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【发明授权】一种新型冠状病毒2019-nCoV的电化学检测方法_云南大学_202010108629.3 

申请/专利权人:云南大学

申请日:2020-02-21

公开(公告)日:2020-10-27

公开(公告)号:CN111189900B

主分类号:C12Q1/70(20060101)

分类号:C12Q1/70(20060101);C12Q1/6825(20180101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2020.10.27#授权;2020.06.16#实质审查的生效;2020.05.22#公开

摘要:本发明涉及一种新型冠状病毒2019‑nCoV的电化学检测方法,该检测方法包括针对新型冠状病毒2019‑nCoVRNA序列中两个结构域为靶标的三个探针设计、三种物质的制备和电化学传感器的构建。本发明针对新型冠状病毒2019‑nCoV的电化学检测具有操作简单、检测快速准确、低成本的显著优点。

主权项:1.一种新型冠状病毒2019-nCoV的电化学检测方法,其特征在于,该检测方法包括针对新型冠状病毒2019-nCoVRNA序列中ORF1ab结构域为靶标的三个探针:捕获探针Captureprobe,CP、标签信号探针Labeledsignalprobe,LP和辅助探针Auxiliaryprobe,AP;其中:CP:5'-ACCTTTCCACATACCGCAGACG-3';LP:5'-TCGAGTTACGCTAAGCGCGGAGTTGATCACAACTA-3';AP:5'-CTTAGCGTAACTCGA-TAGTTGTGATCAACTCCGCG-3';该检测方法包括针对新型冠状病毒2019-nCoVRNA序列中N结构域为靶标的三个探针:捕获探针Captureprobe,CP、标签信号探针Labeledsignalprobe,LP和辅助探针Auxiliaryprobe,AP;其中:CP:5'-CAATCTGTCAAGCAGCAGCA-3';LP:5'-TCGAGTTACGCTAAGAGACATTTTGCTCTCAAGCT-3';AP:5'-CTTAGCGTAACTCGAAGCTTGAGAGCAAAATGTCT-3';该方法包括以下物质:Fe3O4纳米微球、金纳米粒子负载Fe3O4纳米复合物:Au@Fe3O4复合物、金纳米粒子磺酸化杯[8]芳烃还原氧化石墨烯电信号物质复合物:Au@RGO-SCX8-电信号物质复合物;该检测方法包括电化学传感器的构建,其步骤为:将Au@Fe3O4复合物超声分散在缓冲液Ⅰ中,并加入捕获探针,在4℃的条件下放置5~20小时,磁铁分离;然后将固体加入缓冲液Ⅰ和己硫醇,己硫醇用来封闭非特异性位点,室温放置10~40min后,用磁铁分离,在分离后固体中加入缓冲液Ⅱ和目标RNA;室温下放置1~2小时后磁铁分离,在分离的固体中依次加入信号探针、辅助探针和Au@RGO-SCX8-电信号物质复合物分散液,室温下放置1~2小时后磁铁分离,将固体分散在磷酸缓冲液中,取分散液滴于丝网印刷电极表面,并在电化学工作站上用示差脉冲伏安法、循环伏安法或交流伏安法确定目标RNA的浓度和峰电流的关系,并获得电流强度与RNA浓度的标准曲线,进而完成电化学传感器的构建;所述磷酸缓冲液pH为7.2;所述的检测方法为,使用该标准曲线计算待测样品中新型冠状病毒2019-nCoV中RNA的浓度,并根据该结果来评价待检样本中是否存在2019-nCoV,从而判断是否被病毒感染。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 云南大学 一种新型冠状病毒2019-nCoV的电化学检测方法

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