申请/专利权人：浙江海洋学院

申请日：2014-06-20

公开（公告）日：2020-11-27

公开（公告）号：CN105194645B

主分类号：A61K38/01(20060101)

分类号：A61K38/01(20060101);C12P21/06(20060101);C07K1/36(20060101);C07K1/34(20060101);C07K1/16(20060101);C07K1/20(20060101);A61P35/00(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.11.27#授权;2016.01.27#实质审查的生效;2015.12.30#公开

摘要：本发明涉及一种泥螺多肽在抗前列腺癌中的应用，尤其涉及泥螺多肽在抗前列腺癌DU‑145细胞药物的应用。利用胰蛋白酶酶解法获取泥螺多肽粗提物，并且通过超滤法、凝胶柱分离法以及反相高效液相色谱技术等分离纯化手段获得各泥螺多肽组分，分别研究各分离组分对前列腺癌DU‑145细胞的增殖抑制性，研究发现各组分均能显著抑制前列腺癌DU‑145细胞增殖。本发明原料成本低，提取条件简单温和，提取的泥螺多肽对前列腺癌DU‑145细胞增殖抑制效果显著，为开发以泥螺多肽为原料的抗前列腺癌药物提供理论依据。

主权项：1.一种泥螺多肽在制备抗前列腺癌DU-145细胞药物中的应用，其特征在于所述泥螺多肽通过以下步骤制得：新鲜泥螺洗净去壳，取泥螺组织捣碎，加入蒸馏水匀浆，料液比为1:3～4，匀浆后调节匀浆液的pH值为8～9，加入0.4～0.5％匀浆液质量的胰蛋白酶，40～50℃保温水解7～9h，水解完成后95～100℃、10～15min进行灭酶，4℃下水解液于9500～10000rmin离心15～20min，取上清液浓缩干燥得酶解粗提物，将酶解粗提物溶于蒸馏水，经超滤、凝胶层析及反相高效液相色谱分离纯化得各泥螺多肽组分，所述超滤步骤中使用10kd、5kd及3kd超滤膜，分别获得分子量为10～5kd的组分A1，分子量为5～3kd的组分A2以及分子量小于3kd的组分A3，20～25mgml组分A3作用于DU-145细胞36h后的增殖抑制率为77～78％，且增殖抑制指数与组分A3的浓度呈正相关，所述凝胶层析中对组分A3进行洗脱，分别获得H1组分、H2组分和H3组分，其中5～20mgml组分H2作用于DU-145细胞24h后的增殖抑制指数为为44.1～81.6％，且增殖抑制指数与组分H2的浓度呈正相关；凝胶层析条件：选用SephadexG-25凝胶层析，装柱后用去离子水平衡，浓度为50mgmL、上样量为4mL、速度为3mlmin，流动相为超纯水，280nm紫外检测，采用反相高效液相色谱分离所述H2组分，分离获得组分F1和F2，其中2.5～3mgml组分F1和组分F2作用于DU-145细胞24h后，对DU-145细胞的增殖抑制率分别为31～33.72％和40～42.04％，所述组分F1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所述，组分F2的氨基酸序列如SEQIDNO.2所述；反相高效液相色谱条件：选用ZorbaxSB-C184.6×250，5um；柱温为20℃；流动相为1％TFA和乙腈；梯度洗脱：从开始到30min结束，乙腈浓度从0变化到40％，洗脱速度为1.0mLmin；进样体积为50ul；紫外检测波长分别为214nm、280nm。

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