申请/专利权人：云南海沣药业有限公司

申请日：2018-06-04

公开（公告）日：2021-01-05

公开（公告）号：CN108409752B

主分类号：C07D498/22(20060101)

分类号：C07D498/22(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.01.05#授权;2018.09.11#实质审查的生效;2018.08.17#公开

摘要：本发明公开了一种鸭脚树叶碱提取分离的方法，该方法以灯台叶为原料，采用酸水提取、氯仿萃取、树脂柱层析分离、硅胶柱层析分离、重结晶等工艺过程，制得含量98%以上的产品，本发明方法能有效分离鸭脚树叶碱，去除杂质，且方法简单，易操作，适于工业化生产和市场推广应用。

主权项：1.一种鸭脚树叶碱的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在干燥的灯台叶中加入其质量5～7倍的酸水煎煮2～3次，每次2～3小时，过滤；合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10，用氯仿萃取三次，除去氯仿层，剩余萃余液用碱调pH至9～10，再用氯仿萃取三次，收集合并氯仿萃取液，浓缩干燥后得生物碱；所述步骤（1）中的酸水为质量浓度0.1～0.2%的硫酸水溶液或盐酸水溶液；（2）生物碱用体积浓度80～90%的乙醇溶液或甲醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.01～0.02%的三乙胺水溶液，使滤液中乙醇或甲醇浓度为25～30%，然后通过树脂柱吸附生物碱，先用3～4倍柱体积的洗脱液Ⅰ洗脱杂质，再用洗脱液Ⅱ洗脱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩，干燥即得鸭脚树叶碱粗品，其中洗脱液Ⅰ是将三乙胺添加到质量浓度40～45%的乙醇水溶液或甲醇水溶液中制得质量浓度0.01～0.02%的三乙胺甲醇水溶液或三乙胺乙醇水溶液；洗脱液Ⅱ是将三乙胺添加到质量浓度50～55%的乙醇水溶液或甲醇水溶液中制得质量浓度0.01～0.02%的三乙胺甲醇水溶液或三乙胺乙醇水溶液；所述树脂柱中的树脂为聚酰胺树脂；（3）鸭脚树叶碱粗品用其质量4～5倍的氯仿溶解后，上入硅胶柱中，先用2～3倍柱体积氯仿洗脱，再用氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥即得鸭脚树叶碱；（4）将步骤（3）鸭脚树叶碱用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作2～3次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱所述步骤（3）中梯度洗脱时先用3～4倍柱体积的体积比为75～80:20～25的氯仿-乙酸乙酯洗脱杂质，再用体积比为65～70:30～35的氯仿-乙酸乙酯洗脱生物碱。

全文数据：一种鸭脚树叶碱的提取分离方法技术领域[0001]本发明涉及一种从灯台叶中提取分离鸭脚树叶碱的方法，属于化合物分离领域。背景技术[0002]灯台叶，学名FoliumAlstoniaeScholaris，产广东、云南等地，本品为两广及云南等地少数民族用药。曾收载于地方药志如《陆川本草》、《云南中草药选》中，并为《云南省药品标准》（1974和《中国药典》（1977年版一部所收载;后开发出灯台叶颗粒、灯台叶片等多种制剂，用于止咳、祛痰和慢性支气管炎咳嗽。[0003]生物碱和黄酮是灯台叶的主要成分，茎叶含多种吲哚类生物碱，如鸭脚树叶碱picrinine、迪台喊（ditaine、灯台或因喊（echitemine、P卜啉喊porphyrine、等。生物碱是灯台叶重要的活性物质，其中以鸭脚树叶碱picrinine的含量最高，是台灯叶的标识性成分，是制剂的控制项目。[0004]鸭脚树叶碱为无色的针状晶体，易溶于甲醇、氯仿、丙酮，可溶于乙酸乙酯、乙醇，不溶于水和石油醚;易溶于稀盐酸及稀硫酸，加碱中和后溶液变浑浊后复析出沉淀。化学名为2a，5a-Epoxy_l，2-dihydroakuammilan-17-〇icacidmethyIester，其化学结构式如式I所示；，式I;灯台叶由于是少数民族用药，对灯台叶的研究资料很少，而鸭脚树叶碱是灯台叶的标识性成分，是制剂的控制项目，因此寻找一种分离鸭脚树叶碱的方法，对鸭脚树叶碱进行更多药理和活性进行研究是很有必要的。发明内容[0005]本发明目的在于提供一种从灯台叶中提取分离鸭脚树叶碱的方法，该方法以灯台叶为原料;通过以下技术方案实现本发明目的：1在干燥的灯台叶中加入其质量5〜7倍的酸水煎煮2〜3次，每次2〜3小时，过滤;合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05〜1.10,用氯仿萃取三次，除去氯仿层，剩余萃余液用碱调pH至9〜10，再用氯仿萃取三次，收集合并氯仿萃取液，浓缩干燥后得生物碱；2生物碱用体积浓度80〜90%的乙醇溶液或甲醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.01〜0.02%的三乙胺水溶液，使滤液中乙醇或甲醇浓度为25〜30%，然后通过树脂柱吸附生物碱，先用3〜4倍柱体积的洗脱液I洗脱杂质，再用洗脱液Π洗脱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩，干燥即得鸭脚树叶碱粗品，其中洗脱液I是将三乙胺添加到质量浓度40〜45%的乙醇水溶液或甲醇水溶液中制得质量浓度0.01〜0.02%的三乙胺甲醇水溶液或三乙胺乙醇水溶液;洗脱液Π是将三乙胺添加到质量浓度50〜55%的乙醇水溶液或甲醇水溶液中制得质量浓度ο.Ol〜ο.02%的三乙胺甲醇水溶液或三乙胺乙醇水溶液；3鸭脚树叶碱粗品用其质量4〜5倍的氯仿溶解后，上入硅胶柱中，先用2〜3倍柱体积氯仿洗脱，再用氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干即得鸭脚树叶碱；4将步骤3鸭脚树叶碱用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作2〜3次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱。所述步骤1中的酸水为质量浓度〇.1〜〇.2%的硫酸水溶液或盐酸水溶液。[0006]所述步骤1中的碱为质量浓度40〜50%的氢氧化钠水溶液。[0007]所述步骤2树脂柱中的树脂为聚酰胺树脂。[0008]所述步骤2的生物碱用其质量3〜4倍的乙醇溶液溶解。[0009]所述步骤3中梯度洗脱时先用3〜4倍柱体积的体积比为75〜80:20〜25的氯仿-乙酸乙酸洗脱杂质，再用体积比为65〜70:30〜35的氯仿-乙酸乙酸洗脱生物碱。[0010]本发明方法的优点和技术效果:灯台叶中的鸭脚树叶碱含量很低，只有千分之一左右，分离和提纯较难;本发明提取时根据鸭脚树叶碱易溶于酸水的性质采用〇.1〜〇.2%的酸水提取，保证了鸭脚树叶碱的提取率，避免采用价格较贵的有机溶剂;根据鸭脚树叶碱盐易溶于酸水，不溶于有机溶剂的特性用氯仿萃取杂质；又根据鸭脚树叶碱在碱性环境中易溶于有机溶剂的特性把氯仿萃取后的萃余液调成碱性后用氯仿萃取生物碱;萃取得到的生物碱先采用聚酰胺树脂柱层析，再采用硅脱柱层析，最后采用重结晶方式得到含量98%以上的鸭脚树叶碱，本发明方法简单易操作，适于工业化生产和市场推广应用。具体实施方式[0011]下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不局限于所述内容，本发明方法中如无特殊说明，均采用常规方法，使用试剂如无特殊说明，均采用常规方法配制的试剂或市售常规试剂。[0012]实施例1:取灯台叶10kg，加入质量浓度0.1%的硫酸水溶液70kg，煮沸3小时，过滤，滤渣再次加入质量浓度0.1%硫酸水溶液50kg煮提3小时，过滤，合并二次过滤所得滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.05,得清膏20kg;在清膏中边搅拌边加入IOkg氯仿，加完后继续搅拌5分钟，静置2小时，分出氯仿层，水层用等量氯仿重复萃取2次，合并氯仿萃取液，回收氯仿，浓缩物作废弃物处理;水层用质量浓度40%的氢氧化钠调至pH=9，用氯仿萃取3次，每次用量为l〇kg，合并3次氯仿萃取液，浓缩干燥后得生物碱;生物碱用其质量3倍的体积浓度90%的乙醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.01%的三乙胺水溶液，使滤液中乙醇浓度为25%，然后通过聚酰胺树脂柱，用4个柱体积洗脱液I将三乙胺添加到质量浓度40%的乙醇水溶液中制得质量浓度〇.01%的三乙胺乙醇水溶液洗脱杂质，再用洗脱液Π将三乙胺添加到质量浓度50%的乙醇水溶液中制得质量浓度0.01%的三乙胺乙醇水溶液洗脱生物碱，收集含有鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥得鸭脚树叶碱粗品；鸭脚树叶碱粗品用其质量5倍的氯仿溶解后，上入硅胶柱中，先用2倍柱体积氯仿洗脱，再用3倍柱体积的体积比80:20的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱杂质，然后用体积比70:30的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱生物碱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥，最后用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作2次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱晶体4.2g，含量为98.2%。[0013]实施例2:取灯台叶IOkg，加入质量浓度0.1%的盐酸水溶液60kg，煮沸2小时，过滤，滤渣再次加入质量浓度0.1%盐酸水溶液60kg煮提2小时，过滤，再重复煮提一次，合并三次过滤所得滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.08，得清膏22kg;在清膏中边搅拌边加入IOkg氯仿，加完后继续搅拌5分钟，静置2小时，分出氯仿层，水层用等量氯仿重复萃取2次，合并氯仿萃取液，回收氯仿，浓缩物作废弃物处理;水层用质量浓度50%氢氧化钠调至pH=10,用氯仿萃取3次，每次用量为10kg，合并3次氯仿萃液，浓缩干燥后得生物碱;生物碱用其质量4倍的体积浓度80%的甲醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.02%的三乙胺水溶液，使滤液中甲醇浓度为30%，然后通过聚酰胺树脂柱，用3个柱体积洗脱液I将三乙胺添加到质量浓度45%的甲醇水溶液中制得质量浓度0.02%的三乙胺甲醇水溶液洗脱杂质，再用洗脱液Π将三乙胺添加到质量浓度55%的甲醇水溶液中制得质量浓度0.02%的三乙胺甲醇水溶液洗脱生物碱，收集含有鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥得鸭脚树叶碱粗品；鸭脚树叶碱粗品用其质量4倍的氯仿溶解，上入硅胶柱中，先用3倍柱体积氯仿洗脱，再用4倍柱体积的体积比75:25的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱杂质，然后用体积比65:35的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱生物碱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥，最后用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作3次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱晶体晶体3.8g，含量为98.7%。[00M]实施例3:取灯台叶IOkg，加入质量浓度0.2%硫酸水溶液60kg，煮沸2.5小时，过滤，滤渣再次加入质量浓度0.1%硫酸水溶液50kg煮提2小时，过滤，合并二次过滤所得滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.1，得清膏17kg;在清膏中边搅拌边加入IOkg氯仿，加完后继续搅拌5分钟，静置2小时，分出氯仿层，水层用等量氯仿重复萃取2次，合并氯仿萃取液，回收氯仿，浓缩物作废弃物处理;水层用质量浓度45%氢氧化钠调至pH=9.5，用氯仿萃取3次，每次用量为10kg，合并3次氯仿萃液，得生物碱;生物碱用其质量3.5倍体积浓度85%的乙醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.015%的三乙胺水溶液，使滤液中乙醇浓度为28%，然后通过聚酰胺树脂柱，用3.5个柱体积洗脱液I将三乙胺添加到质量浓度42%的乙醇水溶液中制得质量浓度〇.015%的三乙胺乙醇水溶液洗脱杂质，再用洗脱液Π将三乙胺添加到质量浓度53%的乙醇水溶液中制得质量浓度0.014%的三乙胺乙醇水溶液洗脱生物碱，收集含有鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥得鸭脚树叶碱粗品；鸭脚树叶碱粗品用其质量4.5倍的氯仿溶解，上入硅胶柱中，先用2.5倍柱体积氯仿洗脱，再用3.5倍柱体积的体积比78:22的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱杂质，然后用体积比67:33的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱生物碱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥，最后用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作2次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱晶体4.5g，含量为98.5%。[0015]实施例4:取灯台叶50kg，加入质量浓度0.15%的硫酸水溶液250kg，煮沸3小时，过滤，滤渣再次加入质量浓度0.2%的硫酸水溶液250kg煮提3小时，过滤，再重复煮提一次，合并3次过滤所得滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.08，得清膏IIOkg;在清膏中边搅拌边加入50kg氯仿，加完后继续搅拌5分钟，静置2小时，分出氯仿层，水层用等量氯仿重复萃取2次，合并氯仿萃取液，回收氯仿，浓缩物作废弃物处理;水层用质量浓度42%氢氧化钠调至pH=9,用氯仿萃取3次，每次用量为50kg，合并3次氯仿萃液，得生物碱;生物碱用其质量3倍体积浓度88%的甲醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.02%的三乙胺水溶液，使滤液中甲醇浓度为26%，然后通过聚酰胺树脂柱，用4个柱体积洗脱液I将三乙胺添加到质量浓度40%的甲醇水溶液中制得质量浓度0.02%的三乙胺甲醇水溶液洗脱杂质，再用洗脱液Π将三乙胺添加到质量浓度50%的甲醇水溶液中制得质量浓度0.02%的三乙胺甲醇水溶液洗脱生物碱，收集含有鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥得鸭脚树叶碱粗品；鸭脚树叶碱粗品用其质量5倍的氯仿溶解，上入硅胶柱中，先用3倍柱体积氯仿洗脱，再用3倍柱体积的体积比76:24氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱杂质，然后用体积比68:22的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱生物碱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥，最后用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作2次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱晶体23.2g，含量为98.7%。[0016]实施例5:取灯台叶50kg，加入质量浓度0.2%盐酸水溶液300kg，煮沸3小时，过滤，滤渣再次加入质量浓度0.2%盐酸水溶液250kg煮提2小时，过滤，合并2次过滤所得滤液，滤液减压浓缩至相对密度为1.1，得清膏98kg;在清膏中边搅拌边加入50kg氯仿，加完后继续搅拌5分钟，静置2小时，分出氯仿层，水层用等量氯仿重复萃取2次，合并氯仿萃取液，回收氯仿，浓缩物作废弃物处理;水层用质量浓度45%氢氧化钠调至pH=10，用氯仿萃取3次，每次用量为50kg，合并3次氯仿萃液，得生物碱;生物碱用其质量3倍体积浓度85%的乙醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.01%的三乙胺水溶液，使滤液中乙醇浓度为27%，然后通过聚酰胺树脂柱，用3个柱体积洗脱液I将三乙胺添加到质量浓度45%的乙醇水溶液中制得质量浓度〇.01%的三乙胺乙醇水溶液洗脱杂质，再用洗脱液Π将三乙胺添加到质量浓度54%的乙醇水溶液中制得质量浓度0.02%的三乙胺乙醇水溶液洗脱生物碱，收集含有鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥得鸭脚树叶碱粗品；鸭脚树叶碱粗品用其质量4倍的氯仿溶解，上入硅胶柱中，先用3倍柱体积氯仿洗脱，再用4倍柱体积的体积比80:20的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱杂质，然后用体积比66:34的氯仿-乙酸乙酯洗脱液洗脱生物碱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液浓缩干燥，最后用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作3次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱晶体晶体25.8g，含量为98.2%。

权利要求：1.一种鸭脚树叶碱的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：1在干燥的灯台叶中加入其质量5〜7倍的酸水煎煮2〜3次，每次2〜3小时，过滤;合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05〜1.10,用氯仿萃取三次，除去氯仿层，剩余萃余液用碱调pH至9〜10，再用氯仿萃取三次，收集合并氯仿萃取液，浓缩干燥后得生物碱；2生物碱用体积浓度80〜90%的乙醇溶液或甲醇溶液溶解，过滤，在滤液中加入质量浓度0.01〜0.02%的三乙胺水溶液，使滤液中乙醇或甲醇浓度为25〜30%，然后通过树脂柱吸附生物碱，先用3〜4倍柱体积的洗脱液I洗脱杂质，再用洗脱液Π洗脱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩，干燥即得鸭脚树叶碱粗品，其中洗脱液I是将三乙胺添加到质量浓度40〜45%的乙醇水溶液或甲醇水溶液中制得质量浓度0.01〜0.02%的三乙胺甲醇水溶液或三乙胺乙醇水溶液;洗脱液Π是将三乙胺添加到质量浓度50〜55%的乙醇水溶液或甲醇水溶液中制得质量浓度〇.01〜〇.02%的三乙胺甲醇水溶液或三乙胺乙醇水溶液；3鸭脚树叶碱粗品用其质量4〜5倍的氯仿溶解后，上入硅胶柱中，先用2〜3倍柱体积氯仿洗脱，再用氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱，收集鸭脚树叶碱段洗脱液，浓缩干燥即得鸭脚树叶碱；4将步骤3鸭脚树叶碱用丙酮溶解后，滴加石油醚至晶体出现，静置结晶，过滤，反复操作2〜3次，最后晶体真空干燥，即得鸭脚树叶碱。2.根据权利要求1所述的鸭脚树叶碱的提取分离方法，其特征在于：步骤（1中的酸水为质量浓度〇.1〜〇.2%的硫酸水溶液或盐酸水溶液。3.根据权利要求1所述的鸭脚树叶碱的提取分离方法，其特征在于：步骤（1中的碱为质量浓度40〜50%的氢氧化钠水溶液。4.根据权利要求1所述的鸭脚树叶碱的提取分离方法，其特征在于：步骤2树脂柱中的树脂为聚酰胺树脂。5.根据权利要求1所述的鸭脚树叶碱的提取分离方法，其特征在于：步骤2的生物碱用其质量3〜4倍的乙醇溶液溶解。6.根据权利要求1所述的鸭脚树叶碱的提取分离方法，其特征在于：步骤3中梯度洗脱时先用3〜4倍柱体积的体积比为75〜80:20〜25的氯仿-乙酸乙酸洗脱杂质，再用体积比为65〜70:30〜35的氯仿-乙酸乙酸洗脱生物碱。

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