申请/专利权人：上海药明生物技术有限公司

申请日：2020-10-29

公开（公告）日：2021-01-19

公开（公告）号：CN112239495A

主分类号：C07K14/725(20060101)

分类号：C07K14/725(20060101);C12N15/70(20060101);C12N1/21(20060101);C12R1/19(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.04.12#授权;2021.02.05#实质审查的生效;2021.01.19#公开

摘要：本发明公开一种稳定的TCR结构及获得方法和应用，将TCR分子的可变区与抗体恒定区进行组合，并对抗体恒定区的链间二硫键进行突变，将嵌合的片段插入到噬菌体质粒载体里，将构建好的噬菌体质粒转化到菌株中，然后将带有该噬菌体质粒的菌株进行培养，获得展示嵌合TCR的噬菌体上清；通过捕获ELISA对各个嵌合的TCR噬菌体的展示水平进行检测，筛选出可以在噬菌体表面展示的稳定的TCR结构；在筛选出的稳定的TCR结构基础上，在TCR可变区和抗体恒定区之间增加连接头，比较噬菌体表面的TCR展示和结合活性，筛选出最优的TCR结构。本发明筛选出的TCR结构能够在噬菌体表面稳定展示，具有亲和力好、稳定性高的特点，可以用于对TCR亲和力成熟的筛选。

主权项：1.一种获得稳定的TCR结构的方法，其特征在于，包括：1将TCR分子的可变区Vα、Vβ与抗体恒定区进行组合，所述抗体恒定区包括：IgG1、IgG2、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、IgE抗体的重链恒定区CH1区域以及轻链恒定区κ、λ，拼接出多种TCR结构；并对抗体恒定区的链间二硫键进行突变，将嵌合的片段插入到噬菌体质粒pcom3xx-DT载体里，其中轻链恒定区末端融合表达Flag标签，重链恒定区末端融合表达6His.C-myc标签，并与噬菌体geneIII外壳蛋白融合；2将构建好的噬菌体质粒pcom3xx-DT-TCRs转化到TG1感受态细胞中，然后将带有该噬菌体质粒的TG1菌株进行培养；培养完成后离心去除菌体，获得展示嵌合TCR的噬菌体上清；3通过捕获ELISA对各个嵌合的TCR噬菌体的展示水平进行检测，运用直接的噬菌体结合ELISA鉴定，用抗噬菌体M13碱性磷酸酶偶联的抗体，检测TCR展示噬菌体与特异性MHCI-peptide的结合活性；根据噬菌体展示的水平以及与特异MHCI-peptide结合活性，筛选出可以在噬菌体表面展示的稳定的TCR结构；4在筛选出的稳定的TCR结构基础上，在TCR可变区和抗体恒定区之间增加连接头，所述linker选自不同长度的SS、SSA、SSAS、SSASS、SSASSS连接头，比较噬菌体表面的TCR展示和结合活性，筛选出最优的TCR结构。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海药明生物技术有限公司 稳定的TCR结构及应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD