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【发明授权】耐淹柳树新品种快速育种方法_南通大学_202010495073.8 

申请/专利权人:南通大学

申请日:2020-06-03

公开(公告)日:2021-02-02

公开(公告)号:CN111567399B

主分类号:A01H1/04(20060101)

分类号:A01H1/04(20060101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2021.02.02#授权;2020.09.18#实质审查的生效;2020.08.25#公开

摘要:本发明提供一种耐淹柳树新品种快速育种方法,包括:1设定耐淹指数分级;2对柳树杂交群体子代进行分级;3选取0级以及3或4级的枝条生根萌芽后进行水淹胁迫,并设对照,取根系与枝芽组织混合样测序,在柳树全基因组数据库中筛选初步耐淹候选基因,从中选择50个以上耐淹候选基因;4对根系与枝芽组织混合样进行qRT‑PCR鉴定,筛选目标耐淹候选基因;5转基因并进行耐淹胁迫实验,确认10个耐淹检测标记基因;6将待检测柳树杂交群体子代的耐淹胁迫的混合样进行qRT‑PCR表达量检测,如果有5个以上标记基因表达量显著上调,且耐淹指数为3级或4级,则为耐淹柳树新品种。本发明能够培育耐淹柳树新品种,且育种迅速,准确性好。

主权项:1.一种耐淹柳树新品种快速育种方法,其特征在于,包括以下步骤:1设定柳树的耐淹指数的分级:0级:水淹30天时所述柳树没有枝条萌芽萌根;1级:水淹30天时所述柳树部分枝条萌芽但不萌根;2级:水淹30天时所述柳树所有枝条萌芽但不萌根;3级;水淹30天时所述柳树所有枝条萌芽且部分萌根;4级;水淹30天时所述柳树所有枝条萌芽且萌根;2选取柳树杂交群体子代每种植株的多根枝条,将所述枝条完全浸没在水中,根据所述耐淹指数对所述植株进行分级;3选取所述耐淹指数为0级以及3级或4级的所述植株的另外的枝条在无土条件下生根萌芽,用水冲洗后浸入水中进行水淹胁迫,并设对照,取所述水淹胁迫后的所述枝条的根系与枝芽组织混合样进行转录组测序,根据测序的差异表达基因数据信息在柳树全基因组数据库中筛选初步耐淹候选基因,从所述初步耐淹候选基因中选择50个以上耐淹候选基因;4针对所述耐淹候选基因,对所述根系与枝芽组织混合样进行RNA提取、反转录和qRT-PCR鉴定,根据基因上调表达量差异对所述耐淹候选基因进行排序,对排序后的所述耐淹候选基因的启动子序列进行分离与分析,筛选所述启动子序列中出现碱基多次缺失或插入或出现耐淹相关SNP的目标耐淹候选基因;5将所述目标耐淹候选基因进行转基因获得过量表达转基因植株进行耐淹胁迫实验,和对照野生型比较验证所述目标耐淹候选基因功能并最终确认10个耐淹检测标记基因;6将待检测柳树杂交群体子代采用所述步骤3的方法获得的所述根系与枝芽组织混合样与所述待检测柳树杂交群体子代的正常生长的所述根系与枝芽组织混合样用所述耐淹检测标记基因进行qRT-PCR表达量检测,如果有5个以上所述耐淹检测标记基因表达量出现显著上调,对应的柳树植株即为候选耐淹柳树新品系,将所述候选耐淹柳树新品系按所述步骤2进行所述耐淹指数分级,如果所述耐淹指数为3级或4级,则所述候选耐淹柳树新品系为耐淹柳树新品种。

全文数据:

权利要求:

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