申请/专利权人：广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)

申请日：2017-12-27

公开（公告）日：2020-11-20

公开（公告）号：CN107970143B

主分类号：A61K8/9728(20170101)

分类号：A61K8/9728(20170101);A61Q19/02(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-未缴年费专利权终止

法律状态：2022.12.06#未缴年费专利权终止;2018.05.25#实质审查的生效;2018.05.01#公开

摘要：本发明公开了一种尖孢镰刀菌A654提取物在制备美白化妆品中的应用。本发明的尖孢镰刀菌A654提取物是通过以下方法制备的：以尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得尖孢镰刀菌A654提取物。本发明通过实验发现，尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶抑制的IC50值为160.35μgmL，对酪氨酸酶抑制效果与维生素C相当。因此，本发明的尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶具有明显抑制作用，可用于制备酪氨酸酶抑制剂，应用于美白化妆品。

主权项：1.尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用，所述的尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物是通过以下方法制备的：以尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物。

全文数据：尖孢镰刀菌A654提取物在制备美白化妆品中的应用技术领域：[0001]本发明属于中药、天然化妆品领域，具体涉及一种尖孢镰刀菌A654提取物在制备美白化妆品中的应用。背景技术：[0002]植物内生真菌具有丰富的物种多样性和遗传多样性，迄今已从植物内生真菌中发现了不少新的或稀有的真菌物种，己成为国内外的研究热点。研宄发现，植内生真菌产生的活性化合物远远超出其植物代谢产物的范围，能产生各种结构类型独特、具有潜在应用前景的活性物质，已成为发现新的天然活性物质的重要资源。[0003]人类皮肤的肤色与皮肤中存在的色素的种类和数量有关，其中黑素对皮肤颜色影响最大，黑素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下生成多巴、多巴醌最终形成黑素。酪氨酸酶是一种广泛存在于动植物体及微生物中含铜的金属酶，是生物体合成黑素的关键酶，它控制着黑素的形成过程，其活性程度对色素的沉积起主要作用，通过抑制其活性可以抑制黑色素的生成，因而酪氨酸酶抑制剂作为皮肤增白剂被广泛应用于化妆品和医药行业。目前国内外用于化妆品的美白剂主要为氢醌、曲酸、果酸、熊果苷和Vc衍生物等，但由于这些美白剂存在细胞毒性强、皮肤渗透性弱以及稳定性差或价格昂贵等缺点，因此，从天然植物提取物中寻找安全、有效的酪氨酸酶抑制剂应用于美白化妆品已成为业内人士研究的热点。[0004]本发明所涉及的尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum是从药用植物广藿香茎中分离得到。尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654公开于文献“广藿香内生真菌类群分析及其抗菌活性研宄”（王营等，中国中药杂志，20174:657-662，文中还报道了该尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物对枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、荔枝霜疫霉Peronophthoralitchic有明显的抑制作用;文献“药用植物广藿香内生真菌的生物活性研究”（马连营等，中国民族民间医药，2017,（13:28-32报道了尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物对肿瘤细胞3?-268、1^^-7、叱1-11460、1^?6-2有一定的细胞毒活性，而有关尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物抑制酪氨酸酶活性方面的研宄未见报道。发明内容：[0005]本发明的目的是提供尖孢镰刀菌A654提取物在制备美白化妆品中的应用。[0006]本发明的第一个目的是提供尖抱嫌刀菌FusariumoxysporumA654提取物在制备酷热fe酶抑制剂中的应用，所述的尖抱镶刀菌FusariumoxysporumA654提取物是通过以下方法制备的：以尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物。[0007]优选，所述的液体发酵获得发酵培养物是将尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654接种到发酵培养基中，于28°C、120rmin液体发酵培养，得到发酵培养物，所述的发酵培养基每升是通过以下方法制备：用500mL纯水煮200g马铃薯20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20g、KH2P〇43g、MgSCk0.75g、维生素m10mg，用水补足至lL，pH自然，得到发酵培养基。[0008]所述的酪氨酸酶抑制剂优选为对酪氨酸酶活性有抑制作用的美白化妆品。[0009]本发明的第二个目的是提供一种抑制酪氨酸酶的美白化妆品，该美白化妆品包含有效量的尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物作为活性成分，所述的尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物是通过以下方法制备的：以尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物。[0010]优选，所述的液体发酵获得发酵培养物是将尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654接种到发酵培养基中，于28°C、120rmin液体发酵培养，得到发酵培养物，所述的发酵培养基每升是通过以下方法制备:用500mL纯水煮200g马铃薯20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20g、KH2P043g、MgS040.75g、维生素m10mg，用水补足至lL，pH自然，得到发酵培养基。本发明通过实验发现，尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶抑制的IC5Q值为160.35UgmL，阳性对照药物维生素C对酪氨酸酶抑制的IC5Q值为153.13ugmL，尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶抑制效果与维生素C相当。因此，本发明的尖孢镰刀菌A654提取物具有明显抑制酪氨酸酶作用，可用于制备美白化妆品。[0012]本发明的尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654是从药用植物广藿香莖中分离得到，其公开于文献:王营等，广藿香内生真菌类群分析及其抗菌活性研宄.中国中药杂志，2017⑷：657-662即菌株A654和马连营等，药用植物广藿香内生真菌的生物活性研究.中国民族民间医药，2017，（13:28-32，该菌株本发明人也持有，保证自申请日起20年内向公众提供。具体实施方式：[0013]以下通过具体实施例来对本发明进一步说明，但并非限制本发明。[0014]尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物的制备：[0015]将尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654接种到发酵培养基中，于28°C、120rmin液体发酵培养，得到发酵培养物，过滤，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得尖孢镰刀菌A654提取物，用于下述实施例中。[0016]发酵培养基每升是通过以下方法制备：用500mL纯水煮200g马铃薯20min，过滤得汁，再加入葡萄糖2〇g、KH2P04：3g、MgS〇40_75g、维生素出10mg，用水补足至lL，pH自然，得到发酵培养基。[0017]实施例1:尖孢镰刀菌A654提取物抑制酪氨酸酶活性测定[0018]PH6•8、浓度为0•05m〇LL的磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲液）的配制：称取〇.3549gNa2HPk用蒸馏水定容至5〇mL;称取0.34〇2gKHJO4用蒸镏水定容至50mL。将浓度为0•〇5moLL的NasHPO4溶液与0•〇5moLLKH2P〇4等量溶液混合，得到pH6•8、浓度为0•05moLL的磷酸盐缓冲溶液PBS缓冲液。[0019]尖孢镰刀菌A654提取物溶液的配制:将尖孢镰刀菌A654提取物用DMS0溶解并配制成100mgmL浓度，用PBS缓冲液稀释至20mgmL浓度的待测液。L，u」酪虱酸酶溶液的配制：称取沽力单位为3933Umg的酪氨酸酶6.8mg，加入PBS缓冲液2•67mL，配成1OKUmL浓度。[0021]L-dopa底物溶液的配制：称取L-dopa33•5mg，加入PBS缓冲液17mL，配制成lOmmoLL浓度。[0022]将上述尖孢镰刀菌A654提取物待测液用PBS缓冲液稀释至600辟1111、400辟11^、200ygmL、10〇iigmL、8〇ygmL、6〇ygmL，酪氨酸酶溶液用PBS缓冲液稀释至10UmL浓度，以10mmoLL浓度的L-dopa溶液为底物。吸取丨6〇此浓度为10mm〇LL的L-dopa溶液于96孔板中，加入2〇此尖孢镰刀菌A654提取物稀释液及2〇此酪氨酸酶液稀释液作样品组，以ros缓冲液作参比，以PBS缓冲液代替酪氨酸酶稀释液作样品背景组，以PBS缓冲液代替尖孢镰刀菌A654提取物稀释液作阴性对照组，以维生素C代替尖孢镰刀菌A654提取物稀释液作阳性对照组，置37°C培养箱静止反应30min，用酶标仪测定每孔475nm处的吸光值0D，实验重复3次，按以下公式计算尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶活性的抑制率，采用SigmaPolot10.0软件计算IC50值。[0023]抑制率（⑹={1-0¾¾¾腳日隨,翻阴麵粗-ODsia0D隨麵翻]X100%[0024]结果表明：尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶抑制的IC5。值为160.35UgmL，阳性对照药物维生素C对酪氨酸酶抑制的IC5〇值为153.13ygmL，尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶抑制效果与维生素C相当。因此，本发明的尖孢镰刀菌A654提取物对酪氨酸酶具有明显抑制作用，可用于制备酪氨酸酶抑制剂，应用于美白化妆品。

权利要求：1.尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用，所述的尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物是通过以下方法制备的：以尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酷萃取，萃取液经浓缩后即得尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的液体发酵获得发酵培养物是将尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654接种到发酵培养基中，于28°C、120rmin液体发酵培养，得到发酵培养物，所述的发酵培养基每升是通过以下方法制备:用500mL纯水煮200g马铃薯20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20g、KH2P〇43g、MgS〇40.75g、维生素Bi10mg，用水补足至1L，pH自然，得到发酵培养基。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的酪氨酸酶抑制剂为对酪氨酸酶活性有抑制作用的美白化妆品。4.一种抑制酪氨酸酶的美白化妆品，其特征在于，该美白化妆品包含有效量的尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物作为活性成分，所述的尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物是通过以下方法制备的：以尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654提取物。5.根据权利要求4所述的抑制酪氨酸酶的美白化妆品，其特征在于，所述的液体发酵获得发酵培养物是将尖孢镰刀菌FusariumoxysporumA654接种到发酵培养基中，于28°C、120rmin液体发酵培养，得到发酵培养物，所述的发酵培养基每升是通过以下方法制备:用500mL纯水煮200g马铃薯20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20g、KH2P〇43g、MgS〇40_75g、维生素扮10mg，用水补足至1L，pH自然，得到发酵培养基。

百度查询： 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 尖孢镰刀菌A654提取物在制备美白化妆品中的应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD