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【发明授权】一种流感病毒亚单位疫苗原液制备方法_天津中逸安健生物科技有限公司_202011081958.X 

申请/专利权人:天津中逸安健生物科技有限公司

申请日:2020-10-12

公开(公告)日:2021-01-01

公开(公告)号:CN111920944B

主分类号:A61K39/145(20060101)

分类号:A61K39/145(20060101);A61P31/16(20060101);C07K14/11(20060101);C07K1/34(20060101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2021.01.01#授权;2020.12.01#实质审查的生效;2020.11.13#公开

摘要:本发明公开了一种流感病毒亚单位疫苗原液制备方法。属于生物工程技术领域。包括将病毒接种于鸡胚尿囊腔,经病毒增殖、冷胚、澄清和灭活得病毒尿囊收获液;对流感病毒尿囊收获液进行浓缩和超滤膜透析处理,得病毒浓缩液;将病毒浓缩液凝胶层析收集洗脱液,得洗脱病毒液;在洗脱病毒液中加入裂解剂,震荡后,得裂解病毒液;超速离心处理裂解病毒液,收集蔗糖质量分数为3~15%之间的蛋白溶液;对蛋白溶液超滤膜透析和浓缩处理,收集得到脱糖蛋白溶液经滤膜过滤,即得流感病毒亚单位疫苗原液。本发明能降低流感病毒亚单位疫苗中的卵清蛋白、裂解剂和甲醛等杂质的含量,减少不良反应的发生,增加抗原收率及纯度,提高疫苗的安全性、有效性。

主权项:1.一种流感病毒亚单位疫苗原液制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将病毒接种于鸡胚尿囊腔,经病毒增殖、冷胚、澄清和灭活得病毒尿囊收获液;(2)超滤浓缩I:对流感病毒尿囊收获液超滤浓缩处理,得病毒浓缩液,再经透析处理;(3)纯化病毒:将透析后的病毒浓缩液凝胶层析收集洗脱液,得洗脱病毒液;(4)裂解病毒:在洗脱病毒液中加入裂解剂,震荡后,得裂解病毒液;(5)纯化抗原:超速离心处理裂解病毒液,收集蔗糖质量分数为3~15%之间的蛋白溶液;(6)超滤浓缩II:对步骤(5)得到的蛋白溶液超滤浓缩处理,得浓缩蛋白溶液,再经透析处理,得脱糖蛋白溶液;(7)将脱糖蛋白溶液经滤膜过滤,即得流感病毒亚单位疫苗原液;步骤(2)所述超滤和所述透析的膜规格为相对分子量300kD;所述浓缩的程度至流感病毒尿囊收获液与病毒浓缩液的体积比为30:1;所述透析的透析液与所述病毒浓缩液的体积比为5:1;步骤(6)所述超滤和所述透析的膜规格为相对分子质量100kD,所述浓缩的程度至蛋白溶液与浓缩蛋白溶液的体积比为10:1;所述透析的透析液和所述浓缩蛋白溶液体积比5:1;步骤(1)所述澄清:用离心法或者过滤法澄清,除去不溶性杂质,得单价病毒合并液;步骤(5)所述纯化抗原具体为:1)分别配制质量分数为5%,30%和50%的蔗糖溶液;启动超速离心机,在1000rpm,20℃条件下抽真空,加入PBS或生理盐水排转子中气泡,依次加入质量分数为5%,30%的蔗糖溶液制作梯度层;2)设定25000rpm,温度20℃,将裂解病毒液为样品加入离心机,控制流速为50mlmin,上样量不大于6L台次;样品加完后,加入PBS、控制流速10mlmin持续运行4h,然后离心机转速降到3000rpm,由离心机边孔进质量分数为50%的蔗糖溶液,收集蔗糖质量分数为3~15%之间的蛋白溶液。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 天津中逸安健生物科技有限公司 一种流感病毒亚单位疫苗原液制备方法

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