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【发明公布】大鼠骨髓源肥大细胞培养方法_云南洛宇生物科技有限公司_201910920540.4 

申请/专利权人:云南洛宇生物科技有限公司

申请日:2019-09-27

公开(公告)日:2020-11-24

公开(公告)号:CN111979193A

主分类号:C12N5/0787(20100101)

分类号:C12N5/0787(20100101)

优先权:

专利状态码:在审-实质审查的生效

法律状态:2020.12.11#实质审查的生效;2020.11.24#公开

摘要:本发明公开了大鼠骨髓源肥大细胞培养方法,所述方法包括以下步骤:脱颈法处死出生3‑5周的SD青年大鼠,用75%酒精浸泡消毒3min,然后转入超净工作台内操作,剪开后肢皮肤,去除腿部肌肉,暴露出股骨,将股骨外部肌肉剥离干净,剪下股骨;剪去股骨两端的股骨头,使用注射器吸取DMEMF12基础培养基,将股骨骨髓吹打出来,吹打过程中将骨髓冲洗干净;使用巴氏吸管将骨髓吹打30次制成单细胞悬液,通过离心机进行离心,收集细胞,并弃掉上清液;再加入红细胞裂解液在4摄氏度下裂解3min。本发明通过肥大细胞诱导培养基、肥大细胞促成熟培养基进行培养和多次离心分离,使得培养出来的肥大细胞纯度较高,且培养周期大大缩短。

主权项:1.大鼠骨髓源肥大细胞培养方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:S1:脱颈法处死出生3-5周的SD青年大鼠,用75%酒精浸泡消毒3min,然后转入超净工作台内操作,剪开后肢皮肤,去除腿部肌肉,暴露出股骨,将股骨外部肌肉剥离干净,剪下股骨;S2:剪去股骨两端的股骨头,使用注射器吸取DMEMF12基础培养基,将股骨骨髓吹打出来,吹打过程中将骨髓冲洗干净;S3:使用巴氏吸管将骨髓吹打30次制成单细胞悬液,通过离心机进行离心,收集细胞,并弃掉上清液;S4:再加入红细胞裂解液在4摄氏度下裂解3min,再通过离心机进行离心,收集细胞,并弃掉上清液,再吸取肥大细胞诱导培养基重悬细胞液,清洗除去残留红细胞裂解液;S5:使用注射器吸取肥大细胞诱导培养基重悬细胞液,接种至T25瓶内培养,培养过程中每3天换液一次,换液至第8次时收集培养基中变圆脱落的细胞,即未成熟肥大细胞;S6:将含有未成熟肥大细胞的培养基转移至离心管内,通过离心机进行离心操作,离心完成后收集细胞,然后使用注射器吸取肥大细胞促成熟培养基重悬细胞液,接种至T25瓶内培养,培养过程中每3天换液一次,换液培养5次后可得到分化成熟的肥大细胞。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 云南洛宇生物科技有限公司 大鼠骨髓源肥大细胞培养方法

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