申请/专利权人：常州市第一人民医院

申请日：2019-02-25

公开（公告）日：2020-11-27

公开（公告）号：CN109749979B

主分类号：C12N5/00(20060101)

分类号：C12N5/00(20060101);C12M1/00(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.11.27#授权;2019.06.07#实质审查的生效;2019.05.14#公开

摘要：本发明属于细胞分选技术领域，具体涉及一种原代细胞分选方法，本原代细胞分选方法包括：若选取的原代细胞中含有N种细胞，则需对应设置有N‑1个细胞筛选装置，且由控制器对上述细胞筛选装置进行控制，以对原代细胞进行分选；本原代细胞分选方法，采用细胞分选系统对原代细胞进行分选，能实现原代细胞的分选。

主权项：1.一种原代细胞分选方法，包括：若选取的原代细胞中含有N种细胞，则需对应设置有N-1个细胞筛选装置，且由控制器对上述细胞筛选装置进行控制，以对原代细胞进行分选；若N为2种细胞，则采用一个细胞筛选装置对两种原代细胞进行分选；所述细胞筛选装置包括：培养皿，所述培养皿的下方设置有振动器；其中所述振动器与控制器电性连接；所述培养皿的侧壁开设有出水口，以及在出水口处设置有出水阀；所述控制器控制振动器振动，以使培养皿中未贴壁细胞上浮；在培养皿中培养液的液位高于出水口后，所述控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液；所述培养皿还设置有进水口，所述进水口处设置有进水阀；当控制器控制进水阀打开后，从进水口向培养皿内补充培养液；所述培养皿内设置有液位计，所述液位计与控制器相连；以及所述控制器通过液位计控制进水阀和出水阀的开度，以使培养皿内培养液的液位与出水口的上沿高度保持近似持平；具体地，振动器的振动起始时间、持续时间以及振动频率，根据细胞的类型进行调整。

全文数据：一种原代细胞分选方法技术领域本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种原代细胞分选方法。背景技术在培养原代细胞时，因原代细胞的提取往往会混有其他细胞，对培养结果造成一定的影响，此时必须将其他细胞分选出来。因此，设计一种原代细胞分选方法是有必要的。发明内容本发明的目的是提供一种原代细胞分选方法。为了解决上述技术问题，本发明提供了一种原代细胞分选方法，包括：若选取的原代细胞中含有N种细胞，则需对应设置有N-1个细胞筛选装置，且由控制器对上述细胞筛选装置进行控制，以对原代细胞进行分选。进一步，若N为2种细胞，则采用一个细胞筛选装置对两种原代细胞进行分选；所述细胞筛选装置包括：培养皿，所述培养皿的下方设置有振动器；其中所述振动器与控制器电性连接；所述培养皿的侧壁开设有出水口，以及在出水口处设置有出水阀；所述控制器控制振动器振动，以使培养皿中未贴壁细胞上浮；在培养皿中培养液的液位高于出水口后，所述控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液。进一步，所述培养皿还设置有进水口，所述进水口处设置有进水阀；当控制器控制进水阀打开后，从进水口向培养皿内补充培养液；所述培养皿内设置有液位计，所述液位计与控制器相连；以及所述控制器通过液位计控制进水阀和出水阀的开度，以使培养皿内培养液的液位与出水口的上沿高度保持近似持平。进一步，若N为3种细胞以上，则将采用多个细胞筛选装置连级设置，以对多种原代细胞进行逐次分选；所述细胞筛选装置包括：培养皿，所述培养皿的下方设置有振动器；其中所述振动器与控制器电性连接；所述培养皿的侧壁开设有出水口，以及在出水口处设置有出水阀；所述控制器控制振动器振动，以使培养皿中未贴壁细胞上浮；在培养皿中培养液的液位高于出水口后，所述控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液至下一细胞筛选装置的培养皿中。进一步，所述培养皿还设置有进水口，所述进水口处设置有进水阀；当控制器控制进水阀打开后，从进水口向培养皿内补充培养液；所述培养皿内设置有液位计，所述液位计与控制器相连；以及所述控制器通过液位计控制进水阀和出水阀的开度，以使培养皿内培养液的液位与出水口的上沿高度保持近似持平。进一步，根据各种细胞贴壁时间不同，控制器控制相应细胞筛选装置中振动器的起振时间；即前一级相应细胞筛选装置振动后该级培养皿内未贴壁细胞上浮；当前一级的培养皿中培养液的液位高于出水口后，所述控制器控制出水阀打开，以向下一级细胞筛选装置泄放含有未贴壁细胞的培养液，使贴壁细胞保留；逐次分选，以使相应细胞筛选装置内的培养皿中保留同一类型细胞，实现细胞分选。本发明的有益效果是，本发明的一种原代细胞分选方法，通过在培养皿的下方设置有振动器，培养皿的侧壁开设有出水口，在出水口处设置有出水阀，控制器控制振动器振动，以使培养皿中未贴壁细胞上浮；在培养皿中培养液的液位高于出水口后，控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液。本原代细胞分选方法操作简单，可分选出原代细胞中的其他细胞。附图说明下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。图1是本发明细胞筛选装置的示意图；图2是本发明细胞筛选装置的连级装置的示意图。图中：振动器1，培养皿2，进水口201，出水口202，水泵3。具体实施方式现在结合附图对本发明作进一步详细的说明。这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本发明的基本结构，因此其仅显示与本发明有关的构成。实施例1图1是本发明细胞筛选装置的示意图；如图1所示，本实施例提供了一种原代细胞分选方法，采用一个细胞筛选装置对两种原代细胞进行分选，所述细胞筛选装置包括：培养皿2，所述培养皿2的下方设置有振动器1；其中所述振动器1与控制器电性连接；所述培养皿2的侧壁开设有出水口202，以及在出水口202处设置有出水阀；所述控制器控制振动器1振动，以使培养皿2中未贴壁细胞上浮；在培养皿2中培养液的液位高于出水口202后，所述控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液。在本实施例中，振动的起始时间和持续时间以及振动的频率均可以根据细胞的类型进行调整，例如在细胞开始培养3小时后开始振动，振动持续时间可以在1分钟，振动频率可以是30-60HZ范围。进一步，所述培养皿2还设置有进水口201，所述进水口201处设置有进水阀；当控制器控制进水阀打开后，从进水口201向培养皿2内补充培养液，以保证在无人值守的时候，培养皿2中的培养液能够保持细胞继续培育生长；提高了细胞分选系统的自动化分选程度。本实施例中，所述培养皿2内设置有液位计，所述液位计与控制器相连；以及所述控制器通过液位计控制进水阀和出水阀的开度，以使培养皿2内培养液的液位与出水口202的上沿高度保持近似持平，以使悬浮的未贴壁细胞能够尽可能多的从出水口202流出，提高分选效率。所述控制器可以采用带有嵌入式处理器的工控板，带有若干IO端口，可以与振动器相连，振动器可以但不限于采用振动电机；并且本工控板还具有显示接口和USB接口，可以用于连接显示器和键盘以进行相应参数设置。例如：在培养心肌细胞时会混有少量的成纤维细胞，此时需要分选出成纤维细胞，而成纤维细胞贴壁的速度比心肌细胞快，在成纤维细胞贴壁后，控制器控制振动器振动，以使培养皿2中心肌细胞上浮；控制器控制进水阀打开后，从进水口201向培养皿2内补充培养液；当培养皿2中培养液的液位高于出水口202后，控制器控制出水阀打开，以泄放含有心肌细胞的培养液，使成纤维细胞保留，将泄放含有心肌细胞的培养液收集起来以供使用。若选取的原代细胞中含有N种细胞，则需对应设置有N-1个细胞筛选装置。本实施例中，N为2个。则控制器控制振动器振动，以使培养皿2中未贴壁细胞上浮；在培养皿2中培养液的液位高于出水口202后，所述控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液，使贴壁细胞保留。本实施例中，原代细胞分选方法仅适用于贴壁型原代细胞或者是一个贴壁型细胞和一个非贴壁型细胞的分选。实施例2图2是本发明细胞筛选装置的连级装置的示意图。如图2所示，在实施例1的基础上，本实施例提供了一种原代细胞分选方法，若细胞筛选装置为两个以上，则采用连级设置，即前一级的细胞筛选装置的出水口202与后一级的细胞筛选装置的进水口201连通，以将前一级未贴壁细胞的细胞输送至后一级的细胞筛选装置中培养，实现细胞分选。其中，前一级的细胞筛选装置的出水口202与后一级的细胞筛选装置的进水口201通过一个水泵3连通，以使前一级的细胞筛选装置中培养皿2的低位的出水口202将未贴壁细胞的细胞顺利输送至后一级的细胞筛选装置中培养皿2的高位的进水口201。本实施例中，N为3个以上。根据各种细胞贴壁时间不同，控制器控制相应细胞筛选装置中振动器1的起振时间；即前一级相应细胞筛选装置振动后该级培养皿2内未贴壁细胞上浮；所述前一级细胞筛选装置的控制器控制进水阀打开后，从进水口201向培养皿2内补充培养液；当前一级的培养皿2中培养液的液位高于出水口202后，所述控制器控制出水阀打开，以向下一级细胞筛选装置泄放含有未贴壁细胞的培养液，使贴壁细胞保留；逐次分选，以使相应细胞筛选装置内的培养皿2中保留同一类型细胞，实现细胞分选。本实施例中，各种细胞根据不同的组织获取方法不同，细胞的贴壁时间有区别，收集细胞时用的消化酶（胶原酶和胰蛋白酶等）的种类和浓度不同也会造成贴壁时间有区别，因此本实施例中的各种细胞贴壁时间没有确定的数值，只要是分选不同的细胞都在本发明的保护范围内。本实施例中，原代细胞分选方法仅适用于贴壁型原代细胞。综上所述，本发明的一种原代细胞分选方法，通过在培养皿的下方设置有振动器，培养皿的侧壁开设有出水口，在出水口处设置有出水阀，控制器控制振动器振动，以使培养皿中未贴壁细胞上浮；在培养皿中培养液的液位高于出水口后，控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液，本原代细胞分选方法操作简单，可分选出原代细胞中的其他细胞；本原代细胞分选方法可以根据原代细胞中含有N种细胞而设置N-1个细胞筛选装置，能够分选多种细胞，具有筛选细胞实用性强的优点。以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。

权利要求：1.一种原代细胞分选方法，包括：若选取的原代细胞中含有N种细胞，则需对应设置有N-1个细胞筛选装置，且由控制器对上述细胞筛选装置进行控制，以对原代细胞进行分选。2.如权利要求1所述的原代细胞分选方法，其特征在于，若N为2种细胞，则采用一个细胞筛选装置对两种原代细胞进行分选；所述细胞筛选装置包括：培养皿，所述培养皿的下方设置有振动器；其中所述振动器与控制器电性连接；所述培养皿的侧壁开设有出水口，以及在出水口处设置有出水阀；所述控制器控制振动器振动，以使培养皿中未贴壁细胞上浮；在培养皿中培养液的液位高于出水口后，所述控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液。3.如权利要求2所述的原代细胞分选方法，其特征在于，所述培养皿还设置有进水口，所述进水口处设置有进水阀；当控制器控制进水阀打开后，从进水口向培养皿内补充培养液；所述培养皿内设置有液位计，所述液位计与控制器相连；以及所述控制器通过液位计控制进水阀和出水阀的开度，以使培养皿内培养液的液位与出水口的上沿高度保持近似持平。4.如权利要求1所述的原代细胞分选方法，其特征在于，若N为3种细胞以上，则将采用多个细胞筛选装置连级设置，以对多种原代细胞进行逐次分选；所述细胞筛选装置包括：培养皿，所述培养皿的下方设置有振动器；其中所述振动器与控制器电性连接；所述培养皿的侧壁开设有出水口，以及在出水口处设置有出水阀；所述控制器控制振动器振动，以使培养皿中未贴壁细胞上浮；在培养皿中培养液的液位高于出水口后，所述控制器控制出水阀打开，以泄放含有未贴壁细胞的培养液至下一细胞筛选装置的培养皿中。5.如权利要求4所述的原代细胞分选方法，其特征在于，所述培养皿还设置有进水口，所述进水口处设置有进水阀；当控制器控制进水阀打开后，从进水口向培养皿内补充培养液；所述培养皿内设置有液位计，所述液位计与控制器相连；以及所述控制器通过液位计控制进水阀和出水阀的开度，以使培养皿内培养液的液位与出水口的上沿高度保持近似持平。6.如权利要求5所述的原代细胞分选方法，其特征在于，根据各种细胞贴壁时间不同，控制器控制相应细胞筛选装置中振动器的起振时间；即前一级相应细胞筛选装置振动后该级培养皿内未贴壁细胞上浮；当前一级的培养皿中培养液的液位高于出水口后，所述控制器控制出水阀打开，以向下一级细胞筛选装置泄放含有未贴壁细胞的培养液，使贴壁细胞保留；逐次分选，以使相应细胞筛选装置内的培养皿中保留同一类型细胞，实现细胞分选。

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