申请/专利权人：上海雪榕生物科技股份有限公司

申请日：2018-09-28

公开（公告）日：2020-11-24

公开（公告）号：CN109452089B

主分类号：C12N1/14(20060101)

分类号：C12N1/14(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.11.24#授权;2019.04.05#实质审查的生效;2019.03.12#公开

摘要：本发明涉及食用菌领域，特别涉及白玉菇H7及其栽培方法。本发明得到的白玉菇H7，可以很好的适应白玉菇液体菌种生产模式，并且在缩短出菇周期、提高单产、优化产品形态等方面有显著效果，填补了白玉菇液体菌种栽培模式的空白。和市场上的白玉菇比较，白玉菇H7具有以下优点：1、在培养皿中的发菌速度最快，并且耐高温能力最好，培养后期长势也最好；2、通过拮抗实验初步判定白玉菇H7与参试的其他品种为不同白玉菇品种；3、在培养和栽培出菇阶段，总栽培周期最短，而产量最高，平均单产250克1100mL以上；4、农艺性状方面，本发明提供的H7菌株原基数量多，菌柄细长，容易长高，菇盖圆整白色。

主权项：1.白玉菇菌株，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.14987。

全文数据：白玉菇H7及其栽培方法技术领域本发明涉及食用菌领域，特别涉及白玉菇H7及其栽培方法。背景技术白玉菇别称白雪菇、白色蟹味菇、白色真姬菇、白玉蕈，属于伞菌目，口蘑科、白蘑属，是一种珍稀食用菌。白玉菇菇体洁白如玉，晶莹剔透；质地细腻，菇体脆嫩鲜滑，清甜可口。白玉菇含蛋白质较一般蔬菜为高，必需氨基酸比例合适，还有多种微量元素等人体必需物质，为起到良好的保健作用应长期食用。白玉菇有镇痛、镇静、止咳化痰、通便排毒、降压等功效。其营养丰富含有大量多糖和各种维生素，经常食用会改善人体的新陈代谢，降低胆固醇含量，白玉菇的有效成分可增强T淋巴细胞功能，从而提高机体抵御各种疾病的免疫力。巴西研究从白玉菇中提取到一种物质具有镇痛、镇静的功效，其镇痛效果可代替吗啡。白玉菇提取液用动物实验，发现其有明显的镇咳、稀化痰液的作用。鲜品价值高达30至40元，被誉为食用菌中的"金枝玉叶"，具有广阔的栽培前景和市场潜力。菇体形态：子实体丛生每丛15～50株不等，少散生。菌盖幼时半球形，深褐色，后渐平展，色泽变淡，呈黄褐色；中部色深，茶褐色；盖面平滑，有2～3圈斑纹；盖缘平或微下弯，稍波状；菌盖直径1.5～2.0厘米；菌肉白色，质韧而脆，致密。菌褶白色至浅黄色，弯生，有时略直生，密，不等长，离生。菌柄中生，圆柱形，长3～12厘米，幼时下部明显膨大，白色至灰白色，粗O.5～3.5厘米，上细下粗，充分生长时上下粗细几乎相同，多数稍弯曲，有黄褐色条纹，中实，老熟时内部松软。担孢子无色，平滑，球形，孢子印白色。分生孢子白色，培养条件不适宜时出现在气生菌丝末端。菌丝特征：白玉菇菌丝生长旺盛，发菌较快，黑褐色品系抗杂菌能力强，白色品系抗病虫害能力较弱。成熟的老菌丝能够分泌黄色液滴，形成菌皮。斜面培养基上菌丝浓白色，气生菌丝旺盛，爬壁能力强，老熟后呈浅土灰色。培养条件适宜，菌丝7～10天长满试管斜面；条件不适宜时，不易形成子实体。发育过程：白玉菇是典型的异宗结合食用菌，担孢子在适宜条件下萌发为单核菌丝，可亲合的单核菌丝融合，原生质交配形成双核菌丝，适宜条件下双核菌丝扭结形成原基，进而发育成成熟子实体。根据子实体不同发育阶段的形态特征，可人为地将其分为转色期、菇蕾期、显白期、成盖期、伸展期和成熟期。转色期白玉菇菌丝体长满培养容器达生理成熟后才具有结实能力，此时容器中的菌块由纯白色转为灰色。子实体分化前，先在培养料表面出现一薄层瓦灰色或土灰色短绒，因此称转色期。适宜条件下此期历时3～4天。菇蕾期培养料面转色后3～4天，短绒层菌丝开始扭结形成疣状凸起，进而发育成瓦灰色针头状菇蕾。在适宜条件下培养2～3天，长至0.5～1厘米时便进入显白期。显白期随着菇蕾的生长，在其尖端出现一个小白点，逐渐长大成直径1～3毫米的圆形白色平面，此为初生菌盖。这个阶段称为显白期。成盖期初生菌盖经2～3天的生长发育，白色平面开始凸起，颜色开始转深。3～4天后形成完整的菌盖，此时菌盖直径3～5毫米，深赭红色，边缘常密布小水珠，盖顶端开始出现网状斑纹，菌柄开始伸长、增粗。伸展期子实体菌盖形成后，生长速度加快，菌盖迅速平展、加厚，盖色变浅，菌柄迅速伸长、加粗。目前市场上白玉菇工厂化生产多是利用固体菌种栽培出菇，这种栽培模式的缺点是栽培周期较长，产量一般。发明内容有鉴于此，本发明提供一种白玉菇H7及其栽培方法。本发明通过系统选育得到的白玉菇新品种“雪榕白玉菇H7”，它可以很好的适应白玉菇液体菌种生产模式，并且在缩短出菇周期、提高单产、优化产品形态等方面有显著效果，填补了白玉菇液体菌种栽培模式的空白。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了白玉菇，其保藏编号为CGMCCNo.14987。本发明还提供了所述的白玉菇在制备镇痛、镇静、止咳化痰、通便排毒和或降压的药物中的应用。白玉菇含蛋白质较一般蔬菜为高，必需氨基酸比例合适，还有多种微量元素等人体必需物质，为起到良好的保健作用应长期食用。白玉菇有镇痛、镇静、止咳化痰、通便排毒、降压等功效。其营养丰富含有大量多糖和各种维生素，经常食用会改善人体的新陈代谢，降低胆固醇含量，白玉菇的有效成分可增强T淋巴细胞功能，从而提高机体抵御各种疾病的免疫力。巴西研究从白玉菇中提取到一种物质具有镇痛、镇静的功效，其镇痛效果可代替吗啡。白玉菇提取液用动物实验，发现其有明显的镇咳、稀化痰液的作用。鲜品价值高达30至40元，被誉为食用菌中的"金枝玉叶"，具有广阔的栽培前景和市场潜力。在上述技术方案的基础上，本发明还提供了所述的白玉菇的液体培养基，10L所述培养基包括：在上述技术方案的基础上，本发明还提供了所述的白玉菇的栽培培养基，以质量份计，包括如下组分：在上述技术方案的基础上，本发明还提供了所述的白玉菇的系统选育方法，取原始菌株经菌丝翻接、培养、搔菌、催蕾、子实体生长，选择菇形好的子实体组织分离接入PDA培养基中，选择产量高、菇体健壮、菇型好的菌株，获得所述白玉菇。在上述技术方案的基础上，本发明还提供了所述的白玉菇的培养方法，取所述的白玉菇接种至培养基培养。在本发明的一些具体实施方案中，所述培养包括菌丝翻接、摇瓶培养、发酵罐培养和栽培瓶培养。在本发明的一些具体实施方案中，所述菌丝翻接采用PDA培养基，所述白玉菇的接种量为1块菌块，菌块大小为5*5*3mm，活菌数约为7500cfug。在本发明的一些具体实施方案中，所述摇瓶培养采用本发明所述的液体培养基，所述白玉菇的接种量为4块菌块，每块菌块大小为5*5*3mm，活菌数约为7500cfug。在本发明的一些具体实施方案中，所述发酵罐培养采用本发明所述的液体培养基，所述白玉菇的接种量为600mL菌液，活菌数约为8300cfumL。在本发明的一些具体实施方案中，所述栽培瓶培养采用本发明所述的栽培培养基，所述白玉菇的接种量为20mL菌液，活菌数约为8300cfumL。在本发明的一些具体实施方案中，所述摇瓶培养的培养温度为21～23℃，培养转速为160rpmmin；培养时间为8天。在本发明的一些具体实施方案中，所述发酵罐培养的培养温度为22～23℃，培养时间为7天。在本发明的一些具体实施方案中，所述栽培瓶培养为于温度21～23℃、湿度65％～70％、CO2浓度2000～3000ppm的条件下培养70～90天。在本发明的一些具体实施方案中，，所述搔菌出菇的条件为：温度14～16℃、湿度95％～100％、CO2浓度2000ppm以下。在本发明的一些具体实施方案中，所述催蕾的条件为：温度为14℃～16℃，湿度为90％～95％，CO2浓度2000ppm以内，光照强度50lux～100lux，催蕾时间为8～10天。在本发明的一些具体实施方案中，所述子实体生长的条件为：温度控制为14℃～17℃，湿度为90％以上，CO2浓度为2000ppm以下，光照强度250～500lux，生长时间12～17天。本发明通过系统选育得到的白玉菇新品种“雪榕白玉菇H7”，它可以很好的适应白玉菇液体菌种生产模式，并且在缩短出菇周期、提高单产、优化产品形态等方面有显著效果，填补了白玉菇液体菌种栽培模式的空白。和市场上的白玉菇比较，本发明“雪榕白玉菇H7”具有以下优点：1、本发明提供的“雪榕白玉菇H7”在培养皿中的发菌速度最快，并且耐高温能力最好，培养后期长势也最好；2、通过拮抗实验初步判定“雪榕白玉菇H7”与参试的其他品种为不同白玉菇品种；3、在培养和栽培出菇阶段，本发明提供的“雪榕白玉菇H7”总栽培周期最短，而产量最高，平均单产250克1100mL以上；4、农艺性状方面，本发明提供的“雪榕白玉菇H7”菌株原基数量多，菌柄细长，容易长高，菇盖圆整白色。生物保藏说明生物材料：H7；分类命名：真姬菇Hypsizygusmarmoreus；于2017年12月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏编号为CGMCCNo.14987。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示本发明提供的白玉菇H7的系统选育流程；图2示本发明提供的白玉菇H7的生产工艺流程；图3示4个白玉菇菌株在不同温度下发菌速度的比较结果；图4示4个菌株不同温度下菌丝生长的形态；图5示4个菌株相互间的拮抗作用；图6示本发明提供的白玉菇H7的基因组DNA电泳图谱；图7示本发明提供的白玉菇H7菌株ITS系统发育树；图8示本发明提供的白玉菇H7菌株。具体实施方式本发明公开了一种白玉菇H7及其栽培方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。专业术语：搔菌：就是用搔菌机或手工去除老菌种块和菌皮，这是促使菌丝发生原基的重要措施，通过搔菌可使子实体从培养基表面整齐发生子实体：是高等真菌的产孢构造，即果实体，由已组织化了的菌丝体组成。在担子菌中又叫担子果，在子囊菌中又叫子囊果。无论是有性生殖还是无性生殖，无论结构简单或复杂，都称其产孢结构为子实体。原基：食用菌出菇之前，由菌丝缠绕扭结形成的一个一个小颗粒，长大后即为一个一个蘑菇。菌丝：单条管状细丝，为大多数真菌的结构单位，一些原核生物也有菌丝，如放线菌。菌丝体：很多菌丝聚集在一起组成真菌的营养体，即菌丝体。诱变育种：利用物理或化学等因素，使基因载体DNA分子产生变异，从中加以选择和利用的一种育种方法。物理因素如紫外线、x－射线、r—射线、同位素Co60和激光等。化学诱变剂都是直接作用于DNA分子，根据其化学性质或作用方式，一般可分为三大类：1碱基类似物，如5—溴尿嘧啶及a—氨基嘌呤等；2改变DNA碱基结构的诱变剂，如亚硝酸、硫酸二乙酯、甲基磺酸乙酯、亚硝基胍等；3移码诱变剂，如吖啶类、吡啶类、多环烃、含氮杂环致癌物、真菌毒素、抗菌素，研究较多的有吖啶类化合物。原生质体融合技术:指通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合，借以获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程。材料试验菌种H1：丰科白玉菇，已获得上海市品种认定H4：日本引进白玉菇原始菌株H7：由H4经系统选育而成，雪榕白玉菇H7H11：由日本提供的白玉菇菌株培养基PDA培养基：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、加蒸馏水至1000mL，自然pH。液体培养基：白砂糖200g、豆粕粉30g、磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5g、加自来水至10L，PH自然。栽培培养基：玉米芯53.5％、棉籽壳10％、米糠20％、麸皮10％％、玉米粉5％、添加剂1.5％，装瓶重量830-850克、含水量64％-66％。原料要求：白玉菇工厂化栽培原料主要有玉米芯、棉子壳、麸皮、米糠、玉米粉等。原料必须保持新鲜、干燥，无虫蛀和霉变现象，颗粒度符合设备和工艺要求。原料保存过程中应通风换气，保持储藏环境干燥。原料混合：按配方要求准确定量，使物料充分搅拌均匀，加水至含水量达到64％～66％，pH6.5-7.0。根据季节变化调整搅拌时间，防止混合料酸败，搅拌至装瓶结束。装瓶：使用耐高温塑料瓶，要求装料紧实度均匀，1100mL塑料瓶装瓶量830-850克，中间打孔至瓶底，装瓶后应立即盖上瓶盖。灭菌：装瓶结束后立即进行高压灭菌。灭菌时间为料的中心温度必须达到118℃-121℃，并保持30分钟，必须彻底杀灭培养料中的所有微生物及孢子。冷却：灭菌后瓶框推入冷却室进行强制冷却，冷却室、接种室安装净化装置和制冷设备。本发明提供的白玉菇及其培养方法中所用原料及试剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1液体种制备灭菌：液体培养基配制完成后，放入立式灭菌锅进行灭菌，灭菌工艺：121℃，保温60分钟。灭菌后将液体培养基放在洁净区冷却，待冷却至18℃～22℃即可接种；接种：超净工作台开启30min，紫外灯开启30min后，由专人穿戴接种专用洁净服，戴口罩、医用手套，穿洁净区工作鞋，风淋后进入洁净区，在超净工作台上无菌操作进行注：所用工具均经高温高压蒸汽消毒。将挑选好的平板种用接种工具接种到摇瓶中，撕掉挑选好待用的平板菌种的封口膜→用揭盖夹揭开平板盖→用托平板的夹子夹住平板→用接种钩刮掉平板表面的气生菌丝→用打孔器均匀打孔→将平板固定在托平板的夹子中→放到三脚架上→灼烧接种钩→放在工具架上冷却→取下铝铂纸，用坩埚钳取掉摇瓶的瓶塞，放在工具架上→用接种钩分别从平板的上下左右取4小块母种，放进摇瓶→塞上瓶塞，封上铝铂纸→接种结束，记录菌种批号和接种日期。培养：将已接菌种放入摇床震荡培养将接种好的摇瓶种放置在震荡培养器中培养，培养温度：22±1℃，培养转速：160rpmmin；培养时间：8天，培养终止后取出准备接栽培。实施例2栽培种制备每个菌株做10筐，共480瓶，搔菌后各随机抽取1筐，观察菌丝转色、原基显蕾时间、原基数量、整齐度、采收时间等农艺性状，全部采收后计算出平均单产。培养料搅拌均匀后通过装瓶机装填，1100mL塑料瓶每瓶装瓶重量在830-850g，含水量调至64％-66％，pH调节至6.5～7.0，高温灭菌，100℃保持60min，升温至121℃保持60min，后于冷却室中冷却至22℃以下，接入白玉菇液体菌种，接种量15-20mL。然后置于温度21-23℃、湿度65％-70％、CO2浓度2000-3000ppm的培养室内培养70-90天，搔菌出菇，放置于温度14-16℃、湿度95％-100％、CO2浓度2000ppm以下的生育室内出菇，期间给予一定的光线照射，达到采收标准后采收，称重。记录各种参数。接种操作人员必须符合无菌操作的要求，接种时瓶内温度控制在25℃以下，并使用显微镜检，确保液体菌种无污染且活力旺盛方可用于接种栽培，每个栽培瓶的接种量为20mL菌液,其中菌丝量湿重约为2.4g20mL，活菌数约为8300cfumL。实施例3培养生育出菇培养：培养室温度控制在21℃±2℃，湿度维持在70％～80％，CO2浓度控制在4000ppm以下。培养时间为70天～80天。搔菌：培养成熟后，进行搔菌处理。采用专用搔菌刀头，搔菌后注水，注水量15-20mL。催蕾：室内控制温度为14℃～16℃，湿度为90％～95％，CO2浓度2000ppm以内，光照强度50lux～100lux。催蕾时间为8-10天。子实体生长：温度控制为14℃～17℃，湿度为90％以上，CO2浓度为2000ppm以下，光照强度250～500lux，根据不同生长阶段，调整灯光开启时间。生长时间12-17天。采收包装：菌盖直径达到18mm，菌柄长度达到80mm，即可进行采收。采收时将整朵采下，剪去培养基，用自动包装机包装后入冷库，冷库温度控制在3℃～5℃。挖瓶：采收后的瓶框及时运至挖瓶区，把培养料挖除，空瓶筐运至装瓶区域重新使用，废料清运出厂。实施例4不同白玉菇品种营养生长阶段菌丝生长特征供试的4个不同白玉菇菌株在培养皿中的发菌速度存在明显差异见图3。培养温度在20-26℃发菌速度最快，“雪榕白玉菇H7”菌株发菌速度最快，在4个菌株中耐高温能力最强，H11菌株24℃时发菌速度最快，以后随着温度上升，发菌速度急剧下降，30℃时菌丝不萌发。实施例5培养10天后菌丝形态的差异菌丝培养10天后，不同温度下菌丝生长的状态见图4，“雪榕白玉菇H7”菌株发菌速度最快，菌丝的气生菌丝较少。实施例6不同菌株间菌丝拮抗从图5看出，不同菌株之间拮抗线非常明显，表明菌株间差异很大，初步判断为不同的白玉菇菌株。实施例7不同菌株在培养和栽培过程中比较由表1可见，“雪榕白玉菇H7”菌株总栽培周期最短，为103天，而产量最高。其他品种在发菌时菌丝密度不足，可能公司采用的玉米芯配方和液体菌种不适合这些菌种，造成发菌不良和产量低下。表1不同真姬菇菌株搔菌后子实体发育表现注：*示H7与其他组相比具有显著差异P＜0.05；#示H7与其他组相比具有极显著差异P＜0.01。由表1可见，品种“H7”的单产明显高出另外三个品种，平均高出72.33g瓶，其中差异最明显的是品种“H1”，品种“H7”的单产高出品种“H1”95g瓶。表2不同真姬菇菌株的单产表3独立样本生物统计学检验结果将品种“H7”和品种“H1”，“H4”，“H11”的单产数据利用生物统计学软件spss分析后得到图8，将品种“H7”和品种“H1”，“H4”，“H11”的单产数据利用生物统计学软件spss分析后得到图8，与对照菌相比，品种“H7”的单产具有极显著差异P＜0.01。实施例8不同品种的性状农艺性状的好坏直接关系到白玉菇作为商品的质量及食用菌工厂的成本。本次申请专利的雪榕白玉菇品种“雪榕白玉菇H7”比原始菌株产量有明显提高，平均单产250克1100mL以上，从产品形态看，H7菌株原基数量多，菌柄细长，容易长高。表4不同白玉菇菌株农艺性状实施例9“雪榕白玉菇H7”的分子鉴定供试品种BY1-H1，丰科白玉菇菌株BY2-H4，日本引进白玉菇出发菌株BY3-H7，经H4系统选育而成BY4-H11，日本引进白玉菇菌株供试培养基、试剂及配制方法1PDB液体培养基：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水定容至1L。2基因组DNA提取试剂：LETS缓冲液LiCl0.424g，EDTA0.372g，Tris0.242g，SDS0.5g将上述试剂称好后，溶于90ml的无菌重蒸水中，用HCl调节pH值至7.8-8.0，最后定容至100ml，按50mg：100ml加入蛋白酶KPCI试剂苯酚氯仿异戊醇比例为25：24：13ITS扩增反应试剂引物序列：本研究选用真菌通用引物ITS1FGardes&Bruns,1993ITS4Whiteetal.1990来扩增ITS区，引物序列如下ITS1F5’-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3’如SEQIDNo.2所示ITS45’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’如SEQIDNo.3所示引物由英骏维基生物技术有限公司合成，配制成10μM的反应液，-20℃分装保存备用。电泳用琼脂糖Spanish10×PCR反应缓冲液，25mMMgCl2，TaqDNA聚合酶Promega10mMdNTPGenview分装4DNA凝胶回收试剂盒Axygen主要使用仪器恒温磁力搅拌器上海司乐仪器厂生产，81-2型摇床上海一恒灭菌锅SS-325，TOMYSEIKOCO.LTD.真空冷冻干燥仪EDWARDS，4K2-4LPCR扩增仪MastercyclerGradientEppendorf水平板电泳仪BIO-RAD摄像系统ImageMasterVDSPharmaciaBiotech实验方法1菌丝培养及基因组DNA的提取将培养好的菌株PDA接入PDY液体培养基中，25-28℃振荡150rmin培养7-9天，收集菌丝，用无菌超纯水洗涤2-3次，冷冻干燥后，低温保存备用。采用改良过的LETS法提取基因组DNA。具体步骤如下：①将冻干的菌丝置于预冷的无菌研钵中研磨，加入适量的LETS缓冲液，12000rpm，4℃，离心20min②取上清，加入等体积的PCI试剂，轻轻混匀10min以上，12000rpm，4℃，离心10min，重复此步骤3-4次。③取上清，加入23体积的-20℃预冷的异丙醇，混匀，在-20℃冰箱中放置片刻，10000rpm，4℃，离心10min。④用75％乙醇、10mMKAc洗涤沉淀2次，10000rpm，4℃，离心5min。⑤吸干残液加-20℃预冷的95％乙醇，轻轻混匀，10000rpm，4℃，离心10min，自然晾干。⑥加适量TEbuffer溶解沉淀，加入2μlRNase1mgml37℃水浴1h去除RNA。⑦取2μlDNA样品经1％的琼脂糖凝胶电泳，检测DNA的质量。2ITS区的PCR扩增扩增反应体系25μl：10×PCRbuffer2.5μl，MgCl225mmolL2.0μl，dNTP10mmolL0.5μl，引物ITS1FITS410μmolL各1μl，Taq酶5Uμl0.25μl，DNA模板10ng，加无菌双蒸水补足。PCR反应条件为94℃2min；94℃15s，62℃30s，72℃1min，30个循环；72℃5min。反应结束后取10μl扩增产物，经1.2％琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色后置于VDS凝胶成像系统照相。3PCR扩增产物的纯化①PCR扩增产物经琼脂糖电泳后，在紫外灯下切取含有目的条带的琼脂糖凝胶。②称量凝胶重量，以1mg＝1μl换算凝胶体积。③加入3倍体积的BufferDE-A，悬浮均匀后75℃加热，每隔2-3分钟混合一次，直至凝胶完全融化，约6-8分钟凝胶块必须完全融化，以充分释放凝胶中的DNA。④按BufferDE-A体积的50％加入BufferDE-B，混合均匀。⑤将DNA-prepTube置于2mlMicrofugeTube中，将步骤5中的混合液移入DNA-prepTube中，12000g离心1分钟。⑥弃滤液，将DNA-prepTube置回到原2mlMicrofugeTube中，加入500μlBufferW1，12000g离心1分钟。⑦弃滤液，将DNA-prepTube置回到原2mlMicrofugeTube中，加入700μl已加无水乙醇的BufferW2，12000g离心1分钟，以同样的方法再用700μlBufferW2洗涤一次。⑧将DNA-prepTube置回到原2mlMicrofugeTube中，12000g离心1分钟。9将DNA-prepTube置于另一已灭菌的1.5ml离心管中，在silica膜中央加入25μl已65℃预热的洗脱液，室温静置1分钟。12000g离心1分钟洗脱DNA。⑨用无菌枪头取2μl经琼脂糖凝胶电泳检测回收效果。4ITS区的PCR扩增产物的序列测定序列测定委托上海生工公司进行测序。5ITS序列的准确定位和系统发育树的构建根据Genbank中已有白玉菇的ITS序列资料，确定ITS序列的长度。利用ClustalX2.1软件对FastA格式的DNA序列进行排列分析。将重排后得到的白玉菇ITS序列，以Hypsizygustessulatus作为外类群，利用MEGA4.1软件中的neighbour-joiningmethods进行聚类分析，建立基于ITS序列的系统发育树结果与分析1DNA提取效果，见图6。通过图1可以看出DNA的质量较好，完全可以满足本试验的要求。2ITS序列比对具体序列见附录序列比对结果。通过与GenBank中相关序列的比较分析确定，白玉菇的ITS序列长度为595bp左右。3各菌株间的遗传距离表5白玉菇的遗传距离BY1BY2BY3BY4JN234835BY1BY20.003BY30.0020.002BY40.0020.0020.000JN2348350.0000.0030.0020.002从表5可以看出，供试的白玉菇菌株遗传距离均极小，ITS序列差异均很小，这说明这些菌株ITS序列的演化速度较慢。4系统发育树，见图7。由图7可以看出，BY1同BY2、BY3及BY4有差异，但差异很小，而且同GenBank中的真姬菇JN234835亲缘关系也较近。5序列比对：序列比对结果1.白玉菇的ITS序列比对结果BY3TTGAATAAACTTGTTTGGGTTGTTGCTGGCTCTTAGGAGCATGTGCACGCCTGACACATTBY4.........................................................JN..........................................................BY2.........................................................BY1.........................................................BY3TTTACCACCTGTGCACCCTTTGTAGACCTGGAACACCTCTCGAGGTAACTCGGTTTGAGGBY4.........................................................JN..........................................................BY2..........................................C..............BY1.........................................................BY3ATTGCCGCTGCTGAAAAGCCGGCTTTCCTTGCGTTCCCGGTCTATGTCTTTATATACCCCBY4......................................................JN.......................................................BY2......................................................BY1......................................................BY3ATGAATGTAACTGAATGTCTTTAATGGGCCTTAGTGCCTTTAAATCAAATACAACTTTCABY4......................................................JN.......................................................BY2......................................................BY1......................................................BY3ACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTBY4........................................................JN.........................................................BY2........................................................BY1........................................................BY3GAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCBY4........................................................JN.........................................................BY2........................................................BY1........................................................BY3CGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATTAAATTCTCAACCTTTCCAGCTTTTATTAGCTTBY4........................................................JN.........................................................BY2........................................................BY1........................................................BY3GGTCAGGCTTGGATGTGGGGGTTGCGGGCTTCTCAGAAGTCGGCTCTCCTTAAATGCATTBY4........................................................JN.........................................................BY2........................................................BY1........................................................BY3AGCGGAACCTTTGTTGACCAGCTCTGGTGTGATAATTATCTACGCCATTGCGAAGCAGCTBY4........................................................JN.........................................................BY2........................................................BY1........................................................BY3TTAATTATGGGGTTCAGCTTCTAACCGTCCCCTTCACGGGACAACTCTCTGACATBY4.......................................................JN.....A..................................................BY2.......................................................BY1.....A.................................................2白玉菇H7的DNA测序结果如SEQIDNo.1所示TGCGGAAGGATCATTATTGAATAAACTTGTTTGGGTTGTTGCTGGCTCTTAGGAGCATGTGCACGCCTGACACATTTTTACCACCTGTGCACCCTTTGTAGACCTGGAACACCTCTCGAGGTAACTCGGTTTGAGGATTGCCGCTGCTGAAAAGCCGGCTTTCCTTGCGTTCCCGGTCTATGTCTTTATATACCCCATGAATGTAACTGAATGTCTTTAATGGGCCTTAGTGCCTTTAAATCAAATACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATTAAATTCTCAACCTTTCCAGCTTTTATTAGCTTGGTCAGGCTTGGATGTGGGGGTTGCGGGCTTCTCAGAAGTCGGCTCTCCTTAAATGCATTAGCGGAACCTTTGTTGACCAGCTCTGGTGTGATAATTATCTACGCCATTGCGAAGCAGCTTTAATTATGGGGTTCAGCTTCTAACCGTCCCCTTCACGGGACAACTCTCTGACATTTTGACCT-CAAAT-CAGGTA-GGATTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAT虽然白玉菇的ITS序列比对结果和系统发育树表明供试的4个菌株在ITS序列上没有较大差异，亲缘关系较近，但不能排除在人工作用下它们的子实体在外观、产量等农艺性状上有差异甚至是显著差异，即品种间的差异。实施例10生物学特征菌丝体：“雪榕白玉菇H7”菌丝在20-26℃生长旺盛，略淡、稀疏，菌丝生长速度快，耐高温能力强。菌盖：“雪榕白玉菇H7”菌盖伞形，呈乳白色，表面有浅浅的白色斑纹，大小基本一致，菌盖直径12-22毫米，边缘整齐菌褶：“雪榕白玉菇H7”菌株菌褶为白色，长短交替，与菌柄的着生关系均是直生。菌柄：“雪榕白玉菇H7”菌株菌柄粗壮，较长，中间直径为8-12毫米，上略细下粗，菌柄长60-100毫米，肉质，脆嫩，菌柄与菌盖的着生关系是中生，菌柄白色或略带浅黄色。子实体：子实体丛生，基部相连，菌肉白色，无任何苦味孢子：孢子印均为白色，产孢子能力强，孢子卵球形，直径5微米左右。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。序列表上海雪榕生物科技股份有限公司白玉菇H7及其栽培方法MP18073023SIPOSequenceListing1.01660DNAH7H71tgcggaaggatcattattgaataaacttgtttgggttgttgctggctcttaggagcatgt60gcacgcctgacacatttttaccacctgtgcaccctttgtagacctggaacacctctcgag120gtaactcggtttgaggattgccgctgctgaaaagccggctttccttgcgttcccggtcta180tgtctttatataccccatgaatgtaactgaatgtctttaatgggccttagtgcctttaaa240tcaaatacaactttcaacaacggatctcttggctctcgcatcgatgaagaacgcagcgaa300atgcgataagtaatgtgaattgcagaattcagtgaatcatcgaatctttgaacgcacctt360gcgctccttggtattccgaggagcatgcctgtttgagtgtcattaaattctcaacctttc420cagcttttattagcttggtcaggcttggatgtgggggttgcgggcttctcagaagtcggc480tctccttaaatgcattagcggaacctttgttgaccagctctggtgtgataattatctacg540ccattgcgaagcagctttaattatggggttcagcttctaaccgtccccttcacgggacaa600ctctctgacattttgacctcaaatcaggtaggattacccgctgaacttaagcatatcaat660222DNA人工序列ArtificialSequence2cttggtcatttagaggaagtaa22320DNA人工序列ArtificialSequence3tcctccgcttattgatatgc20

权利要求：1.白玉菇，其特征在于，其保藏编号为CGMCCNo.14987。2.如权利要求1所述的白玉菇在制备镇痛、镇静、止咳化痰、通便排毒和或降压的药物中的应用。3.如权利要求1所述的白玉菇的液体培养基，其特征在于，10L所述培养基包括：4.如权利要求1所述的白玉菇的栽培培养基，其特征在于，以质量份计，包括如下组分：5.如权利要求1所述的白玉菇的系统选育方法，其特征在于，取原始菌株经菌丝翻接、培养、搔菌、催蕾、子实体生长，选择菇形好的子实体组织分离接入PDA培养基中，选择产量高、菇体健壮、菇型好的菌株，获得所述白玉菇。6.如权利要求1所述的白玉菇的培养方法，其特征在于，取如权利要求1所述的白玉菇接种至培养基培养。7.如权利要求5或6所述的培养方法，其特征在于，所述培养包括菌丝翻接、摇瓶培养、发酵罐培养和栽培瓶培养。8.如权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述菌丝翻接采用PDA培养基，所述白玉菇的接种量为1块菌块，菌块大小为5*5*3mm，活菌数约为7500cfug；所述白玉菇的接种量为4块菌块，每块菌块大小为5*5*3mm，活菌数约为7500cfug；所述白玉菇的接种量为600mL菌液，活菌数约为8300cfumL；所述白玉菇的接种量为20mL菌液，活菌数约为8300cfumL。9.如权利要求7或8所述的培养方法，其特征在于，所述摇瓶培养的培养温度为21～23℃，培养转速为160rpmmin；培养时间为8天；所述发酵罐培养的培养温度为22～23℃，培养时间为7天；所述栽培瓶培养为于温度21～23℃、湿度65％～70％、CO2浓度2000～3000ppm的条件下培养70～90天。10.如权利要求7至9任一项所述的培养方法，其特征在于，所述搔菌后催蕾的条件为：温度为14℃～16℃，湿度为90％～95％，CO2浓度2000ppm以内，光照强度50lux～100lux，催蕾时间为8～10天；所述子实体生长的条件为：温度控制为14℃～17℃，湿度为90％以上，CO2浓度为2000ppm以下，光照强度250～500lux，生长时间12～17天。

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