申请/专利权人：广东省农业科学院水稻研究所

申请日：2020-07-29

公开（公告）日：2020-11-24

公开（公告）号：CN111979344A

主分类号：C12Q1/6895(20180101)

分类号：C12Q1/6895(20180101);A01H1/04(20060101);A01H5/00(20180101);A01H6/46(20180101);C12N15/82(20060101);C12N15/29(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.07.20#授权;2020.12.11#实质审查的生效;2020.11.24#公开

摘要：本发明公开的属于农业生物工程技术领域，具体为一种快速准确选育互作型弱感光杂交稻亲本的分子标记方法，包括步骤一：分析博B和粤丰B中DTH8基因的差异，步骤二：推断DTH8为控制华南弱感光型杂交稻互作感光的主效基因，针对当前利用传统的方法选育弱感光型杂交稻不育系进展慢、效率低的问题，结合弱感光型杂交稻感光基因定位区间和已报道感光基因，通过转基因功能验证明确DTH8基因控制华南弱感光型杂交稻互作感光的生物学功能，开发了基于PCR快速准确选育互作感光型杂交稻保持系不育系的共显性功能性分子标记，大大提高育种工作的预见性，缩短了育种周期。

主权项：1.一种快速准确选育互作型弱感光杂交稻亲本的分子标记方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一：分析博B和粤丰B中DTH8基因的差异。根据DTH8的参考基因组序列，在DTH8基因编码区的两端设计引物分别扩增博B和粤丰B基因组中的DTH8基因，经测序比对后发现，博B中含有一个完整的DTH8基因全长，而在粤丰B基因组中从DTH8基因编码区的第793个碱基开始缺失至3`端，一共缺失1110个碱基；步骤二：推断DTH8为控制华南弱感光型杂交稻互作感光的主效基因。根据研究团队之前对华南稻区互作感光基因的初定位结果，以及现有感光基因的文献报道，我们推断杂交稻亲本保持系不育系中的互作感光基因为DTH8基因，该基因编码一个结合CCAAT盒的转录因子蛋白复合体HAP3H的亚基，是主效感光基因；步骤三：再经转基因功能验证，证明推断的准确性。运用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建DTH8基因编辑载体，设计DTH8编码区起始密码子附近作为基因编辑靶位点GTTAGCTTCACATGAAGAGTAGG，构建DTH8基因编辑的重组载体，通过农杆菌介导的转基因方法，将DTH8基因编辑载体转化至DTH8功能正常的亲本博B中；步骤四：开发用于互作弱感光型杂交稻亲本选育的共显性功能性分子标记。根据博B和粤丰DTH8的测序比对结果，设计了弱感光型杂交稻亲本选育的功能性分子标记DTH8-F:CAGGAGTGCGTGTCGGAGT；DTH8-R:TCCGTTGCCTCCTTGCTG，该标记跨过了粤丰B中DTH8缺失的1110bp，在博B中扩增目标带为2021bp，在粤丰B中扩增目标带为911bp，双亲之间相差1110bp，因此运用琼脂糖凝胶电泳只需要1.5％的胶浓度，电泳145V运行30min就能够很好的区分双亲及杂种，结果表明运用开发的DTH8共显性功能行分子标记能够快速、准确的检测感光单株与非感光单株；步骤五：利用DTH8分子标记进行互作弱感光型杂交稻亲本选育。将互作感光型保持系博B作为DTH8基因的供体，导入感温型优质香型保持系粤丰B中，获得优质互作感光型保持系。一种快速准确选育互作型弱感光杂交稻不育系的分子标记方法，其特征在于：所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东省农业科学院水稻研究所 一种快速准确选育互作型弱感光杂交稻亲本的分子标记方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD