申请/专利权人：深圳博雅感知药业有限公司

申请日：2020-12-25

公开（公告）日：2021-04-06

公开（公告）号：CN112608892A

主分类号：C12N5/0775(20100101)

分类号：C12N5/0775(20100101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.11.14#授权;2021.04.23#实质审查的生效;2021.04.06#公开

摘要：本发明涉及血小板裂解物用于无血清分离和传代培养脐带间充质干细胞的方法。一方面，本发明涉及传代培养脐带间充质干细胞的方法，包括如下步骤：接种原代P0代间充质干细胞于培养瓶中，补充传代完全培养基，置CO2培养箱中培养至细胞融合度达70～80％时，弃旧培养基，用D‑hanks液清洗细胞后，加重组胰酶溶液消化细胞使细胞脱落，加D‑hanks液稀释，合并所有细胞悬液至离心管内，离心，用传代完全培养基使细胞沉淀重悬，得到P1代间充质干细胞；继续照此从P0代到P1代的传代培养方法获得后续代次例如至P10代的脐带间充质干细胞。还涉及用于脐带间充质干细胞传代培养的传代完全培养基。本发明方法和所用的培养基呈现如说明书所述优异技术效果。

主权项：1.传代培养脐带间充质干细胞的方法，包括如下步骤：b1按照5000cm2密度接种原代即P0代间充质干细胞于T225瓶中，补充传代完全培养基至45ml，置CO2培养箱5％CO2，37℃，饱和湿度中培养至细胞融合度达70～80％时一般第3天可达，弃旧培养基，用D-hanks液清洗细胞后，每瓶加5ml重组胰酶溶液消化细胞2min使细胞脱落，每瓶加D-hanks液15ml稀释，合并所有细胞悬液至50ml离心管内，离心，用传代完全培养基使细胞沉淀重悬，得到P1代间充质干细胞[接着可以取样进行细胞计数及活率测定]；b2按照5000cm2密度将P1代间充质干细胞接种于T225瓶中，补充传代完全培养基至45ml，置CO2培养箱5％CO2，37℃，饱和湿度中，参照P1传代培养方法，得到P2代间充质干细胞；接着照以上P1代和P2代的方法将细胞持续传代至P10代，得到各代次的间充质干细胞。

全文数据：

权利要求：

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