申请/专利权人：新乡学院

申请日：2020-11-09

公开（公告）日：2021-02-12

公开（公告）号：CN112362868A

主分类号：G01N33/569(20060101)

分类号：G01N33/569(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的撤回

法律状态：2022.01.07#发明专利申请公布后的撤回;2021.03.05#实质审查的生效;2021.02.12#公开

摘要：本发明公开了一种PRRSV的IPMA抗体检测方法，属于分子生物学检测技术领域。本发明公开的一种PRRSV的IPMA抗体检测方法，包括接毒、铺板、固定、加一抗、加二抗、显色。本发明PRRSV的IPMA抗体检测方法，细胞反应板可提前制备，可在‑20℃长期保存；反应结果可用显微镜进行观察；具有特异性强、敏感性高、操作简单、可长期保存的特点。IPMA方法利用活病毒接种，使用的是全病毒，抗原结构更加完整，结果更具有准确性和代表性。

主权项：1.一种PRRSV的IPMA抗体检测方法，其特征在于，具体步骤如下：1接毒：细胞瓶内细胞长至50-70％时，将100个TCID50的PRRSV病毒液接种到Marc145细胞上，加入含2％胎牛血清的DMEM培养基进行培养；2铺板：细胞长满后将其铺到96孔板内，每孔接种100μL，置于CO2培养箱中继续培养24h，观察细胞生长情况，待细胞长满后，取出96孔板；同时设立不接毒正常细胞对照孔；3固定：把取出的96孔板用PBS冲洗2-3次，然后用预冷的无水乙醇于-20℃固定30min，细胞反应板制备成功；4加一抗：把细胞反应板用PBS洗过2-3次，加入100μL用0.01MPBS1:400稀释的PRRSV标准阳性血清，置于37℃中作用1h；5加二抗：加入100μL用0.01MPBSpH7.4稀释1000倍羊抗猪IgG-HRP二抗，37℃作用1h；6显色：DAB显色5min，终止反应，置光学显微镜下观察显色结果。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 新乡学院 一种PRRSV的IPMA抗体检测方法

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