【发明公布】一种PRRSV的IPMA抗体检测方法_新乡学院_202011240726.4 

申请/专利权人:新乡学院

申请日:2020-11-09

发明/设计人:王选年;李鹏;冯春花;王利平;高小静;李红;孙国鹏;岳锋;朱艳平;郭东光;张艳芳;齐永华;潘鹏涛

公开(公告)日:2021-02-12

代理机构:北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)

公开(公告)号:CN112362868A

代理人:王敏

主分类号:G01N33/569(20060101)

地址:453000 河南省新乡市金穗大道新乡学院

分类号:G01N33/569(20060101)

优先权:

专利状态码:在审-公开

法律状态:2021.02.12#公开

摘要:本发明公开了一种PRRSV的IPMA抗体检测方法,属于分子生物学检测技术领域。本发明公开的一种PRRSV的IPMA抗体检测方法,包括接毒、铺板、固定、加一抗、加二抗、显色。本发明PRRSV的IPMA抗体检测方法,细胞反应板可提前制备,可在‑20℃长期保存;反应结果可用显微镜进行观察;具有特异性强、敏感性高、操作简单、可长期保存的特点。IPMA方法利用活病毒接种,使用的是全病毒,抗原结构更加完整,结果更具有准确性和代表性。

主权项:1.一种PRRSV的IPMA抗体检测方法,其特征在于,具体步骤如下:1接毒:细胞瓶内细胞长至50-70%时,将100个TCID50的PRRSV病毒液接种到Marc145细胞上,加入含2%胎牛血清的DMEM培养基进行培养;2铺板:细胞长满后将其铺到96孔板内,每孔接种100μL,置于CO2培养箱中继续培养24h,观察细胞生长情况,待细胞长满后,取出96孔板;同时设立不接毒正常细胞对照孔;3固定:把取出的96孔板用PBS冲洗2-3次,然后用预冷的无水乙醇于-20℃固定30min,细胞反应板制备成功;4加一抗:把细胞反应板用PBS洗过2-3次,加入100μL用0.01MPBS1:400稀释的PRRSV标准阳性血清,置于37℃中作用1h;5加二抗:加入100μL用0.01MPBSpH7.4稀释1000倍羊抗猪IgG-HRP二抗,37℃作用1h;6显色:DAB显色5min,终止反应,置光学显微镜下观察显色结果。

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权利要求:

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