内含子在RNA水平上的高效可变剪接，获得可体外高水平复制的MC‑HBV。该MC‑HBV可高度模拟HBV病毒与宿主细胞间的生理活动。本公开还建立了体外标记MC‑HBV模型和检测的技术，为揭示HBVcccDNA与宿主相互作用关系、功能调节机制和探寻HBV治疗新靶点的提供了极好的模型。

主权项：1.一种HBVcccDNA模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：构建真核表达载体质粒pmini-MC-HBV-Intron，pmini-MC-HBV-Intron如图1所示，转化感受态细胞挑选阳性克隆转化至感受态细胞挑取单克隆培养扩增培养，诱导attBP重组获得MC-HBV微环质粒，通过补加序列消除pgRNA的茎环结构，转录补加序列后的MC-HBV微环质粒，加入肝癌细胞中进行转染得到pgDNA，即所述HBVcccDNA模型；所述表达载体质粒pmini-MC-HBV-Intron构建过程如下：通过PCR扩增HBV嵌合内含子序列与载体骨架片段，通过Infusioncloning技术连接扩增片段得到真核表达质粒pmini-MC-HBV-Intron；所述HBV嵌合内含子序列为cgtgttacaggtaagtatcaaggttacaagacaggtttaaggagacCCCCAACTGGGGTAACTGGGCTCCCCGGGCGCGACgtcgcgcccggggacacctattggtcttactgacatccactttgcctttctctccacaggcggggtttt。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东大学 一种HBV cccDNA与宿主互作研究模型构建及应用

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