申请/专利权人：中国农业大学

申请日：2019-03-27

公开（公告）日：2021-01-05

公开（公告）号：CN109988771B

主分类号：C12N15/29(20060101)

分类号：C12N15/29(20060101);C07K14/415(20060101);C12Q1/6895(20180101);C12N15/11(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.01.05#授权;2019.08.02#实质审查的生效;2019.07.09#公开

摘要：本发明公开了一种玉米抗盐主效QTL及其应用。所述玉米抗盐QTL基因，其编码核苷酸序列选自：aSEQIDNo.1所示的序列；bSEQIDNo.1所示的序列经取代、缺失和或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列。在此抗盐QTL基因内，鉴定了一个在抗感材料间存在差异的插入缺失标记。该标记与玉米抗盐性连锁，可作为玉米抗盐分子标记，本发明提供了检测该抗盐分子标记的引物和方法。由于玉米抗盐属数量性状遗传，表型分析耗时费力，本发明所述的QTL基因、分子标记和引物可以应用于玉米的抗盐育种。

主权项：1.一种玉米抗盐相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记为SEQIDNo.3所示核苷酸序列，其在抗盐QTL基因中插入或缺失导致个体盐敏感性差异；所述抗盐QTL基因其编码核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；在所述抗盐QTL基因中插入SEQIDNo.3所示核苷酸序列的个体为盐敏感型；所述抗盐QTL基因中缺失SEQIDNo.3所示核苷酸序列的个体为抗盐型。

全文数据：一个玉米抗盐QTL及其应用技术领域本发明属于基因工程技术领域，具体涉及本发明涉及一种玉米抗盐主效QTL及其应用。背景技术盐碱胁迫在自然界中分布广泛，是对农业生产影响较大的非生物胁迫，已成为制约农业可持续发展的关键问题。近年来，全球盐碱化进程的加快进一步加重了盐碱对农业生产的威胁。我国是耕地受盐碱化危害较严重的国家之一，在北方耕地盐碱化较南方更为严重，而作为我国粮食生产的主产区，不断加剧的耕地盐碱化，势必威胁到粮食生产和粮食安全。因此如何开发利用大面积的盐碱地，合理应对盐碱胁迫对农业生产尤其是主要作物生产的负面影响，对维持我国农业生产的可持续发展有重要意义。玉米对盐胁迫十分敏感王丽燕，2005。玉米中的研究表明，不同玉米自交系的抗盐能力存在显著差异。已有一些研究尝试通过各种技术手段进行相关基因的挖掘与分子克隆，但目前为止只有极少数玉米抗盐QTL被精细定位或克隆，这已然成为玉米抗盐分子标记开发和抗盐玉米培育的主要瓶颈。因此，克隆抗盐QTL基因,研究其介导抗盐的分子机制，开发用于抗盐玉米培育的分子标记已成为抗盐玉米改良的首要关键任务。植物在受到盐胁迫时，根系从土壤中吸收过量的Na+，同时K+吸收受阻，导致组织中K+Na+比率失衡，最终导致离子毒害，因此维持Na+、K+浓度的稳态及K+Na+比率平衡在植物抗盐能力形成过程中发挥着重要的作用Zhuetal.,2002；MunnsandTester,2008；Jiangetal.,2012。已有的研究结果表明，玉米在盐胁迫条件下生长时，不同玉米自交系叶片中积累的Na+浓度以及K+Na+比率存在显著差异Zhaoetal.,2010；Chenetal.,2016，但相关QTL基因只有极少数被精细定位克隆，因此克隆调控玉米Na+、K+浓度以及K+Na+比率的QTL基因对抗盐玉米的改良具有重要意义。发明内容为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种玉米抗盐QTL基因，所述基因其编码核苷酸序列选自：aSEQIDNo.1所示的序列；bSEQIDNo.1所示的序列经取代、缺失和或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列。同时，本发明还提供了上述玉米抗盐QTL基因所编码的蛋白质。上述蛋白质，其氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2所示。对于上述玉米抗盐QTL基因，本发明的发明人发现两个亲本自交系黄C和X178的抗盐性存在显著差异，以黄C和X178的RIL群体为材料，本发明利用QTL分析及其它生物信息学手段，克隆了玉米抗盐QTL基因，命名为ZmNC2，该基因编码区长度为2109bp详细序列见SEQIDNo.1，编码702个氨基酸详细序列见SEQIDNo.2。本发明的目的在于提供一种玉米抗盐主效QTL，其特征在于，该主效QTL位于4号染色体55,074-55,085kb的位置。为了筛选适合抗盐分子标记的DNA序列变异，发明人对抗盐自交系黄C和盐敏感自交系X178基因组DNA进行了重测序，通过数据分析和基于PCR产物的测序验证，鉴定到一个抗感材料间存在差异的12586bp具体序列见SEQIDNo.3插入片段，将该插入片段命名为ZmNC2-InDel。该插入仅存在于盐敏感材料X178中，导致ZmNC2的转录水平下降，进而影响其盐敏感性，适合用于分子标记。本发明的目的也在于提供一种玉米抗盐相关的分子标记，所述分子标记表现为SEQIDNo.3所示核苷酸序列在上述抗盐QTL基因中插入或缺失。上述分子标记，进一步地，表现为SEQIDNo.3所示核苷酸序列在所述抗盐QTL基因中的第一个内含子中插入或缺失。上述分子标记，进一步地，在所述抗盐QTL基因中插入SEQIDNo.3所示核苷酸序列的个体为盐敏感型；所述抗盐QTL基因缺失SEQIDNo.3所示核苷酸序列的个体为抗盐型。同时，本发明还提供了用于检测权利上述分子标记的引物对，包括：引物对Ⅰ和引物对Ⅱ，所述引物对Ⅰ为引物ZmNC2-F1和引物ZmNC2-R1，所述引物对Ⅱ为引物ZmNC2-InDel-F1和引物ZmNC2-R1；所述引物ZmNC2-F1、ZmNC2-InDel-F和ZmNC2-R1序列如下：引物ZmNC2-F1：GAATCTTGGCCACGAACTTG；引物ZmNC2-InDel-F：CTAGTAGCTGGCTCCCTTCC；引物ZmNC2-R1：CCTTCCCCATCTCTGAGCTC。利用上述引物对，以所述待测玉米基因组DNA为模板进行PCR扩增，如果用引物对Ⅰ扩增后得到318bp的片段，其序列SEQIDNo.4所示，如用引物对Ⅱ扩增后没有片段，则为抗盐型；如果用引物对Ⅰ扩增后没有片段，用引物对Ⅱ扩增后得到1206bp的片段，其序列SEQIDNo.5所示，则为盐敏感型。同时，本发明还提供了一种用于检测上述分子标记的试剂盒，包括上述的引物对。进一步地，所述试剂盒还包括用于PCR扩增的酶和试剂，用利用上述引物对进行PCR扩增。本发明的目的还在于提供一种检测玉米是否抗盐的方法，包括：对待测玉米进行上述分子标记的检测，根据检测结果判断其是否抗盐。上述方法中，所述方法包括：利用上述引物对，或者上述试剂盒，以所述待测玉米基因组DNA为模板进行PCR扩增；根据扩增结果判断是否抗盐：如果用引物对Ⅰ扩增后得到318bp的片段，其序列SEQIDNo.4所示，用引物对Ⅱ扩增后没有片段，则为抗盐型；如果用引物对Ⅰ扩增后没有片段，用引物对Ⅱ扩增后得到1206bp的片段，其序列SEQIDNo.5所示，则为盐敏感型。上述抗盐QTL基因、上述蛋白质、上述主效QTL、上述述的分子标记、上述引物对，上述试剂盒在玉米抗盐育种中的应用。本发明的有益效果1本发明提供了一种新的玉米抗盐主效QTL，及其相关的抗盐QTL基因的核苷酸序列和其对应的蛋白质氨基酸序列，并且在此抗盐QTL基因内，鉴定了一个位于其内含子中插入或缺失的，与玉米抗盐性连锁的大片段，该片段的插入或缺失，可作为玉米抗盐分子标记。本发明还提供了一种用于检测本发明的玉米抗盐分子标记的引物对和试剂盒，以及检测玉米是否抗盐的方法。2由于玉米抗盐属数量性状遗传，表型分析耗时费力，上述的玉米抗盐主效QTL、抗盐QTL基因及其蛋白质、分子标记、引物对和试剂盒都可以应用于玉米抗盐育种中，在玉米种子期间或子叶长出的早期阶段就可鉴定，省时而且准确，可以加速玉米抗盐品种选育进程。附图说明图1为抗盐QTL基因ZmNC2的定位及遗传验证；其中A为基于黄CX178RIL群体的QTL分析确定的抗盐主效QTL，及其相关基因ZmNC2的位置；B为转录组测序比较ZmNC2基因在黄C和X178中的表达水平；C为利用CRSPR-Cas9敲除后的基因和原基因序列的比较；D为pBUE411-ZmNC2载体结构示意图；E为在对照或盐处理条件下生长了2周的野生型和ZmNC2基因敲除植株ZmNC2crispr-1，ZmNC2crispr-2的生长情况；其中标尺大小为10cm。图2为ZmNC2基因的结构示意图。图3为ZmNC2基因全长编码序列PCR扩增的电泳图；其中1为以来自黄C幼苗的cDNA为模板，用ZmNC2特异的引物ZmNC2-gene-F和ZmNC2-gene-R进行扩增获得的PCR产物预期产物大小2109bp，M为天根公司分子量标准500bpmarker。图4为ZmNC2基因编码序列连接入T载体后的载体图谱。图5为ZmNC2编码的蛋白定位在细胞膜并具有Na+转运活性；其中A为pCAMBIAsuper1300-GFP-ZmNC2载体结构示意图；B为在烟草表皮细胞中分析ZmNC2-GFP亚细胞定位；C为p416GPD-ZmNC2载体结构示意图；D为在缺陷酵母菌株ant5中分析ZmNC2编码蛋白的Na+转运活性；E为在缺陷酵母菌株trk1trk2中分析ZmNC2编码蛋白的K+转运活性。图6为抗感材料间黄C和X178间存在差异的12586bp核苷酸序列的鉴定及其对ZmNC2转录水平的影响；图中箭头所示为X178中鉴定到的大片段插入ZmNC2-InDel的插入位置及用于扩增插入片段的引物ZmNC2-F1，ZmNC2-R1，ZmNC2-InDel-F2，ZmNC2-InDel–R2的位置。图7为利用两对引物引物对Ⅰ和引物对Ⅱ在黄C和X178中进行PCR扩增的结果；其中，M为聚合美公司分子量标准2000bpmarker。图8为抗盐基因型玉米自交系没有ZmNC2-InDel插入和盐敏感基因型玉米自交系有ZmNC2-InDel插入叶片中Na+含量比较结果。具体实施方式以下实施例便于更好地理解本发明，但不限于此，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。除特殊说明的之外，各实施例中所用的设备和试剂均常规市售可得。实施例1玉米抗盐QTL基因的克隆及功能分析以黄C和X178RIL群体为材料，本发明通过基于混合线性模型的QTL分析在4号染色体上定位了一个主效抗盐QTL区域，如图1A所示，在4号染色体上55,074-55,085kb的位置，位置根据玉米B73参考基因组V2确定。同时通过转录组测序比较对照及盐胁迫下黄C和X178的转录组，在此QTL候选区域鉴定到一个候选基因，命名为ZmNC2，其表达水平在X178中显著低于黄C，如图1B所示，结果表明，在对照和盐处理条件下，X178中该候选基因的表达水平都显著低于黄C。为了获得ZmNC2的突变体，发明人1设计了CRSPR-Cas9敲除靶点，如图1C所示；2用BsaI对含有靶点序列的PCR片段和pBUE411载体进行酶切、连接，连接产物转入大肠杆菌，用通用引物FD3RD进行菌落PCR扩增，电泳检测有目的大小条带的菌落为阳性克隆，将对应的菌液送至北京三博远志生物技术有限责任公司测序，获得正确的pBUE411-ZmNC2载体图1D，将pBUE411-ZmNC2转入农杆菌EHA105；3通过幼胚侵染的方法获得转基因植株；4通过对包括靶点在内的基因片段进行PCR扩增、测序确定转基因阳性植株。最终获得了两个ZmNC2候选基因的敲除材料命名为ZmNC2crispr-1和ZmNC2crispr-2，并证明这两个突变体跟X178一样表现出盐敏感的表型，如图1E所示，表明ZmNC2基因敲除植株对盐胁迫更敏感，表现为植株矮小叶片发黄，说明该基因的确是抗盐QTL基因ZmNC2。通过Gramene网站对ZmNC2基因结构进行预测，基因全长从起始密码子到终止密码子11210bp，包含四个外显子，三个内含子，其中编码区序列全长2109bp，如图2所示。为了克隆ZmNC2全长编码序列，以生长7天的抗盐玉米自交系黄C幼苗为材料，使用天根生化科技北京有限公司的植物总RNA提取试剂盒Cat.#DP432提取总RNA，并通过使用普洛麦格北京生物技术有限公司的M-MLV反转录酶进行反转录获得cDNA，用ZmNC2特异的引物正向引物ZmNC2-gene-FATGGCTGCTGCCTCCATGGAC；反向引物ZmNC2-gene-RTCAGGCCTTGTAGAGCATGCC进行PCR扩增，获得了与预期大小2109bp相符的产物，如图3所示。PCR扩增体系为50μl，包括：2×SuperMultiplexPCRMix25μl；10μMPrimerZmNC2-gene-F2μl；10μMPrimerZmNC2-gene-R2μl；DNA1μl,ddH2O20μl。PCR扩增条件为：预变性95℃2min,变性95℃30s,退火58℃30s,延伸72℃1min30s,由变性到延伸进行34个循环，最后延伸72℃5min。使用天根生化科技北京有限公司的凝胶回收试剂盒Cat.#DP105-3对PCR产物进行回收和纯化，用北京全式金生物技术有限公司的pEASY-BluntCloningKit试剂盒对纯化后的产物进行T载体的连接载体图谱见图4，然后转入大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆，使用通用引物T7SP6进行菌落PCR扩增，电泳检测有目的大小条带的菌落为阳性重组体，将对应的菌液送至北京三博远志生物技术有限责任公司测序，获得了2109bp的ZmNC2外显子序列，其核苷酸序列见SEQIDNo.1，对应的蛋白质的序列为SEQIDNo.2所示。生物信息预测ZmNC2编码一个KUP家族离子转运蛋白，通过1用XbaI和HindIII对含有XbaI和HindIII酶切位点的ZmNC2片段和pCAMBIAsuper1300-GFP载体进行双酶切，酶切片段通过T4连接酶连接，转入大肠杆菌，通过菌落PCR扩增筛选有目的条带的阳性克隆；2将对应的菌液送至北京三博远志生物技术有限责任公司测序，最终获得正确的pCAMBIAsuper1300-GFP-ZmNC2图谱如图5A所示；3将pCAMBIAsuper1300-GFP-ZmNC2转入农杆菌GV3101，挑单克隆接种到3mlYEB液体培养基含抗生素在200rpm，28℃摇床培养过夜；4将上述过夜培养菌液在常温，4000rpm下离心2min，收集菌体；5用渗透培养液10mmolMgCl2重新悬浮沉淀的农杆菌细胞，调节浓度OD600至0.5～1.0；6用1mL的无针头的注射器吸取悬浮有农杆菌的渗透培养液从烟叶背面注入叶片内；7注射过的烟草继续生长2-3天；8使用激光共聚焦显微镜观察叶背面荧光表达情况。结果如图5B所示，ZmNC2-GFP定位在质膜上。与此同时，通过缺陷酵母表型互补实验系统确定ZmNC2具有内向转运Na+的活性。具体实验流程为：1用XbaI和HindIII对含有XbaI和HindIII酶切位点的ZmNC2回收片段和p416GPD载体进行双酶切，酶切片段通过T4连接酶连接，转入大肠杆菌，通过菌落PCR扩增筛选有目的条带的阳性克隆；2将对应的菌液送至北京三博远志生物技术有限责任公司测序，最终获得正确的p416GPD-ZmNC2图谱如图6所示；3p416GPD-ZmNC2质粒分别转入钠外排缺陷型酵母ant5和钾吸收缺陷型酵母trk1trk2；4挑取单克隆分别稀释成不同浓度梯度；5分别点在不同浓度Na+和K+的AP培养基上；630℃培养三天后观察不同条件下酵母表型。如图5D所示，转入p416GPD-ZmNC2的钠外排缺陷型酵母ant5随着培养基中Na+浓度的改变，生长受到明显抑制，与对照相比对盐更为敏感；如图5E所示，转入p416GPD-ZmNC2的钾吸收缺陷型酵母trk1trk2在低钾条件下并不能回补表型至野生型。表明抗盐基因ZmNC2编码一个内向Na+转运蛋白，而几乎不具有内向K+吸收能力。它可能通过调控盐胁迫下植物对Na+的吸收来调控植物抗盐。实施例2玉米抗盐QTL基因ZmNC2内含子中插入的大片段ZmNC2-InDel的获得通过Illumina测序平台对黄C和X178的基因组DNA进行测序测序在北京诺禾致源科技股份有限公司完成，比对黄C和X178的全基因组测序数据，发现在盐敏感自交系X178中，ZmNC2基因的第一个内含子有一个大片段插入，命名为ZmNC2-InDel，如图6所示。根据全基因组测序数据，发明人设计了两对引物ZmNC2-F1ZmNC2-InDel-R2和ZmNC2-InDel-F2ZmNC2-R1引物在基因上的具体位置如图6所示。引物序列为：ZmNC2-F1：GAATCTTGGCCACGAACTTG；ZmNC2-InDel-R2：TAACTGGCATGGACGACTGA；ZmNC2-InDel-F2：TCCCTTTCAGTCCTTGATCG；ZmNC2-R1：CCTTCCCCATCTCTGAGCTC。以ZmNC2-F1ZmNC2-InDel-R2和ZmNC2-InDel-F2ZmNC2-R1为引物，以X178的基因组DNA为模板，使用PCR扩增50μl体系，包括2×SuperMultiplexPCRMix25μl,10μMPrimerZmNC2-F1ZmNC2-InDel-F22.5μl,10μMPrimerZmNC2-R1ZmNC2-InDel-R22.5μl,DNA2.0μl,ddH2O18μl；PCR程序：预变性95℃2min,变性95℃30s,退火58℃30s,延伸72℃3min30s,由变性到延伸进行34个循环，最后延伸72℃3min30s，将PCR产物送到北京三博远志生物技术有限责任公司测序，获得测序结果后，通过CodonCodeAligner软件拼接，获得了ZmNC2-InDel插入序列的长度为12586bp，该插入导致X178中ZmNC2的转录水平下降，如图1B所示，ZmNC2-InDel插入的具体序列如SEQIDNo.3所示。实施例3玉米抗盐基因ZmNC2中的ZmNC2-InDel插入或缺失作为分子标记因为ZmNC2-InDel插入仅存在于盐敏感玉米自交系X178中，它导致抗盐基因ZmNC2的转录水平显著下降，进而影响其盐敏感性，因此ZmNC2-InDel插入可以用于判断个体是否抗盐的分子标记。利用基于ZmNC2-InDel插入的侧翼序列设计的引物ZmNC2-F1正向和ZmNC2-R1反向,以及基于ZmNC2-InDel插入序列设计的引物ZmNC2-InDel-F1正向，以上述三条引物组成引物对ⅠZmNC2-F1ZmNC2-R1和引物对ⅡZmNC2-InDel-F1ZmNC2-R1。以引物对Ⅰ和Ⅱ为引物，分别以抗盐玉米自交系黄C和盐敏感玉米自交系X178的基因组DNA为模板，进行PCR扩增。PCR体系20μl：2×SuperMultiplexPCRMix10μl,10μMPrimerZmNC2-F11μl,10μMPrimerZmNC2-R1ZmNC2-InDel-R11μl,DNA1μl,ddH2O7μl。PCR程序：预变性95℃2min,变性95℃30s,退火58℃30s,延伸72℃1min,由变性到延伸进行34个循环，最后延伸72℃5min。结果发现以玉米抗盐自交系黄C总DNA为模板进行PCR扩增，引物对Ⅰ可获得318bp的条带详细序列见SEQIDNo.4，引物对Ⅱ没有条带；以玉米盐敏感自交系X178总DNA为模板进行PCR扩增，引物对Ⅰ没有条带，引物对Ⅱ可获得1206bp的条带详细序列见SEQIDNo.5，如图7所示。因此，以引物对Ⅰ和Ⅱ可以用于玉米抗盐分子辅助育种，把基于引物对Ⅰ和Ⅱ的抗盐分子标记命名为ZmSALT2。其中各引物的序列为：引物ZmNC2-F1：GAATCTTGGCCACGAACTTG；引物ZmNC2-InDel-F1：CTAGTAGCTGGCTCCCTTCC；引物ZmNC2-R1：CCTTCCCCATCTCTGAGCTC。实施例4利用抗盐分子标记检测玉米是否抗盐选取了24种玉米自交系材料包括一些玉米骨干自交系进行检测，检测方法如实施例3所述，利用实施例3中的检测本发明抗盐分子标记的引物对，以所述待测玉米基因组DNA为模板进行PCR扩增。其结果表明：其中243份自交系引物对Ⅰ有PCR产物，产物长度为318bp，引物Ⅱ对无PCR产物，为抗盐基因型，另外51份自交系引物对Ⅰ无PCR产物，引物Ⅱ对有PCR产物，产物长度为1206bp，为盐敏感基因型基因型。所用自交系名称和鉴定结果如下表所示：“√”表示PCR产物有条带；“×”表示PCR产物无条带。在盐胁迫条件下，盐敏感基因型材料有ZmNC2-InDel插入叶片中的Na+含量显著高于抗盐基因型材料无ZmNC2-InDel插入，相关检测结果如图8所示，与抗盐分子标记ZmSALT2的鉴定结果一致。序列表中国农业大学一种玉米抗盐QTL及其应用8SIPOSequenceListing1.012109DNAZeamays1atggctgctgcctccatggacgtggaagccggacaggggagaaacgataagaagcgaatt60tacaaagatctactccttgcctacaagactctgggcgtcgtattcggtggtcttgtcacc120tcccctctctacgtctacccttccatgaacctgacaaacccgaccgaagaggactatctg180ggaatctacagcatcatgttctggaccctgacactgatcggcgtcgtcaagtacatctgc240atcgccctcaacgccgacgaccacggcgaaggtggcacatttgccatgtactccctgttg300tgccagcacgccaacatcggcatcctcccgtccaagaagatatacaccgaggaggagcag360ggcctggtcccggctcggcccgtcgcggcccggaggcccagcaaggtgaggaggttcatc420gagcggagcattacggcgagaaggttgctgcagctcacggcgatcctgggcatgtgcatg480ctcattggagacggcatcctcacgccggccatctcaatcctgtcagctgttgatggacta540agagggcctttcccgtcggtcagcaaaccgactgttgaggctctgtccgcagggattctg600atcggtctgttcctgctgcaaaagtacggcacgtccaaggtgagcttcatgttctcgccg660atcatggcggcgtggacgttcaccaccccgatcatcggcatctacagcatctggcgctac720taccctggcatcttcaagagcgtgtcgccgtactacgtggtacacttcttcgtgaccaac780cggaagaggggctggcagctgctcggcggcaccgtcctgtgcatcacgggcgccgaggcc840atgttcgccgacctcgggcacttcaacaagcggtccatccagatcgcgttcctctctagc900atctacccgtcgctggtgctcacgtacgccggccagacggcctacctgatcaaccacgtg960ggcgacttcggcgacgggttctacaagttcgtgccgcgccccgtgtactggccaatgttc1020gtcatcgcgacgctggcggcgatcgtggcgagccagtcgctcatctccgccaccttctcc1080gtggtcaagcagtcggtggcgctggactacttcccgcgcgtccgggtggtgcacacctcc1140aaggacaaggagggggaggtgtactccccggagaccaactacctgctgatgctgctgtgc1200gtgggcgccatcatcggcttcggcgacggaaaggacatcggcaacgcgttcggcgtggtg1260gtcatcctcgtcatgctcatcactaccatcctgctctccctggtgatgctcatcgtctgg1320ggcacgcacgtggtgctggtggcgctctacctcgtgcccttcctcatcctggagggcact1380tacgtgagcgcggtgtgcaccaagatcatgaagggcggctggttgcccttcgccatctcg1440ctcgttctggcgctcgtcatgttcagctggtactacggccggcagcgcaaggcagagtac1500gagatggccaacaaggtgaccctggagcggctgagcgagctgctggccgcgcccgacgtg1560cgccgcgccccggggctctgcctcttctacagcaacatgcaggagtggcggtggctcacc1620ccggtgctggcgcactacatcaagaacatgcggtcgctgcacggggttaccatcttcgtc1680actctccggtaccaactggtggccaaggtggacgccgagagccgcatggcggtccggcga1740ttcggtccccgcggggtgtacggctgcacgatccagtacgggtacgctggcccactgt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权利要求：1.一种玉米抗盐QTL基因，其特征在于，其编码核苷酸序列选自：aSEQIDNo.1所示的序列；bSEQIDNo.1所示的序列经取代、缺失和或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列。2.权利要求1所述玉米抗盐QTL基因所编码的蛋白质，其氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2所示。3.一种玉米抗盐主效QTL，其特征在于，该主效QTL基因位于4号染色体上55074-55085kb的位置。4.一种玉米抗盐相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记表现为SEQIDNo.3所示核苷酸序列在权利要求1所述抗盐QTL基因中插入或缺失。5.根据权利要求4所述的分子标记，其特征在于，在权利要求1所述抗盐QTL基因中插入SEQIDNo.3所示核苷酸序列的个体为盐敏感型；权利要求1所述抗盐QTL基因缺失SEQIDNo.3所示核苷酸序列的个体为抗盐型。6.用于检测权利要求4-5任一项所述分子标记的引物对，其特征在于，包括：引物对Ⅰ和引物对Ⅱ，所述引物对Ⅰ为引物ZmNC2-F1和引物ZmNC2-R1，所述引物对Ⅱ为引物ZmNC2-InDel-F1和引物ZmNC2-R1；所述引物ZmNC2-F1、ZmNC2-InDel-F1和ZmNC2-R1序列如下：引物ZmNC2-F1：GAATCTTGGCCACGAACTTG；引物ZmNC2-InDel-F：CTAGTAGCTGGCTCCCTTCC；引物ZmNC2-R1：CCTTCCCCATCTCTGAGCTC。7.一种用于检测权利要求4-5任一项所述分子标记的试剂盒，其特征在于，包括权利要求6所述的引物对。8.一种检测玉米是否抗盐的方法，其特征在于，包括：对待测玉米进行权利要求4-5所述的分子标记的检测，根据检测结果判断其是否抗盐。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括：利用权利要求6所述的引物对，或者权利要求7所述的试剂盒，以所述待测玉米基因组DNA为模板进行PCR扩增；根据扩增结果判断是否抗盐：如果用引物对Ⅰ扩增后得到318bp的片段，用引物对Ⅱ扩增后没有片段，则为抗盐型；如果用引物对Ⅰ扩增后没有片段，用引物对Ⅱ扩增后得到1206bp的片段，则为盐敏感型。10.权利要求1所述抗盐QTL基因、权利要求2所述蛋白质、权利要求3所述主效QTL、权利要求4-5任一项所述的分子标记、权利要6所述的引物对在玉米抗盐育种中的应用。

百度查询： 中国农业大学 一个玉米抗盐QTL及其应用

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