申请/专利权人：浙江省农业科学院

申请日：2020-09-03

公开（公告）日：2021-01-01

公开（公告）号：CN112159819A

主分类号：C12N15/62(20060101)

分类号：C12N15/62(20060101);C12N15/866(20060101);C12N15/66(20060101);A01K67/04(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.03.18#授权;2021.01.19#实质审查的生效;2021.01.01#公开

摘要：小黄鱼生长激素生物反应器家蚕品系的构建方法，属于家蚕转基因遗传育种技术领域。该方法包括：（1）合成小黄鱼生长激素与转铁蛋白融合基因；（2）获得piggBAC转基因质粒pLX‑Red‑PcGH‑TF；（3）转基因质粒导入家蚕受精卵；（4）获得G1代蚕卵；（5）筛选标记基因阳性个体；（6）验证小黄鱼生长激素在家蚕中高效表达；（7）鉴定遗传稳定性；（8）建立小黄鱼生长激素生物反应器家蚕品系。本发明一方面，高效低成本生产小黄鱼生长激素，并可以进一步加工成小黄鱼功能性添加剂，应用于小黄鱼养殖。另一方面，缓解了蚕桑生产面临的发展困境，提高蚕桑产业效益的效果。

主权项：1.小黄鱼生长激素生物反应器家蚕品系的构建方法，其特征在于包括以下步骤：（1）设计并合成小黄鱼生长激素与转铁蛋白融合基因,插入启动子、终止子和His标签，得到含有优化融合基因序列的pUC57-PcGH-TF质粒，该pUC57-PcGH-TF质粒的插入片段序列如SEQIDNo.1所示；（2）将piggBAC载体pXL-Red与步骤（1）得到的pUC57-PcGH-TF质粒的插入片段体外重组，获得piggBAC转基因质粒pXL-Red-PcGH-TF，该转基因质粒pXL-Red-PcGH-TF的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；（3）将步骤（2）得到的piggBAC转基因质粒pXL-Red-PcGH-TF导入家蚕受精卵；（4）饲养G0代家蚕，获得G1代蚕种；（5）在G1代幼虫中，筛选标记基因阳性个体，并以F为正向引物和R为反向引物，采用PCR鉴定和测序鉴定小黄鱼生长激素与转铁蛋白融合基因插入家蚕基因中，所述正向引物F的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，反向引物R的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示；（6）对G1代阳性个体，采用定性和定量检测验证小黄鱼生长激素的表达水平，筛选建立小黄鱼生长激素高效表达的生物反应器家系；（7）对步骤（6）建立的生物反应器家系，与家蚕皓月品种连续回交4代，鉴定小黄鱼生长激素与转铁蛋白融合基因在家蚕基因组中的遗传稳定性和表达稳定性；（8）建立小黄鱼生长激素生物反应器家蚕品系。

全文数据：

权利要求：

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