申请/专利权人：倪氏国际玫瑰产业股份有限公司

申请日：2019-01-12

公开（公告）日：2020-11-24

公开（公告）号：CN109580840B

主分类号：G01N30/02(20060101)

分类号：G01N30/02(20060101);G01N30/06(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.11.24#授权;2019.04.30#实质审查的生效;2019.04.05#公开

摘要：本发明涉及玫瑰精油检测技术领域，特别涉及玫瑰花饮料中精油的测定方法，目的在于提供一种对玫瑰花饮料中精油含量进行检测的方法。其主要步骤包括S1：配制内标液；S2：样品预处理，预处理过程中加入内标液；S3：将预处理后的样品进行色谱‑质谱分析；S4：根据色谱‑质谱分析结果，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β‑苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL；S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。

主权项：1.玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：配制内标液，所述内标液为2-壬醇溶液；S2：样品预处理，样品预处理过程为将样品加入顶空瓶中，加入氯化钠及内标液，加入己酸烯丙酯，己酸烯丙酯与样品的体积比为1:20，密封，磁力搅拌；插入萃取头，水浴条件下萃取，之后进行分析；S3：将预处理后的样品进行色谱-质谱分析，色谱条件为，毛细管色谱柱：WAXETR30m×0.25mm×0.50μm；柱温程序：起始温度50℃，恒温2min，以3℃min升温至80℃，以10℃min升温至115℃，以3℃min升温至240℃，保持5min；载气、高纯氦气：纯度≥99.999％；流速：1mLmin，不分流进样；进样口温度：230℃，质谱条件为离子源温度：230℃；传输线温度：240℃；电子轰击源：70eV；扫描范围：29～300amu；S4：根据色谱-质谱分析结果，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL；S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。

全文数据：玫瑰花饮料中精油的测定方法技术领域本发明属于玫瑰精油检测技术领域，特别涉及玫瑰花饮料中精油的测定方法。背景技术玫瑰Rosarugosa为蔷薇科、蔷薇属植物，其花形美色鲜、芳香浓郁，具有食用、药用、保健、美容、观赏等多种用途，是我国十大名花之一，也是世界四大切花之一。玫瑰精油为鲜花油之冠，内含多种有效芳香成分，作为传统的美容产品，具有改善肤质，淡化黑色素的功效；更可以调节内分泌，滋养子宫，缓解痛经。玫瑰精油气味芬芳，作为传统香料更是女性必不可少的香体香料。研究表明玫瑰精油还具有抗菌抑菌功能，对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，鼠伤寒沙门氏菌较为敏感并具有抗焦虑作用，具有巨大的开发价值。玫瑰花经加工后，常用于花茶泡制，或者利用玫瑰花制作玫瑰饮料或玫瑰醋等。公告号为CN103063632B的中国发明专利披露了一种检测玫瑰花精油含量的方法。但是，该检测方法是用于检测玫瑰花中的精油含量，对于玫瑰花饮料中的精油含量的检测，目前尚未见报道。发明内容本发明的目的是提供一种玫瑰花饮料中精油的测定方法，其能够对玫瑰花饮料中精油含量进行测定。本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：玫瑰花饮料中精油的测定方法，包括以下步骤：S1：配制内标液；S2：样品预处理，预处理过程中加入内标液；S3：将预处理后的样品进行色谱-质谱分析；S4：根据色谱-质谱分析结果，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL；S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。进一步的，在S5后面增加S6，根据计算出的N值计算样品中精油总量的相对浓度W，‰；W＝N÷629180×1000。进一步的，S1步骤中，内标液为2-壬醇溶液。进一步的，S2步骤中，样品预处理过程为将样品加入顶空瓶中，加入氯化钠及内标液，密封，磁力搅拌；插入萃取头，水浴条件下萃取，之后进行分析。进一步的，S3步骤中，色谱条件为，毛细管色谱柱：WAXETR30m×0.25mm×0.50μm；柱温程序：起始温度50℃，恒温2min，以3℃min升温至80℃，以10℃min升温至115℃，以3℃min升温至240℃，保持5min；载气、高纯氦气：纯度≥99.999％；流速：1mLmin，不分流进样；进样口温度：230℃。进一步的，S3步骤中，质谱条件为离子源温度：230℃；传输线温度：240℃；电子轰击源：70eV；扫描范围：29～300amu。进一步的，S2步骤中，样品预处理时，向样品中加入己酸烯丙酯。进一步的，己酸烯丙酯与样品的体积比为1:20。本发明的有益效果是：1.本发明开发的方法，仅通过检测玫瑰花饮料中四种物质的含量，即可通过该四种物质计算并推到出玫瑰花饮料中精油的含量以及精油的相对浓度，方法简单，操作方便，开创了本领域内对玫瑰花饮料中精油含量进行检测的先河。2.本发明中选用2-壬醇做内标液，2-壬醇的分子结构、性质与待测组分相似，且在待测组分附近出峰；同时，玫瑰饮料中不含2-壬醇这种物质，2-壬醇能够与样品中的其他各组分完全分离，在色谱图上能够单独出峰；2-壬醇与试样互溶效果较好，且不会与玫瑰花饮料这种复杂样品发生不可逆化学反应。3.在本色谱-质谱条件下，样品中各物质分离效果较好，没有明显拖峰或重叠现象。4.己酸烯丙酯是弱极性物质，在萃取时向样品中加入己酸烯丙酯能够改变整个萃取体系的极性，使萃取范围扩大，改善萃取效果。具体实施方式下面将结合具体实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。玫瑰花饮料中精油的测定方法，具体如下各实施例。实施例1S1：配制内标液。移取2-壬醇100μL至100mL容量瓶，用无水乙醇定容，配制成823mgL标准储备液。移取标准储备液2.5mL至25mL容量瓶中，用无水乙醇定容，配制成82.3mgL内标液，置于低温避光处保存待用。S2：样品预处理，本实施例中所用样品为倪氏国际玫瑰产业股份有限公司所产九朵玫瑰饮料花本素饮水蜜桃味植物饮料。移取样品玫瑰花饮料5mL于20mL的顶空瓶中，加入3gNaCl，再加入25μL的内标液，放入磁力搅拌转子，密封；在750rmin转速下搅拌1h后，插入萃取头，纤维头置于距离样品表面约20mm的上部空间，在50℃水浴温度下萃取30min后，取出手柄，直接进入后续检测步骤。S3：将预处理后的样品进行色谱-质谱分析。色谱条件为，毛细管色谱柱：WAXETR30m×0.25mm×0.50μm；柱温程序：起始温度50℃，恒温2min，以3℃min升温至80℃，以10℃min升温至115℃，以3℃min升温至240℃，保持5min；载气、高纯氦气：纯度≥99.999％；流速：1mLmin，不分流进样；进样口温度：230℃。质谱条件为离子源温度：230℃；传输线温度：240℃；电子轰击源：70eV；扫描范围：29～300amu。S4：根据色谱-质谱分析检测出的各种物质的峰面积，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL。S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。其中，0.92为检测并计算出的已知20种精油物质中的香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质所占的比例。S6：根据计算出的N值计算样品中精油总量的相对浓度W，‰；W＝N÷629180×1000。其中，629180mgL系100％纯精油中已知20种有效物质测定值含量。实施例2S1：配制内标液。移取2-壬醇100μL至100mL容量瓶，用无水乙醇定容，配制成823mgL标准储备液。移取标准储备液2.5mL至25mL容量瓶中，用无水乙醇定容，配制成82.3mgL内标液，置于低温避光处保存待用。S2：样品预处理，本实施例中所用样品为倪氏国际玫瑰产业股份有限公司所产九朵玫瑰饮料花本素饮水蜜桃味植物饮料。移取样品玫瑰花饮料5mL于20mL的顶空瓶中，加入3gNaCl，再加入25μL的内标液以及己酸烯丙酯液体，其中己酸烯丙酯与样品的体积比为1:20。放入磁力搅拌转子，密封；在750rmin转速下搅拌1h后，插入萃取头，纤维头置于距离样品表面约20mm的上部空间，在50℃水浴温度下萃取30min后，取出手柄，直接进入后续检测步骤。S3：将预处理后的样品进行色谱-质谱分析。色谱条件为，毛细管色谱柱：WAXETR30m×0.25mm×0.50μm；柱温程序：起始温度50℃，恒温2min，以3℃min升温至80℃，以10℃min升温至115℃，以3℃min升温至240℃，保持5min；载气、高纯氦气：纯度≥99.999％；流速：1mLmin，不分流进样；进样口温度：230℃。质谱条件为离子源温度：230℃；传输线温度：240℃；电子轰击源：70eV；扫描范围：29～300amu。S4：根据色谱-质谱分析检测出的各种物质的峰面积，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL。S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。其中，0.92为检测并计算出的已知20种精油物质中的香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质所占的比例。S6：根据计算出的N值计算样品中精油总量的相对浓度W，‰；W＝N÷629180×1000。其中，629180mgL系100％纯精油中已知20种有效物质测定值含量。实施例3S1：配制内标液。移取2-壬醇100μL至100mL容量瓶，用无水乙醇定容，配制成823mgL标准储备液。移取标准储备液2.5mL至25mL容量瓶中，用无水乙醇定容，配制成82.3mgL内标液，置于低温避光处保存待用。S2：样品预处理，本实施例中所用样品为倪氏国际玫瑰产业股份有限公司所产九朵玫瑰花汁饮料。移取样品玫瑰花饮料5mL于20mL的顶空瓶中，加入3gNaCl，再加入25μL的内标液，放入磁力搅拌转子，密封；在750rmin转速下搅拌1h后，插入萃取头，纤维头置于距离样品表面约20mm的上部空间，在50℃水浴温度下萃取30min后，取出手柄，直接进入后续检测步骤。S3：将预处理后的样品进行色谱-质谱分析。色谱条件为，毛细管色谱柱：WAXETR30m×0.25mm×0.50μm；柱温程序：起始温度50℃，恒温2min，以3℃min升温至80℃，以10℃min升温至115℃，以3℃min升温至240℃，保持5min；载气、高纯氦气：纯度≥99.999％；流速：1mLmin，不分流进样；进样口温度：230℃。质谱条件为离子源温度：230℃；传输线温度：240℃；电子轰击源：70eV；扫描范围：29～300amu。S4：根据色谱-质谱分析检测出的各种物质的峰面积，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL。S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。其中，0.92为检测并计算出的已知20种精油物质中的香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质所占的比例。S6：根据计算出的N值计算样品中精油总量的相对浓度W，‰；W＝N÷629180×1000。其中，629180mgL系100％纯精油中已知20种有效物质测定值含量。实施例4S1：配制内标液。移取2-壬醇100μL至100mL容量瓶，用无水乙醇定容，配制成823mgL标准储备液。移取标准储备液2.5mL至25mL容量瓶中，用无水乙醇定容，配制成82.3mgL内标液，置于低温避光处保存待用。S2：样品预处理，本实施例中所用样品为倪氏国际玫瑰产业股份有限公司所产九朵玫瑰花汁饮料。移取样品玫瑰花饮料5mL于20mL的顶空瓶中，加入3gNaCl，再加入25μL的内标液以及己酸烯丙酯液体，其中己酸烯丙酯与样品的体积比为1:20。放入磁力搅拌转子，密封；在750rmin转速下搅拌1h后，插入萃取头，纤维头置于距离样品表面约20mm的上部空间，在50℃水浴温度下萃取30min后，取出手柄，直接进入后续检测步骤。S3：将预处理后的样品进行色谱-质谱分析。色谱条件为，毛细管色谱柱：WAXETR30m×0.25mm×0.50μm；柱温程序：起始温度50℃，恒温2min，以3℃min升温至80℃，以10℃min升温至115℃，以3℃min升温至240℃，保持5min；载气、高纯氦气：纯度≥99.999％；流速：1mLmin，不分流进样；进样口温度：230℃。质谱条件为离子源温度：230℃；传输线温度：240℃；电子轰击源：70eV；扫描范围：29～300amu。S4：根据色谱-质谱分析检测出的各种物质的峰面积，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL。S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。其中，0.92为检测并计算出的已知20种精油物质中的香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质所占的比例。S6：根据计算出的N值计算样品中精油总量的相对浓度W，‰；W＝N÷629180×1000。其中，629180mgL系100％纯精油中已知20种有效物质测定值含量。检测方法1.分别取倪氏国际玫瑰产业股份有限公司所产九朵玫瑰饮料花本素饮水蜜桃味植物饮料、九朵玫瑰饮料花本素饮西柚味植物饮料、九朵玫瑰花汁饮料，以及云南昆明，保山馆所产玫瑰鲜花汁进行色谱质谱分析，结果显示香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质峰面积较大，分别计算这四种物质在各样品中占已知20种精油物质的比例，最终计算平均值为0.92。2.将纯精油用无水乙醇梯度稀释后，直接进样检测，测定20种已知精油物质：α-蒎烯；β-蒎烯；香叶酸甲酯；乙酸香茅酯；α-萜品醇；香茅醇；橙花醇；香叶醇；橙花叔醇；十七烷；里那醇；β-苯乙醇；甲基丁香酚；二十三烷；玫瑰醚；芳樟醇；β-月桂烯；D-柠檬烯；二十一烷；十九烷。根据峰面积计算得到100％纯精油中已知20种有效物质测定值含量为629180mgL。3.M＝82.3×5×10-3×BAmgL，其中，B为香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质峰面积之和，A为内标物峰面积。检测结果编号ABMNW实施例1552.21737891549.87597.680.950实施例2583.47780148550.21598.050.950实施例3549.03781035585.39636.291.011实施例4580.52823844583.98634.761.008实验结果显示，本发明的检测及计算方法能够较方便、快捷地对玫瑰花饮料中精油含量及浓度进行检测。同时，实施例1与实施例2相比，实施例3和实施例4相比，色谱-质谱检测结果显示的各物质峰面积值均有所改变，但最终样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度值M并未有明显改变。这说明，在对样品进行预处理时，加入己酸烯丙酯能够促进萃取效果，而萃取效果的改善说明本发明的样品预处理方法即使对于较低浓度的样品也能够适用，从而扩大本发明的方法的使用范围。

权利要求：1.玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：配制内标液；S2：样品预处理，预处理过程中加入内标液；S3：将预处理后的样品进行色谱-质谱分析；S4：根据色谱-质谱分析结果，并结合内标液的浓度计算样品中香茅醇、β-苯乙醇、香叶醇和丁子香酚四种物质的浓度为M，mgL；S5：根据计算出的M值，计算样品中精油物质浓度N，mgL，N＝M÷0.92。2.根据权利要求1所述的玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于：在S5后面增加S6，根据计算出的N值计算样品中精油总量的相对浓度W，‰；W＝N÷629180×1000。3.根据权利要求1所述的玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于：S1步骤中，内标液为2-壬醇溶液。4.根据权利要求1所述的玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于：S2步骤中，样品预处理过程为将样品加入顶空瓶中，加入氯化钠及内标液，密封，磁力搅拌；插入萃取头，水浴条件下萃取，之后进行分析。5.根据权利要求1所述的玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于：S3步骤中，色谱条件为，毛细管色谱柱：WAXETR30m×0.25mm×0.50μm；柱温程序：起始温度50℃，恒温2min，以3℃min升温至80℃，以10℃min升温至115℃，以3℃min升温至240℃，保持5min；载气、高纯氦气：纯度≥99.999％；流速：1mLmin，不分流进样；进样口温度：230℃。6.根据权利要求1所述的玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于：S3步骤中，质谱条件为离子源温度：230℃；传输线温度：240℃；电子轰击源：70eV；扫描范围：29～300amu。7.根据权利要求1-6任一所述的玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于：S2步骤中，样品预处理时，向样品中加入己酸烯丙酯。8.根据权利要求7所述的玫瑰花饮料中精油的测定方法，其特征在于：己酸烯丙酯与样品的体积比为1:20。

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